重组人淋巴毒素α缺失体的表达、纯化及鉴定

目的 :构建重组人淋巴毒素α缺失体 (rhLT αΔN2 7)的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达 ,建立纯化rhLT αΔN2 7的工艺。方法 :从Jurkat细胞中提取总RNA ,用RT PCR扩增rhLT αΔN2 7基因 ,并插入原核表达载体 pET 2 3b中 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,用IPTG诱导rhLT αΔN2 7表达。包涵体经洗涤和复性后 ,用DEAESepharoseFF和Phenyl SepharoseFF纯化。结果 :rhLT αΔN2 7以包涵体的形式表达 ,表达量占菌体总蛋白的 30 %以上。纯化后 ,rhLT αΔN2 7的纯度达 99% ,比活性高于 8× 10 7U/mg。纯化样品的相对分子质量 (Mr)、等电点 ,以及N端序列等其他理化性质均同预计的结果相符。结论 :构建了rhLT αΔN2 7的表达载体 ,并成功地在大肠杆菌中进行了表达 ,建立了rhLT αΔN2