豚鼠及家兔rhIFNα-2b喷雾剂毒性试验与病理检查

目的观察rhIFNα-2b喷雾剂对豚鼠和家兔鼻腔黏膜是否具有刺激作用或伤害反应,同时观察其对上述动物内脏器官的毒性病理损伤。方法将rhIFNα-2b喷雾剂喷入豚鼠和家兔鼻腔进行局部刺激试验、急性毒性试验及长期毒性试验,各试验分别设空白对照组、稀释液对照组及实验组。长期毒性试验实验组按给药浓度不同分低、中、高3个剂量组。每组用4只动物,实验组给予rhIFNα-2b喷雾剂,稀释液对照组喷入喷雾剂稀释液,空白对照组未喷任何物质。临床观察后全部活杀。剖检鼻腔、咽部和喉部黏膜及内脏等器官,10%中性甲醛液固定,常规病理制片,光镜观察。结果鼻腔局部刺激试验、急性毒性试验及长期毒性试验中各实验组与稀释液和空白对照组之间的病理组织学所见相似,均未见明显毒性病理损伤。结论rhIFNα-2b喷雾剂对豚鼠和家兔的鼻腔黏膜及内脏器官均未见明显毒性作用,证实rhIFNα-2b喷雾剂具有可靠的安全性。

重组人干扰素α-2b对硬膜外瘢痕成纤维细胞影响的实验研究

目的探讨重组人干扰素α-2b(rhIFNα-2b)对体外培养的硬膜外瘢痕来源的成纤维细胞生物学作用的影响。方法制作兔椎板切除模型。利用体外细胞培养技术,通过MTT测定法、流式细胞术等方法观察、分析rhIFNα-2b对硬膜外瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响,数据采用方差分析及SNK-q检验处理。结果与对照组比较,实验组加入rhIFNα-2b后,硬膜外瘢痕成纤维细胞生长趋势及增殖活性被明显抑制,G1期细胞百分数明显增高。结论rhIFNα-2b对硬膜外瘢痕成纤维细胞的生长趋势及增殖活性有明显抑制作用,说明rhIFNα-2b在预防硬膜外瘢痕的形成中有一定的应用价值。

聚乙二醇修饰重组人干扰素α-2b修饰产物的初步分析研究

目的 对聚乙二醇(PEG)修饰重组人干扰素α-2b(rhIFNa-2b)的修饰产物进行了初步分析研究。方法以单甲氧基聚乙二醇甲酸琥珀酰亚胺酯对rhIFNα-2b进行修饰,修饰产物以Superdex 75 Highload制备型凝胶色谱柱进行分离、纯化,SDS-PAGE鉴定各组分,采用Mariner电喷雾飞行时间质谱对单修饰IFNα-2b(Inono-PEG-IFNα-2b)进行分析。结果 分别获得了纯化的mono-PEG-IFNα-2b和多修饰IFNα-2b(poly-PEG-IFNα-2b)。ESI-TOF质谱也证明mono-PEG-IFNα-2b分子量比rhIFNα-2b多5 000左右;紫外光谱分析表明,PEG修饰产物的结构没有发生改变。结论获得了纯化的PEG修饰产物。

重组人干扰素α-2b工程菌培养条件的优化研究

对重组人干扰素α-2b工程菌的培养条件、诱导条件进行研究.提高菌体目标蛋白表达量.通过实验条件的优化确定了适合重组人干扰素α-2b表达的诱导温度、诱导时间和诱导收获时间等.改进工艺后,目的蛋白的表达量大大提高,为进一步的下游工艺的开发奠定了基础.

重组人干扰素α-2b对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性的影响

目的:探讨重组人干扰素α-2b(rhIFNα-2b)在体外对乳腺癌细胞的影响。方法:以成人外周血单个核细胞(PBMNC)为对照,MTT法检测rhIFNα-2b对人乳腺癌MCF-7细胞增殖效果,TRAP-ELISA法检测其端粒酶活性。结果:rhIFNα-2b可抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,下调端粒酶活性,二者均呈剂量依赖性及时间依赖性。结论:rhIFNα-2b抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖作用可能与下调端粒酶活性有关。

丙种球蛋白联合重组人干扰素α-2b对重症手足口病患儿的免疫功能及血清细胞因子水平的影响

目的分析丙种球蛋白联合重组人干扰素α-2b(rhIFNα-2b)治疗重症手足口病(HFMD)患儿的效果。方法回顾性选取重症HFMD患儿97例,予以常规治疗,接受rhIFNα-2b治疗的48例为对照组,接受丙种球蛋白联合rhIFNα-2b治疗的49例为研究组,比较两组疗效、治疗前、治疗5d后血清细胞因子[白介素-6(IL-6)、白介素-1(IL-1)、γ-干扰素(IFN-γ)]水平。结果研究组总有效率93.88%高于对照组72.92%(P<0.05);治疗5d后研究组血清IL-6、IL-1、IFN-γ水平低于对照组(P<0.05);治疗5d后研究组CD3+与CD4+水平均较对照组升高(P<0.05)。结论丙种球蛋白联合rhIFNα-2b治疗重症HFMD患儿,疗效确切,可明显改善细胞因子水平,提高免疫功能。

重组人干扰素α-2b含片对小鼠免疫功能的影响

[目的]研究重组人干扰素α-2b(recombinedhumanInterferonα-2b,rhIFNα-2b)含片对小鼠免疫功能的影响。[方法]应用比色法、计数法及ELISA双抗体夹心法,分别测定在高(50000IU/只)、中(5000IU/只)、低(500IU/只)3种剂量rhIFNα-2b含片作用下,不同时间(10、20、30d)小鼠脾脏NK细胞毒指数、腹腔巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数和唾液IgA含量的变化。[结果]20d各剂量组NK细胞毒指数分别为(75.38±11.25)、(80.75±9.86)(、77.23±13.10)%,高于空白基质片组(46.95±10.42)%(P<0.001);20d各剂量组吞噬指数分别为(0.619±0.054)、(0.664±0.046)(、0.599±0.038)%,高于空白基质片组(0.396±0.021)%(P<0.001);20d各剂量组唾液IgA含量分别为(70.88±10.38)(、66.28±8.98)(、54.41±6.35)μg/mL,高于空白基质片组(35.67±3.51)μg/mL(P<0.001)。[结论]rhIFNα-2b含片具有提高小鼠免疫功能的作用。

干扰素对腭裂术后裸露骨面瘢痕成纤维细胞生物学影响的实验研究

目的：探讨干扰素（IFN）对体外培养的腭裂术后裸露骨面瘢痕来源的成纤维细胞生物学作用的影响。方法：制作兔腭裂术后裸露骨面瘢痕动物模型,利用体外细胞培养技术,通过MTT法、流式细胞术等方法观察、分析rhIFNα-2b和rhIFN-γ对腭裂术后瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响,数据采用方差分析及q检验处理。结果：与对照组比较,实验组加入干扰素后,腭裂术后瘢痕成纤维细胞的生长趋势及增殖活性及被明显抑制,S-G2-M期细胞百分数明显降低。结论：干扰素对腭裂术后瘢痕成纤维细胞的生长趋势及增殖活性具有明显抑制作用,说明在防治腭裂术后裸露骨面瘢痕的形成中有一定的应用价值。

基于PEGT/PBT新型材料的干扰素缓释微球的药动学研究

目的考察基于对苯二甲酸聚乙二醇酯-对苯二甲酸丁二醇酯共聚物(PEGT/PBT)的干扰素缓释微球在大鼠体内的药动学行为。方法大鼠皮下注射IFNα-2b注射液及缓释微球后,采集不同时间的血清样品,采用药典三部规定的干扰素活性检测方法细胞病变抑制法检测血清中的药物活性。结果大鼠分别皮下注射干扰素注射液及微球后,血药浓度-时间数据经3P97药动学软件处理后,均符合二室模型,呈一级动力学消除。IFNMs-600和IFNMs-2000微球在大鼠体内的消除半衰期分别是93.76和117.79h,分别是注射液消除半衰期(t1/2β=4.13h)的23.67和28.52倍,血药浓度-时间曲线下面积分别是注射液制剂的3.39和4.49倍。与注射液制剂相比,2组微球制剂的平均滞留时间(MRT)均显著延长(P均小于0.001)。结论基于PEGT/PBT新型材料的干扰素缓释微球具有良好的缓释效果,可以在大鼠体内持续释放半个月左右。