重组人白介素-6(rhIL-6)对γ线照射小鼠外周血细胞恢复的影响

在８０～９０ｄ日龄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠上观察了１０～１０００μｇ／ｋｇｄ－１４种剂量ｒｈＩＬ－６对６．５Ｇｙγ线（１３２～１２７．７Ｒ／ｍｉｎ）照射后外周血细胞恢复的影响；观察时间持续至照射后３０天。结果表明：白细胞、红细胞和血小板计数的动态变化时间进程给药组和对照组相似，但总的趋势表明给药组各种血细胞计数的最低值高于对照组、各时间点的恢复情况均不同程度地优于对照组；除１０μｇ组外均有一部份时间点统计学差别显著，而５００和１０００μｇ剂量组效果尤为显著。血红蛋白含量和ＲＢＣ比积的变化与ＲＢＣ数一致。相关系数分析结果表明在一部分时间点上，外周血细胞数有明显的药量依赖性。照后２２天ＷＢＣ数、１４和１８天ＲＢＣ数以及１１和１８天ＰＬＴ数的剂量效应回归方程均具有统计学意义。本文结果表明：皮下注射ｒｈＩＬ－６剂量达到２００μｇ／ｋｇｄ－１以上连续４ｄ可减轻６．５Ｇｙ照射小鼠外周血细胞数下降程度并促进其恢复。其机制可能是通过ＩＬ－６对造血干、祖细胞增殖与分化的改善而起作用。

rhIL-6对血小板低下豚鼠的治疗作用

采用抗血小板血清和致死照射两方法建立了两种豚鼠血小板低下模型，进而观察了rhIL－6治疗时豚鼠生存率及生存期的影响，以及与血小板数量的关系。结果表明，rhIL－6可明显提高豚鼠的生存率并延长生存期，rhIL－6的这种生物学效应主要与其提高豚鼠血小板数量有关，与其它血常规指标无关。

rhIL-6促进致死性辐射损伤小鼠凝血及早期造血功能的恢复

目的：观察ｒｈＩＬ－６对小鼠造血功能的影响。方法：应用致死性６０Ｃｏ－γ射线辐射Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，造成骨髓型辐射损伤模型。照射后用ｒｈＩＬ－６皮内注射给药６ｄ（２μｇ／只，２次／ｄ），通过检测出凝血时间（ＢＴ，ＣＴ）、凝血酶原时间（ＰＴ）、外周血ＰＬＴ和ＷＢＣ，以及骨髓造血细胞体外培养ＣＦＵ－Ｍｉｘ和脾脏ＣＦＵ－Ｓ的数目，研究了ｒｈＩＬ－６对骨髓型辐射损伤小鼠早期造血功能恢复的效应，并进行了机理的探讨。结果：ｒｈＩＬ－６处理组小鼠的ＢＴ，ＣＴ和ＰＴ均较对照组显著缩短（Ｐ＜０．０１）；外周血ＰＬＴ和ＷＢＣ分别较对照组提高１３０％和１６５％。骨髓造血细胞体外培养ＣＦＵ－Ｍｉｘ和脾脏ＣＦＵ－Ｓ计数，均显著高于对照组（Ｐ＜０．０１）。结论：ｒｈＩＬ－６具有促进受辐射小鼠早期造血细胞恢复的生物学效应，可减轻辐射所致骨髓损伤和促进造血干／祖细胞（ＨＳＣ／ＨＰＣ）的增殖、分化，有利于骨髓造血功能的恢复。

rhIL-6大肠杆菌高效表达的影响因素及其产品中试的研究

研究自构建的重组人白细胞介素－ ６（ｒｈＩＬ－６）基因工程菌株高效表达的影响因素及其ｒｈＩＬ－６产品中试工艺。方法：①将ｒｈＬ－６－ＰＢＶ重组质粒转化至ＲＲＩ、ＪＭ１０３和 ＤＨ５ ａ不同宿主菌中，在Ｍ９ＣＡ和 ＬＢ培养基中，４２℃诱导培养不同时间（３～６ ｈ），观测 ｒｈＩＬ－６不同表达效率。②采用 １０ Ｌ发酵罐诱导培养，经破菌－洗包－溶包初步纯化后，再经三步柱层析纯化，提取ｒｈＩＬ－６。结果：①ｒｈＩＬ－６在ＤＨ５ ａ大肠杆菌中（ＳＤＨ－９４５株）表达效率高；可达 ３９％，用 Ｍ９ＣＡ培基，４２℃诱导培养 ５ｈ可使表达效率提高到４１％，②ＳＤＨ－９４５菌株在５批 １０Ｌ Ｍ９ＣＡ发酵诱导培养 ５ ｈ，ｒｈＩＬ－６表达效率可达 ３５． ８７±２． ６５％。经初步纯化后，ｒｈＩＬ－６的纯度达 ７４． ８７±３． ６８％，再经三步柱层析后，纯度可达 ９５％以上，比活性达 ４ × １０８ Ｕ／ｍｇ，总得率稍低可达 ２３．１％．结论：①ＳＤＨ－９４５工程菌株在 Ｍ９ＣＡ培养基巾，４２℃诱导培养 ５ ｈ，ｒｈＩＬ－６表达效率最佳。②１０ Ｌ发酵和纯化工艺可获高效价、高比活性、高纯度的ｒｈＩＬ－６合格生物制品。

rhIL-1β、rhIL-2和rhIL-6对体外培养海马神经胶质细胞c-fos表达的影响

采用免疫组织化学方法观察了重组人白细胞介素-1β、重组人白细胞介素-2和重组人白细胞介素-6对体外培养大鼠海马神经胶质细胞c-fos表达的影响。结果证明，培养12d的海马神经胶质细胞与重组人白细胞介素-1β（100U／ml）、重组人白细胞介素-2（200U／ml）和重组人白细胞介素-（200U／ml）一起孵育2h后出现FOS-免疫反应阳性的细胞核，随着所给剂量的逐渐加大，FOS反应阳性胞核数量也逐渐增多．图象分析的结果显示，FOS反应阳性胞核的平均光密度亦随剂量的逐渐加大而逐渐增加．本研究的结果提示：重组人白细胞介素-1β、-2及-6均能诱导体外培养大鼠海马神经胶质细胞c-fos的表达。说明三者对体外培养的海马神经胶质细胞具有生物学作用。推测c－fos表达可能是这些细胞因子发挥生物效应的重要中间途径。

rhIL-6对致死性辐射损伤小鼠早期造血功能恢复的实验研究

目的:本研究为观察rhlL-6对小鼠造血功能的影响。方法:应用致死性(?)Co-Y射线辐照BALB/c小鼠,造成骨髓型放射损伤模型。在照射后用rhIL-6皮内注射给药6天(2pg/Bid/只),通过检测出、凝血时间(BT、CT)、凝血酶原时间(PT)、外周血PLT和WBC,以及骨髓造血细胞体外培养CFU-Mix和脾脏CFU-S的数目,研究rhIL-6对骨髓型放射损伤小鼠早期造血功能恢复的效应,并进行机理的探讨。结果:rhIL-6处理组小鼠的BT、CT和PT均比对照组显著缩短(P<0.01),外周血PLT和WBC分别比对照组提高130％和165％,促进造血干/祖细胞(HSC/HPC)增殖、分化。骨髓造血细胞体外培养CFU-Mix和脾脏CFU-S计数均显著高于对照组(P<0.01)。结论:以上说明rhIL-6具有促进造血干/祖细胞(HSC/HPC)增殖,分化有利于受照小鼠早期造血细胞恢复的生物效应,可减轻辐射所致的骨髓造血功能的损伤。

大鼠gp130反义寡核苷酸阻断rhIL-6对大鼠急性髓系白血病细胞系R2体外增殖的抑制效应(英文)

IL 6受体 (IL 6R) β链是分子量为 130kD的膜结合糖蛋白 (gp130 ) ,它是介导IL 6生物效应的信号转导子。我们的实验已经证实了重组人IL 6 (rhIL 6 )可作用于大鼠急性髓系白血病细胞系R2 ,rhIL 6与R2细胞表达的hIL 6R结合并与大鼠 gp130缔合而转导IL 6的信号 ,产生其生物效应。本文在体外液体培养中试验观察到 ,大鼠 gp130的反义寡核苷酸片段被摄入R2细胞后 ,对rhIL 6生物效应产生明显的影响。我们的研究结果表明 ,所合成的大鼠gp130反义寡核苷酸片段在细胞体外液体培养中可部分阻断rhIL 6对R2细胞的增殖抑制效应 ,在最适的终浓度 ,其阻断率可达 (45± 7) %。

EFFECT OF rhIL-6 ON EARLY HEMATOPOIETIC RECOVERY IN IRRADIATED MICE

The effect of recombinant human interleukin-6 ( rhIL-6) on the early phase of post-irradiation hematopoietic recovery ( mainly CFU-S, CFU-GM and CFU-E) has been studies in 6.5 Gy gamma-irradiated C57BL / 6J mice, which had been given subcutaneous injection of rhIL-6 b. i. d. at 10, 100, 200, 500 and 1 000μg/kg/d for 4 or 6 consecutive days started from 30 min after irradiation. It was shown that the effect of IL-6 on the early phase of post-irradiation hematopoietic recovery is dose-dependent and diphasic. At the doses of 200-1000μ/kg/d, IL-6 had a favorable effect on post-irradiation hematopoietic recovery expressed as increse of spleen weight and CFU-S, and elevation of CFU-GM yield and total CFU-GM content in femur. Administration of relatively low doses of IL-6(10-100 μg/kg/d) suppressed postirradiation hematopoietic regeneration. High a dose (1 000μg/kg/d) did not show any stronger stimulative effect on post-irradiation hematopoietic reconstitution. There is an optimal range of IL-6 dose for

rhIL-6促进血小板恢复的优化应用条件的研究

目的：研究不同给药条件对ｒｈＩＬ－６药效的影响，优化给药方式。方法：以γ射线照射６．５Ｇｙ的ＬＡＣＡ小鼠为造血系统损伤模型，分别按不同的给药途径（皮下或腹腔注射）、每日次数（每天１次或分２次给药）、每日剂量（５００μｇ·ｋｇ－１·ｄ－１×４，２５０μｇ·ｋｇ－１·ｄ－１×８）和开始治疗时间（照后３０ｍｉｎ、１２ｈ、２４ｈ和７２ｈ）等给ｒｈＩＬ－６，观察照后第１１、１４、１８和２２天外周血细胞数的变化。结果：发现ｒｈＩＬ－６采用每日２次皮下注射给药时血小板数显著高于对照组，亦高于每日１次皮下注射组和每日２次腹腔注射组；在有效剂量范围内和总给药剂量相同时，降低每日给药剂量相应延长给药时间并不降低ｒｈＩＬ－６的药效；ｒｈＩＬ－６不同开始治疗时间各组血小板（ＰＬＴ）升高幅度依次为照后１２ｈ、３０ｍｉｎ、２４ｈ和７２ｈ，其中２４ｈ前３个给药组血小板数比对照组升高有统计学意义。结论：ｒｈＩＬ－６促血小板生成较佳的条件是在照射后２４ｈ内（最好在照后１２ｈ）给药，每日２次皮下注射；当给药剂量较大时，可采用减少每日剂量，延长给药时间方案。

rhIL-24刺激PBMC产生IFN-γ、IL-6的初步研究

目的 研究重组人白细胞介素24(rhlL-24)对外周血单个核细胞产生γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素6(IL-6)的刺激效应。方法 正常人的外周血单个核细胞(PBMC)经含有rhlL-24的CHO细胞表达上清刺激48 h、72 h,取其刺激PBMC培养上清液用酶联免疫吸附试验((ELISA)法测定IFN-γ和IL-6含量。结果 加含rhlL-24的CHO细胞表达上清的实验组上清中IFN-γ和IL-6含量明显高于对照组(P<0.01)。结论 rhlL-24对外周血单个核细胞分泌IFN-γ和IL-6具有刺激效应,说明rhlL-24具有明显的免疫调节功能。导师。

rhIL-6,rhGM-CSF和rhEPO对造血干细胞的作用

据《中华内科杂志》1994年33卷第5期报道 北京医科大学第三医院血液科,用三种细胞因子对人正常造血干细胞进行了体外观察。 结果表明:重组人白细胞介素(rhIL-6)和重组人-单细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)与正常人造血干细胞培养1周后,IL-6组细胞数增至4.3±0.6倍;CM-CSF组细胞数增至9.4±0.9倍,IL-6+CM-CSF组细胞数增至13.7±1.0倍,明显高于对照组(P【0.01)。CFU-E集落分析结果:IL-6单独应用未见CFU-E集落形成,仅有CFU-GM集落形成;IL-6+EPO(促红细胞生成素)组则CFU-E集落数明显高于EPO组(P【0.01)。

rhIL-6对辐射小鼠的保护及其对血小板损伤作用的拮抗效应

目的研究国产ｒｈＩＬ－６对造血系统的作用及其抗辐射效应。方法选用Ｃ５７ＢＬ／６小鼠，分别腹腔注射生理盐水（ＨＢＳＳ）或ｒｈＩＬ－６，然后致死全身照射或先致死全身照射后腹腔注射ＨＢＳＳ或ｒｈＩＬ－６。结果ｒｈＩＬ－６在辐射后对小鼠具有治疗效果，平均生存期由９．３天延长至１２．７天，对ＲＢＣ、ＨＧＢ、ＨＣＴ、ＰＬＴ均有明显的促再生作用，ｒｈＩＬ－６预防注射亦可拮抗辐射的致死效应，平均生存期由９．３天延长至１１．５天。结论ｒｈＩＬ－６在体内具有促进血细胞再生作用，从而延缓致死辐射所致死亡。

重组人白细胞介素3和白细胞介素6对骨髓基质细胞生长的调节作用

目的了解重组人白细胞介素３（ｒｈＩＬ－３）和重组人白细胞介素６（ｒｈＩＬ－６）对骨髓造血微环境的调节作用。方法应用成纤维细胞体外集落形成法，观察了ｒｈＩＬ－３和ｒｈＩＬ－６对成纤维细胞集落（ＣＦＵ－Ｆ）体外生长的影响。结果ｒｈＩＬ－３和ｒｈＩＬ－６能显著地刺激ＣＦＵ－Ｆ的生长，两者联合应用时对ＣＦＵ－Ｆ生长的刺激作用明显强于两者单用，表现出协同效应。结论ｒｈＩＬ－３和ｒｈＩＬ－６可促进基质细胞生长。

重组人白细胞介素-6抑制BTT_(739)小鼠膀胱癌生长和转移的实验研究

目的 探讨重组人白细胞介素 6对小鼠膀胱癌BTT739生长和转移的抑制作用。方法将BTT739肿瘤细胞接种于T739近交系小鼠皮下 ( 2 6× 10 5/小鼠 ) ,2 4只小鼠随机分成 3组 ,第 3天始分别给予对照组溶剂 ( 0 9NS) 0 3mL ,治疗组重组人白细胞介素 6( 4× 10 6IU kg) ,日 2次 ,腹腔注射 ,共 2 0天 ,阳性对照组MMC ( 1mg kg)日 1次 ,腹腔注射计 14天。第 2 5天测对照组和治疗组的皮下瘤重及肺转移率 ,分别进行t检验和 χ2 检验。结果 两组皮下瘤重分别为 11 4± 1 9g和 7 4± 0 8g ,重组人白细胞介素 6有明显抑制BTT739肿瘤生长作用 ,抑瘤率 35 1% (P<0 0 5) ,而对肺转移灶数目及转移灶大小的抑制率分别为 61 3%和 2 6 2 % (P值均 <0 0 5) ,有显著性差异。结论 重组人白细胞介素 6可明显抑制BTT739小鼠膀胱癌生长和转移。

重组人白细胞介素6部分生化物理学性质的鉴定

采用工程菌 E.coli DH5 α(p IB- h IL- 6 ) ,经过发酵培养、表达和包含体的分离纯化等步骤 ,获得了 N端缺失 5个氨基酸的 rh IL- 6纯品。对其理化生物学性质进行分析。结果表明 ,纯品 N-端氨基酸序列为 MEDSKD… ;在 2 76 nm波长处有一个特异的蛋白吸收峰 ;分子量为 2 1 487.2 ;裂解的肽段分布在理论值的肽段分布范围之内 ;p I为 6 .1 ;能与兔抗人 IL- 6抗体特异性结合 ;比活性达2 .0 5× 1 0 8IU/mg。

三株抗rhIL－6单克隆抗体识别表位的鉴定及IL－6的双单克隆抗体夹心RIA检测方法的建立

采用放射免疫标记抗体竞争结合法，对３株抗ｒｈＩＬ－６单克隆抗体识别的表位进行了鉴定。按识别表位的不同，将３株单克隆抗体分为两组：一组ＳＩ８，ＳＩ９识别相同或相近的表位，另一组ＳＩ７。在表位鉴定的基础上，选择识别不同表位的单克隆抗体，由此获得最佳组合，灵敏度为８０ｐｇ／ｍｌ。通过对肾脏病人血清ＩＬ－６水平检测，所得结果与以ＩＬ－６依赖株Ｂ９生物学检测结果一致，且重复性好，特异性强。

基因工程人白介素-6中试工艺研究

本研究对基因工程人白介素－6成熟肽在大肠杆菌中的表达、纯化及检定做了一系列的研究，建立了一套罐培养诱导表达，乙酸裂解包涵体，复性及纯化的中试工艺，并制备3批半成品，经检定各项指标已接近国家基因工程产品质控标准。

人重组白细胞介素-6可减少缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元的DNA损伤

用原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）法观察人重组白细胞介素－６（ｒｈＩＬ－６）对缺氧－复氧后大鼠海马培养神经元的ＤＮＡ损伤的影响。结果显示，海马神经元缺氧－复氧后ＤＮＡ损伤神经元百分率明显增高，经ｒｈＩＬ－６ 预处理的海马神经元缺氧－复氧后ＤＮＡ损伤神经元百分率明显低于对照组。本结果表明，缺氧－复氧能使体外培养海马神经元发生ＤＮＡ损伤，ｒｈＩＬ－６ 可减少缺氧－复氧后海马神经元的ＤＮＡ损伤。提示ｒｈＩＬ－６ 对海马神经元缺氧－复氧损伤可能具有一定保护作用。

聚乙二醇化重组人白细胞介素-6的放射性碘标记条件探讨

采用双相氯胺-T法对聚乙二醇化重组人白细胞介素-6(PEG-rhIL-6)进行碘化标记,比较了双相氯胺-T法碘化标记PEG-rhIL-6在不同反应条件下的标记效果。用三氯乙酸沉淀法和γ计数探测仪测定标记物的标记率、超滤离心法对标记物进行分离纯化、三氯乙酸沉淀法鉴定标记物的放化纯度、SDS-PAGE电泳分析标记蛋白断链损伤情况。结果表明,采用该方法标记PEG-rhIL-6,在100μL、pH值7.4的反应体系中,控制反应蛋白量为25μg、浓度20g/L的氧化剂15μL、室温反应时间40—50min,可获得较高的标记率和放化纯度,比放射性适中,标记效果比较理想。

重组人白细胞介素—3和重组人白介素—6对骨髓成纤维 …

为了了解重组人白介素－３（ｒｈＩＬ－３）和重组人白介素－６（ｒｈＩＬ－６）对骨髓造血环境的调节作用，应用基质细胞全外基落形成法研究了ｒｈＩＬ－３和ｒｈＩＬ－６以及两者联合地成纤维集落（ＣＦＵ－Ｆ）体外生长的影响，结果显示：ｒｈＩＬ－３和ｒｈＩＬ－６能显著地刺激ＣＦＵ－Ｆ的生长，而且两者联合应用时表现出对ＣＦＵ－Ｆ的生长具有协同作用。提示，ｒｈＩＬ－３和ｒｈＩＬ－６可促进基质细胞的生长。