抗rhNDPK-A单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :研制抗rhNDPK A (recombinanthumannucleosidediphosphatekinase A)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。 方法 :以纯化的rhNDPK A免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗rhNDPK AmAb ;用免疫双扩散鉴定Ig亚类 ;West ernblot鉴定mAb的特异性 ;间接ELISA检测mAb的腹水效价、亲和常数 ,并进行表位分析。结果 :获得 6株可分泌特异性mAb的抗rhNDPK A的杂交瘤细胞系 2D9、8C7、13E2、15D9、15E3和 2 0D9,Ig亚类均为IgG1;其效价为 1× 10 -4～5× 10 -6;亲和常数为 4 .5× 10 -9～ 2 .8× 10 -10 mol/L ;共有3个抗原表位。结论 :获得抗rhNDPK A的mAb 。

HPLC法测定rhNDPK-a酶活性

目的:研究不同反应体系对NDPK酶活性测定结果的影响。方法:分别以(UTP+ADP)和(ATP+UDP)作为反应底物,加入自制的rhNDPK-A蛋白,以100mmol/L磷酸二氢钾、20mmol/L乙酸、5mmol/L四丁基溴化铵,pH 5 0作为流动相A液, A液+25%乙腈作为B液,等梯度混合,C18柱,柱温25℃,流速1 0ml/min,检测波长254nm。结果:以(UTP+ADP)和(ATP+UDP)作为反应底物测定的酶比活分别为210U/mg、860U/mg。结论:不同反应体系对HPLC法测定NDPK酶活性有显著差异。