rhIL-3、rhGM-CSF对γ线照射恒致河猴造血损伤的作用

观察了国产白介素３（ｒｈＩＬ－３）和市售粒巨噬系集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）单用和伍用对恒河猴辐射后造血功能的改善作用。结果表明，单用ＩＬ－３２０μｇ／ｋｇ×２８天可提高３．５Ｇｙ照射猴白细胞最低值水平，缩短白细胞低水平的持续时间；减缓血小板的下降趋势。单用ＧＭ－ＣＳＦ使白细胞恢复提前，超常恢复时峰值可达照前的５００％。二者伍用兼有二种因子的效果，白细胞减少幅度小且时间短，恢复提前，回落平稳。两因子单用和伍用可使受照猴骨髓造血祖细胞比对照增多约３～９倍，但停药后迅速下跌。

rhIL－3对人骨髓粒单祖细胞集落的影响

应用骨髓细胞体外培养技术，观察了国产重组人白细胞介素３（ｒｈＩＬ－３）对人骨髓粒单祖细胞集落的影响。结果显示，ｒｈＩＬ－３能刺激正常骨髓细胞形成由粒细胞或（和）单核细胞构成的细胞集落，这种效应在一定范围内与ｒｈＩＬ－３剂量呈依赖关系。

rhIL-3和rhGM-CSF对人正常骨髓造血干细胞体外维持的作用

应用重组人白细胞介素3(rhIL-3)和重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)对18例正常人骨髓造血干细胞体外悬浮培养1周后,用琼脂集落培养测定CFU-CM的增殖程度。rhIL-3组的CFU-GM增至4.9±1.9倍;rhGM-CSF组增至4.7±1.6倍;rhIL-3+GM-CSF组增至11.5±5.4倍,均高于对照组(P<0.001)。rhIL-3+GM-CSF组的CFU-GM增殖量明显高于rhlL-3组和rhGM-CSF组。结果表明:rhIL-3和rhGM-CSF均能促使造血干细胞在体外短期维持中大量增殖,二者联合应用有协同作用。

rhIL-3增强急性髓性白血病细胞对柔红霉素敏感性的实验研究

目的：观察重组人白细胞介素３（ｒｈＩＬ３）刺激后ＡＭＬ细胞对柔红霉素（ＤＮＲ）敏感性的变化。方法：利用流式细胞仪（ＦＣＭ）、细胞形态学、联苯胺染色，观察ｒｈＩＬ３对ＡＭＬ细胞增殖与分化的影响；用荧光分光光度法测定ＡＭＬ细胞内ＤＮＲ浓度；用半固体培养法观察ＣＦＵＡＭＬ产率。结果：①ｒｈＩＬ３对体外培养的ＡＭＬ细胞具有促增殖作用，能增强ＡＭＬ细胞对ＤＮＲ的敏感性；②ｒｈＩＬ３或ｒｈＩＬ３联合ＤＮＲ对ＡＭＬ细胞无明显诱导分化作用；③ｒｈＩＬ３不影响ＡＭＬ细胞对ＤＮＲ的摄取与排泄平衡。结论：本实验为ｒｈＩＬ３与ＤＮＲ联合应用。

rhIL－3血清生物半衰期测定

家兔静注不同剂量ｒｈＩＬ－３，于不同时间取血，用ｒｈＩＬ－３依赖的ＴＦ－１细胞以ＭＴＴ比色分析法测其血清活性。结果表明，ｒｈＩＬ－３在家兔体内呈二房室模型，三个剂量组（１６．５，３３．０，６６．０μｇ·ｋｇ－１）ｒｈＩＬ－３活性变化规律相同。血清ｒｈＩＬ－３生物半衰期呈剂量非依赖性，ｔ１／２＝１．７０±０．０８ｍｉｎ，ｔ１／２β＝１３．２９±１．４７ｍｉｎ。

8mol/L脲中rhIL-3含量的测定

为解决8mol／L脉中rhIL－3的定量问题，以卵清蛋白作内标，进行常规SDS－PAGE后，作激光灰度扫描，并计算rhIL－3和卵清蛋白的峰面积，发现两种蛋白峰面积的比值与rhIL－3浓度在0．2－1．0mg／ml间呈良好线性关系。查标准曲线可以计算出8mol／L脲中rhIL－3的含量。重复性测定表明该法具有较好的重现性。

重组人白细胞介素－3在大肠杆菌中表达及纯化研究

将化学合成的人白细胞介素－３（ｈＩＬ－３）基因与表达质粒ｐＫＫ２２３－３重组并转化大肠杆菌ＪＭ１０５，重组菌在摇瓶中发酵并诱导表达，表达产量达菌体蛋白质总量的５３％以上。发酵菌经超声破碎后得到包含体，经洗涤处理使包含体纯度达９０％以上。用８ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍溶解包含体后直接透析复性，复性液经Ｓｅｐｈｏｒｏｓｅ－ＳＰ离子交换层析，得到纯化的重组ｈＩＬ－３，纯度达９８％。用ＴＦ－１细胞进行体外检测活性，比活达到１０８单位／ｍｇ蛋白质。本研究为重组人白细胞介素－３的大规模生产提供了条件。

人PBMC和脐血CD34^+细胞诱导DC2的实验方法研究

目的:探讨从人外周血单个核细胞(PBMC)和脐血CD34+造血干细胞(HSC)诱导DC2方法。方法:分别用rhIL-3(10ng/ml)+rhG-CSF(100ng/ml)和rhFlt-3L(100ng/ml)+rhIL-3(10ng/ml)+rhG-CSF(100ng/ml)诱导人PBMC和脐血CD34+HSC向DC2分化,并采用流式细胞仪分析细胞的表型,同时观察rhTNF-α和人CD40单抗诱导DC2分化成熟的作用。结果:rhG-CSFh+rhIL-3未能较好地从PBMC中诱导出DC2,但是从富集的脐血CD34+HSC用rhFlt-3L+rhIL-3+rhG-CSF诱导,可以获得相对较多的DC2,并有较高的扩增效率,但离临床研究和应用还有一定距离,因此DC2的诱导方法仍需进一步优化。人CD40单抗和rhTNF-α一样,能有效地诱导DC2分化成熟。结论:体外联合多种细胞因子从CD34+HSC成功地诱导出DC2,抗人CD40单抗有利于DC2的活化成熟。

重组人白细胞介素-3的长期毒性实验研究

目的 研究重组人白细胞介素 3 (Recombinanthumaninterleukin 3 ,rhIL 3 )长期应用对正常大鼠的毒性作用。方法 分设rhIL 3低剂量组 (5 μg·kg-1·d-1)、中剂量组 (10 μg·kg-1·d-1)、高剂量组 (2 5 0 μg·kg-1·d-1)及溶媒对照共 4组 ,每组 2 0只 ,每天皮下给药1次至 1、1 5、2及 3个月后 ,分别活杀 ,进行血液、尿液分析和循环免疫复合物检测 ,骨髓细胞培养 ,系统解剖及各脏器组织切片观察。结果 整个实验期动物精神食欲良好 ,无一死亡 ;血液和尿液生化、外周血象、骨髓造血细胞培养及循环免疫复合物等多项指标检测 ,各药物剂量及不同时相之间无显著差异 ;仅高剂量用药 3个月后可见骨髓组织有一定程度纤维化改变。心、肝、脾、肺、肾、脑等重要脏器组织均未见异常病理变化。结论 rhIL 3低剂量 (拟有效治疗剂量 )应用 3个月和中、高剂量应用 2个月 ,无毒副作用 ,具较好安全性 ,大剂量 (高于治疗剂量 5 0倍 )长期 (3个月 )应用可引起骨髓纤维化 。

重组人白细胞介素3对环磷酰胺所致犬造血损伤的治疗作用

白细胞介素3(interleukin-3,IL-3)又称多集落刺激因子(multi-colony stimulating factor),是作用于较早期阶段的具有广谱效应的造血刺激因子,对恶性贫血、再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征(MDS)以及各种继发性造血功能障碍疾病有显著疗效。本实验建立环磷酸胺(Cy)致家犬造血抑制的动物模型,用rhIL-3和碳酸锂(LC)进行对比研究,阐明rhIL-3的疗效、作用机理及毒副作用,为进一步研制和应用IL-3提供依据。