固定化金属亲和层析胶与亲和层析膜纯化rhMn-SOD和rhCu,Zn-SOD的比较研究

为比较固定化金属亲和层析膜与亲和层析胶的纯化效果,分别用固定化金属亲和层析胶Cu2+柱、Ni2+柱、固定化金属亲和层析膜Cu2+柱、Ni2+柱分离纯化rhCu,Zn-SOD、rhMn-SOD/24a、rhMn-SOD/28。结果表明,亲和胶与亲和膜分离SOD获得相似的纯化效果,纯化倍数均在3到5之间,亲和膜分离所得SOD比活略高于亲和胶,rhCu,Zn-SOD与Cu2+的亲和能力高于rhMn-SOD。固定化金属亲和层析膜色谱为基因工程产物的快速分离鉴定提供了一个简便的方法。

重组人锰超氧化物歧化酶工程菌高效表达培养工艺的研究

目的 确定重组人锰超氧化物歧化酶 (rhMn SOD)工程菌高效表达的最适培养工艺条件。方法 通过摇瓶培养研究了包括接种量、诱导时机、Mn2 + 浓度、诱导后培养时间、发酵过程中 pH变化以及初始 pH值对发酵的影响。 结果 该工程菌的最佳接种量为 3%,最佳诱导时机为接种后 3h ,确定Mn2 + 浓度为 6 0 0 0 μmol·L-1,诱导后培养 5h ,在培养过程中当pH为6 .83时外源蛋白可获得高效表达 ,初始 pH确定为 8.0。 结论 :诱导和培养基的 pH是影响工程菌发酵的主要因素 ,尤其是Mn2 + 的加入表达有活性的rhMn SOD是必需的。

重组人源性锰超氧化物歧化酶对小鼠紫外线辐射所致氧化应激的保护作用

目的研究重组人源性锰超氧化物歧化酶(rhMn-SOD)对小鼠经A波紫外线(UV-A)辐射所致氧化应激损伤的保护作用。方法60只♂昆明种小鼠随机分为空白对照组、损伤模型组、天然铜锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD)组及3个剂量rhMn-SOD给药组。每天于辐射前1 h给药,辐照时间4 h,连续9 d,d 10处死动物。检测肝、脑匀浆及红细胞(RBC)溶血液的丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及总超氧化物歧化酶(SOD)。结果UV-A模型组的肝脑匀浆的3个抗氧化指标与空白对照组比较具差异有显著性意义(P<0.01),rhMn-SOD预防性给药组肝脏各指标与UV-A模型组相比差异均有显著性意义(P<0.05),并有剂量依赖性关系,但各组的红细胞指标差异均无显著性意义(P>0.05)。结论该UV-A辐射模型主要造成肝、脑氧化损伤,对红细胞无明显影响;rhMn-SOD对肝脏具有较好的保护作用。

不同来源的超氧化物歧化酶部分理化性质比较研究

对4种不同来源的超氧化物歧化酶的部分理化性质进行了比较研究。结果表明:牛血Cu,Zn-SOD和rhCu,Zn-SOD对一些化学试剂的敏感性方面基本相似,rhCu,Zn-SOD的热稳定性最好,80℃水浴60 min后活力仍有56%;在pH 5.0～11.0的范围内,Cu,Zn-SOD的活力比较稳定,Mn-SOD在pH 5.0以下容易失活,在碱性条件下较稳定。螺旋藻Fe-SOD和rhMn-SOD热、酸碱的稳定性较低;Cu,Zn-SOD、Fe-SOD和rhMn-SOD对一些化学试剂和不同变性剂的敏感性有明显的差别。rhMn-SOD稳定性,对化学试剂的敏感性方面与天然原料来源的Mn-SOD基本一致。Cu,Zn-SOD和Mn-SOD、Fe-SOD相比较,理化性质有明显的差别。