重组人血小板衍生生长因子(rhPDGF-BB)质控方法和质量标准的研究

目的:建立重组人血小板衍生生长因子(rhPDGF-BB)的质控方法和质量标准。方法:以BALB/C 3T3细胞增殖实验及MTT染色法测定dIPDGF-BB的生物学活性,还原型SDS-PAGE确定B链分子量,SDS-PAGE和反相高效液相色谱测定纯度,毛细管电泳法测定等电点,用胰蛋白酶酶切后分析肽图,其余检测项目按《中国生物制品规程》2000版规定进行。结果:用建立的方法对连续3批rhPDGF-BB原液和成品进行了检定,各项指标均符合《重组DNA制品质量控制要点》和《中国生物制品规程》的要求。结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于重组人血小板衍生生长因子产品的常规检定。

rhPDGF-BB与rhTGF-β_1联合应用对大鼠正畸牙破骨细胞FAK蛋白表达的影响

目的:探讨重组人血小板衍生生长因子BB(rhPDGF-BB)与转化生长因子β1(rhTGF-β1)联合应用对大鼠正畸牙压力侧破骨细胞FAK蛋白的表达变化。方法:160只SD大鼠随机分为实验组(A)和对照组(B)。每组根据检测时间点不同分为5个亚组,分别建立正畸牙移动模型。A组从加力当天开始,隔天注射rhPDGF-BB与rhTGF-β1混合液0.1 m L。加力后1、4、7、10、14 d,分别处死每组中1亚组大鼠。体式显微镜测量牙移动距离的改变,TRAP染色观察压力侧破骨细胞数量变化,免疫组织化学染色法检测FAK蛋白水平的表达变化。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:A组牙移动距离均大于B组,除加力第1天无显著差异(P>0.05)外,其余各时间点差异均具有显著性(P<0.05);A组破骨细胞数目增加较B组明显,除第14天无显著差异外,其余各时间点均具有显著差异(P<0.05);A组破骨细胞内FAK蛋白表达明显高于B组,任何时间点相比,均具有显著差异(P<0.05)。结论:rhPDGF-BB和rhTGF-β1的联合协同作用上调了正畸牙压力侧破骨细胞内FAK蛋白的表达,进一步促进破骨细胞的分化、增殖及骨吸收,从而加速正畸牙的移动速率。

rhPDGF-BB与rhTGF-β_1联合应用对大鼠正畸牙压力侧破骨细胞FAK mRNA表达的影响

目的:观察外源性的血小板衍生生长因子-BB(rhPDGF-BB)与转化生长因子-β1(rhTGF-β1)联合应用对大鼠正畸牙压力侧破骨细胞FAK mRNA基因水平的表达变化。方法:将160只SD大鼠随机分为实验组和对照组。每组又根据检测时间点不同分为5个小组(n=16),分别建立正畸牙移动模型。实验组从加力第1天开始在正畸牙颊侧黏膜下隔日注射rhPDGF-BB 10 ng与rhTGF-β15 ng,对照组注射相同容量的PBS。加力后1、4、7、10和14 d分别处死每大组的一小组大鼠。收集标本,用TRAP染色观察压力侧破骨细胞数量的变化,实时定量PCR(RT-PCR)检测FAK mRNA基因的表达。结果:rhPDGF-BB及rhTGF-β1联合注射明显促进压力侧破骨细胞数目的增加(P<0.05);破骨细胞内FAK mRNA基因量的表达7 d前增加(P<0.05),7 d后逐渐降低,14 d时与对照组无显著差异(P>0.05)。结论:外源性PDGF-BB和TGF-β1联合应用促进正畸牙压力侧破骨细胞增殖,增加了破骨细胞内FAK mRNA基因表达。

rhPDGF-BB对糖尿病大鼠骨髓基质干细胞迁移的促进作用

目的:体外评价不同浓度人重组血小板衍生生长因子BB(recombinant human platelet derived growth factor-BB,rhPDGF-BB)对糖尿病大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)迁移的影响,以及基质细胞衍生因子(stromal cell-derived factor1,SDF-1)和其G蛋白偶联受体CXCR4调控作用的相关机制,为rhPDGF-BB应用于临床糖尿病患者相关骨修复再生治疗提供理论基础。方法:建立链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠动物模型。体外培养糖尿病大鼠BMSCs,作为对照组。采用Transwell小室趋化模型,以浓度0、10、50、100 ng/mL rhPDGF-BB作用BMSCs,检测其体外趋化作用;定时定量RCR检测BMSCs SDF-1、CXCR4 mRNA的表达变化,筛选出药物最佳作用浓度;应用PI3K/Akt抑制剂,反向证实rhPDGF-BB对BMSCs的SDF-1、CXCR4表达的调节作用。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠,1周后选取大鼠尾静脉血糖浓度高于16.7 mmol/L者为建模成功大鼠。与糖尿病大鼠的BMSCs相比,rhPDGF-BB促进糖尿病大鼠BMSCs的迁移,50 ng/mL rhPDGF-BB为促进糖尿病大鼠BMSCs迁移的最佳作用浓度,PI3K/Akt抑制剂明显抑制糖尿病大鼠BMSCs的迁移。结论:rhPDGF-BB促进糖尿病大鼠BMSCs的迁移,并通过SDF-1/CXCR4轴,调节糖尿病大鼠BMSCs的迁移。

外源性TGF-β1与PDGF-BB联合应用对正畸牙压力侧Pyk2蛋白和基因表达的影响

目的:探讨外源性生长因子-β1与外源性血小板衍生生长因子BB联合应用对牙周组织破骨细胞内Pyk2表达的影响.方法:160只SD大鼠随机分为2组,建立正畸牙移动模型.A组注射含rhTGF-β1与rhPDGF-BB的混合液0.1 mL,B组注射相同容量的PBS.加力后1、4、7、10、14 d,分别处死每大组的1小组大鼠.测量牙移动距离变化,TRAP染色行破骨细胞计数,Pyk2蛋白和基因水平分别用免疫组织化学染色法和RT-PCR检测.采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析.结果:2组牙移动距离在第4、7、10、14天均具有统计学差异(P<0.05).A组压力侧破骨细胞计数显著高于B组,除第14天外,其余各时间点均具有显著差异(P<0.05).A组Pyk2蛋白和基因表达均比B组高,2组均在第7天达到最高峰,除第1天外,其余时间点Pyk2蛋白表达均具有统计学差异(P<0.05).第4、7天,2组Pyk2基因表达均具有统计学差异(P<0.05).结论:外源性TGF-β1与PDGF-BB联合应用可从蛋白和分子水平上调正畸牙牙周组织压力侧Pyk2的表达,这可能是加速正畸牙移动速率的原因之一.