人精子相关抗原7的基因克隆及原核表达

目的为了阐明免疫性不孕不育的原因,研制人特异性精子抗原避孕疫苗,构建重组人精子相关抗原7(recombinant human sperm associated antigen 7,rhSPAG7)的原核表达质粒并在大肠杆菌中诱导表达。方法采用RT-PCR法,从人睾丸组织总RNA中扩增获得人SPAG7的c DNA,将其克隆入表达载体p BV220,构建人源性SPAG7的重组原核表达质粒p BV220/SPAG7。重组质粒经酶切和测序鉴定后,转化大肠杆菌JM109并在大肠杆菌中诱导表达目的蛋白。结果测序表明重组基因序列与人SPAG7基因完全一致。SDS-PAGE电泳显示,表达产物的相对分子量为25.8KDa与预期结果相符。结论获得了人SPAG7的编码基因,并在大肠杆菌中表达了人的SPAG7蛋白。