体外培养系统中各细胞组分在IL-18诱导的肿瘤特异性CTL中的作用

应用rhIL 18在体外培养系统 (coculturesysteminvitro ,CCS )中诱导肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞 (cytotoxicTlympho cyte ,CTL ) ,探索不同细胞在IL 18起动和促进肿瘤特异性免疫应答方面的作用。采用StemSepTM免疫磁性细胞分离法分离人外周血NK细胞、T细胞及树突细胞 (DC ) ,流式细胞仪分析细胞表型 ,12 5I UdR标记的细胞毒实验检测杀伤活性。结果表明 ,在肿瘤抗原存在的条件下 ,CCS中rhIL 18能够诱导并促进CTL介导的肿瘤特异性杀伤效应 ;并且 ,在rhIL 18诱导肿瘤特异性CTL的过程中 ,rhIL 18、NK细胞、DC及T细胞均起着十分重要的作用 ,缺少任一组份 ,均对诱导肿瘤特异性CTL有明显差异 (P <0 0 1)。提示在CCS中 ,rhIL 18诱导的NK细胞快速杀伤效应及DC的抗原提呈作用 ,在肿瘤特异性CTL产生过程中 ,均起着决定性的作用。

重组人IL-18对核辐射损伤小鼠脾细胞因子的影响

为了探讨重组人IL-18(rhIL-18)对核辐射损伤后小鼠脾细胞因子的免疫调节作用,对32只C57小鼠分4组进行核辐射损伤,2周后取小鼠脾淋巴细胞体外培养,用试剂盒测定其培养上清中IL-2、IFN-γ、GM-CSF、IL-4和脾细胞抗体形成量,观察rhIL-18对核辐射损伤小鼠脾细胞因子的免疫调节作用。结果表明与对照组比较,rhIL-18能够提高核辐射损伤前后小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ、GM-CSF和IL-2的能力,辐射损伤后应用rhIL-18组的细胞因子水平高于核辐射损伤前应用rhIL-18组;但对IL-4分泌能力和脾细胞抗体形成量没有影响。结论:rhIL-18具有促进核辐射损伤小鼠脾细胞分泌IL-2、IFN-γ和GM-CSF的作用。

重组人IL-18对核辐射损伤小鼠免疫功能的影响

为探讨重组人IL-18(rhIL-18)对核辐射损伤小鼠免疫功能的影响,对32只小鼠分4组进行核辐射损伤,然后观察rhIL-18对其免疫功能的调节作用。结果表明,rhIL-18能够提高核辐射损伤后小鼠的T、B淋巴细胞转化能力、增强NK细胞对肿瘤细胞的杀伤能力、上调CD4+T细胞的数量,但对IgG产生能力没有调节作用。结论:rhIL-18对核辐射后小鼠免疫功能损伤有促进恢复的作用。

人白细胞介素18(hIL-18)的纯化及生物学活性的鉴定

目的 :在大肠杆菌中高效表达重组人IL 18(rhIL 18)蛋白 ,制备具有高纯度、高活性的rhIL 18。方法 :用IPTG诱导重组蛋白表达载体pKK2 2 3 3 hIL 18进行蛋白表达 ;菌体经超声破碎分离包含体 ,并对包含体进行洗涤、变性和复性处理 ,用DEAE SepharoseCL 6B阴离子交换柱纯化复性的rhIL 18;以人外周血单核淋巴细胞 ,通过T细胞增殖实验、1 2 5I UdR标记的细胞毒实验、ELISA方法检测细胞因子的产生量等方法 ,测定rhIL 18的生物学活性。结果 :在大肠杆菌中成功地诱导、表达了rhIL 18,SDS PAGE凝胶电泳分离显示在分子量大约 18 3kD处有一诱导蛋白带 ,Westernblot证明表达产物与抗IL 18单克隆抗体有特异性免疫反应 ;表达产物经纯化后纯度达 94 % ;表达的rhIL 18蛋白具有促进T细胞增殖、增强NK细胞细胞毒作用及诱导外周血单核淋巴细胞合成IFN γ的能力 ,基本上具有天然IL 18相同的生物学活性。结论 :为rhIL 18的获得及为进一步研究其生物学功能提供了一定的条件 ,并为将rhIL 18用于肿瘤的免疫生物治疗奠定了基础。

重组人IL- 18的高效表达、纯化及诱导KG—1细胞产生高水平IFN-γ

目的 研究IL－18在大肠杆菌中高效表达及纯化工艺，并诱导KG－1 细胞产生IFN－γ。 方法利用RT－nPCR从正常人胎肝组织中扩增获得人IL－18基因，克隆于pThiohisA载体，转化宿主菌BL－21，1mmol/LIPTG；诱导，表达产物以包涵体形式存在，经2％Triton X－100洗涤，在 8mol/L尿素下变性阴离子柱层析，透析复性后再经凝胶过滤纯化，通过纯化产物诱导入骨髓瘤单核细胞 KG－l（ATCC CCL－246）产生 IFN－γ，并检测其生物学活性。结果 获得了在大肠杆菌中的稳定高效表达，表达的目的蛋白占菌体总蛋白的25％左右，纯化后纯度可达95％以上，具有显著的刺激细胞产生IFN－γ的活性。结论 制备具有生物学活性高纯度的rhIL－18方法的建立，为基础研究与临床应用开发奠定了基础。