rhIL-10对小鼠T淋巴细胞及NK细胞活性的影响

目的 研究ｒｈ Ｉ Ｌ１０ 对小鼠免疫功能的影响。方法 用 Ｍ Ｔ Ｔ 还原法检测 Ｃｏｎ Ａ 诱导的 Ｔ 淋巴细胞增殖试验，中性红染色法检测 Ｎ Ｋ 细胞活性。结果 ｒｈ Ｉ Ｌ１０ 能抑制小鼠 Ｔ 淋巴细胞及 Ｎ Ｋ 细胞活性（ Ｐ＜ ００１） ，这种抑制作用随剂量增加而加强。结论 ｒｈ Ｉ Ｌ１０ 能抑制小鼠 Ｔ 淋巴细胞及 Ｎ Ｋ 细胞活性，并呈剂量依赖关系。

rhIL-10对肿瘤坏死因子-α诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响

目的观察重组人白细胞介素-10(rhIL-10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的成纤维细胞增殖的影响。方法体外培养NIH/3T3细胞,应用rhIL-10与TNF-α共同作用并设立对照进行比较,采用MTS/PES法确定NIH/3T3细胞的增殖状态。应用流式细胞仪测定细胞周期。结果TNF-α对NIH/3T3细胞增殖具有明显的刺激作用。rhIL-10单独应用对NIH/3T3细胞生长没有影响。在TNF-α刺激下,一定剂量的rhIL-10可抑制NIH/3T3细胞的增殖。rhIL-10可使TNF-α作用下的NIH/3T3细胞大部分处于G0/G1期。结论rhIL-10能明显抑制由TNF-α刺激的成纤维细胞增殖。

rhIL-10对银屑病动物模型的治疗作用及免疫功能的影响

目的 研究重组人白细胞介素 10 (rhIL 10 )对银屑病动物模型的治疗作用以及免疫功能的影响。方法 用小鼠雌激素期阴道上皮模型、鼠尾鳞片表皮模型观察重组人白细胞介素 10的抗银屑病作用 ,并检测ConA诱导T淋巴细胞增殖、LPS诱导B淋巴细胞增殖、NK细胞活性及细胞因子(IFN γ、IL 2、IL 1、TNF α)水平。结果 rhIL 10 (5 ,2 0 ,80μg·kg-1·d-1,sc)对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂有抑制作用 ,促进小鼠尾鳞片颗粒层的形成。对ConA诱导T淋巴细胞增殖反应及IL 2、IFN γ产生有抑制作用 ;对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生IL 1、TNF α具有抑制作用 ;对NK细胞活性有抑制作用 ;对LPS诱导B淋巴细胞增殖有促进作用。结论 rhIL 10可能是通过抑制表皮细胞增殖与促进其分化 。

重组人白介素10对离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察重组人白介素１０（ｒｈＩＬ－１０）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响。方法 离体培养大鼠胸主动脉 ＶＳＭＣ并分别接受不同浓度ｒｈＩＬ－１０、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）、血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ－ＢＢ）的刺激，采用ＭＴＳ／ＰＥＳ 法确定ＶＳＭＣ的增殖状态并与对照组比较。结果 与对照组相比，ＴＮＦ－α和ＰＤＧＦ－ＢＢ均对ＶＳＭＣ增殖具有明显的刺 激作用（Ｐ＜０．０５）。单独应用ｒｈＩＬ－１０对血管平滑肌细胞生长没有影响。在ＴＮＦ－α和ＰＤＧＦ－ＢＢ分别刺激下，ｒｈＩＬ－１０均可 抑制ＶＳＭＣ的生长（Ｐ<０．０５）。结论 ｒｈＩＬ－１０可抑制细胞因子和生长因子诱导的ＶＳＭＣ增殖。

IL-10与可溶性鸡Ⅱ型胶原对实验性关节炎的联合治疗作用

目的 :考察重组人白细胞介素 10 (rhIL 10 )对可溶性鸡Ⅱ型胶原 (SCCⅡ )治疗大鼠佐剂性关节炎(AA)疗效的影响。方法 :通过测量足肿胀度、体重、胸腺与脾脏系数 ,观察不同部位淋巴细胞ConA增殖反应并检测腹腔巨噬细胞 (PMΦ)与滑膜组织细胞(SMCs)产生IL 1的水平。结果 :与SCCⅡ(0 .0 3mg·kg-1·d-1,ig)或IL 10 (1,2 μg·d-1,sc)单独治疗比较 ,二者联合治疗大鼠AA ,明显改善上述观察指标 ,同时使SCCⅡ的口服耐受诱导期缩短 ,增强了治疗效果。结论 :IL 10能提高SCCⅡ治疗大鼠AA的治疗效果。

重组人白细胞介素-10融合表达载体的构建及其在BL21(DE3)pLysE细菌细胞中的表达

目的 构建重组人白细胞介素 10 (recombinanthumaninterleukin 10 ,rhIL 10 )融合蛋白的表达载体 ,并在大肠杆菌中表达。方法 应用RT PCR方法扩增IL 10基因 ,克隆PCR产物 ,构建PCRR○T7/NT TOPOR○ IL 10重组质粒 ,以AppiedBiosystems 370 0DNA分析仪进行分析。构建成功的重组质粒转化大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysE细胞 ,经 12 %SDS PAGE鉴定融合表达蛋白。结果 PCRR○T7/NT TOPOR○ 质粒已载入rhIL 10基因 ,其序列与理论设计完全一致 ,表达质粒在BL2 1(DE3)pLysE中得到高效表达 ,产物主要以包涵体形式存在。结论 已成功构建重组PCRR○T7/NT TOPOR○ IL 10质粒载体 ,并在大肠杆菌BL2 1(DE3)

重组人白介素-10对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨重组人白介素-10(rhIL-10)对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用及可能机制。方法:显微镜下夹闭左肺动静脉和左主支气管建立单肺缺血再灌注模型。72只Wistar大鼠随机分为对照组(Control组)、缺血再灌注组(IR组)、rhIL-10药物干预组(rhIL-10组),每组分为缺血45min、再灌注60、120min 3个时间点。每个时间点8只,共24只。按上述时间点处死收集标本,检测血浆TNF-α、丙二醛(MDA)水平,观察肺组织病理变化。结果:各组MDA在缺血45min时差异无统计学意义(P>0.05),再灌注60min和120min时IR组明显升高,而rhIL-10组虽较Control组升高,但明显低于IR组(P<0.05)。与Control组比较,IR组缺血45min时TNF-α水平明显升高(P<0.05),rhIL-10组无明显变化(P>0.05)。再灌注60min和120min时IR组TNF-α水平较Control组明显升高(P<0.05),而rhIL-10组虽较Control组显著升高(P<0.05),但明显低于IR组(P<0.05)。肺病理提示肺泡间隔及肺泡内炎性细胞浸润,肺泡腔内大量炎性细胞渗出、出血,且随着再灌注时间的延长,损伤加重。rhIL-10组病理损伤均较IR组为轻。结论:rhIL-10可能通过抑制氧自由基生成、中性粒细胞浸润、TNF-α反应对肺缺血再灌注损伤起保护作用。

国产重组人白介素—11衍生物治疗化疗引起血小板减少的临床研究

目的 :观察国产重组人白介素— 11衍生物 (rhIL— 11Ala10 )对恶性肿瘤患者化疗所致血小板减少的疗效及其不良反应。方法 :采用自身对照试验的方法 ,对 11例曾因化疗引起血小板减少的恶性肿瘤患者 (外周血Plt<75× 10 9/L) ,给予rhIL— 11Ala10 预防性治疗。第 1周期单用化疗 ,第 2周期化疗联合rhIL— 11Ala10 。rhIL— 11Ala10 按 4 0ug/kg·d剂量每日皮下注射 ,连续 10天。结果 :对照周期 :化疗后血小板最低均值 4 4 6± 12 2× 10 9/L ,血小板低于 10 0× 10 9/L平均天数 9 8±3 4天 ,2例需输注血小板。研究周期 :化疗后血小板最低均值 10 1 3± 2 0 6× 10 9/L(P <0 0 5 ) ,血小板低于 10 0 /L平均天数2 4± 1 9天 (P <0 0 5 ) ,无l例输注血小板。主要不良反应 :谷丙转氨酶升高 (9 0 % ) ,尿素氮升高 (9 0 % ) ,头痛 (9 0 % ) ,乏力 (2 7 3% ) ,肌肉、关节痛 (2 7 3% ) ,结膜充血 (9 0 % )。结论 :国产重组人白介素 1l衍生物 (rhIL 11Ala10 )具有提升化疗后血小板的作用 ,预防性用药可减轻血小板下降的幅度及缩短血小板低下的持续时间 ;不良反应可耐受。

重组人白细胞介素11生物学活性测定方法研究

目的建立重组人白细胞介素 11(rhIL 11)生物活性测定方法。方法运用单克隆方法筛选出rhIL 11敏感细胞株T 10 ,采用溴化四唑蓝比色法进行rhIL 11生物活性测定 ,采用四参数方程对测定结果进行计算。结果以世界卫生组织国际标准品作为参照品 ,与美国Genetics公司rhIL 11上市产品NeumegaTM进行测定比较 ,结果显示国内同类产品与其生物活性一致 ,RSD均小于 10 %。结论此方法可用于rhIL

重组人白细胞介素10在毕赤酵母中的表达及生物学活性测定

目的在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人白细胞介素10(rhIL-10),用于IL-10的生理功能研究和动物试验。方法通过PCR扩增IL-10基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的XhoⅠ和EcoRⅠ酶切位点处,再将融合基因αIL-10重组到表达质粒pPIC9K的BamHⅠ和EcoRⅠ之间,SalⅠ酶切线性化重组质粒IL-10/pPIC9K,电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的基因IL-10,甲醇诱导rhIL-10的表达,SDS-PAGE和Westernblot鉴定目的蛋白,用ELISA定量测定及MC/9细胞分析IL-10生物学活性。结果成功构建了重组表达质粒IL-10/pPIC9K,获得了4个含IL-10基因的高拷贝毕赤酵母转化子,甲醇诱导后,在摇瓶水平的IL-10表达量为(0.627±0.09)mg/L,比活性为1.5×105U/mg。结论毕赤酵母分泌表达的IL-10具有良好的生物学活性。