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SELEX技术筛选入rhTGF—βsRⅡ亲和核酸库方法的建立
1
作者
刘晓静
朱旭东
+4 位作者
胡承香
李磊
梁华平
吕凤林
陈彩宇
《中国新医药》
2004年第9期1-3,共3页
目的建立SELEX技术筛选rhTGF-βsRⅡ单链DNA亲和核酸库的方法,为后续分离rhTGF-βsRⅡ的单一核酸适体奠定基础。方法体外构建了一个长度为108nt、含60个随机核苷酸序列的ssDNA随机库。将靶蛋白rhTGF-βsRⅡ预先吸附到固相栽体Phenyl-Ag...
目的建立SELEX技术筛选rhTGF-βsRⅡ单链DNA亲和核酸库的方法,为后续分离rhTGF-βsRⅡ的单一核酸适体奠定基础。方法体外构建了一个长度为108nt、含60个随机核苷酸序列的ssDNA随机库。将靶蛋白rhTGF-βsRⅡ预先吸附到固相栽体Phenyl-Agarose上,再与ssDNA随机库温育,洗脱未结合核酸片段,回收与rhTGF-βsRⅡ结合的ssDNA。行PCR扩增时,采用5’端生物素化的下游引物,使PCR产物偶联上生物素。变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化PCR产物。利用Immobilized Streptavidjrr-Agarose捕获dsDNA,0.15N的NaOH使双链变性,释放非生物素标记的ssDNA,回收后用于下一轮筛选。随着筛选的进行,严谨度不断增加。结果经过8轮筛选后,富集库对靶蛋白的亲和力从0.76%上升到17.18%。结论成功建立了SELEX技术筛选rhTGF-βsRⅡ亲和核酸库的方法。
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关键词
SELEX技术
rhtgf-βsrⅱ亲和核酸库
亲和
力
SSDNA
分子生物学
下载PDF
职称材料
题名
SELEX技术筛选入rhTGF—βsRⅡ亲和核酸库方法的建立
1
作者
刘晓静
朱旭东
胡承香
李磊
梁华平
吕凤林
陈彩宇
机构
第三军医大学大坪医院
出处
《中国新医药》
2004年第9期1-3,共3页
文摘
目的建立SELEX技术筛选rhTGF-βsRⅡ单链DNA亲和核酸库的方法,为后续分离rhTGF-βsRⅡ的单一核酸适体奠定基础。方法体外构建了一个长度为108nt、含60个随机核苷酸序列的ssDNA随机库。将靶蛋白rhTGF-βsRⅡ预先吸附到固相栽体Phenyl-Agarose上,再与ssDNA随机库温育,洗脱未结合核酸片段,回收与rhTGF-βsRⅡ结合的ssDNA。行PCR扩增时,采用5’端生物素化的下游引物,使PCR产物偶联上生物素。变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化PCR产物。利用Immobilized Streptavidjrr-Agarose捕获dsDNA,0.15N的NaOH使双链变性,释放非生物素标记的ssDNA,回收后用于下一轮筛选。随着筛选的进行,严谨度不断增加。结果经过8轮筛选后,富集库对靶蛋白的亲和力从0.76%上升到17.18%。结论成功建立了SELEX技术筛选rhTGF-βsRⅡ亲和核酸库的方法。
关键词
SELEX技术
rhtgf-βsrⅱ亲和核酸库
亲和
力
SSDNA
分子生物学
分类号
Q7 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
SELEX技术筛选入rhTGF—βsRⅡ亲和核酸库方法的建立
刘晓静
朱旭东
胡承香
李磊
梁华平
吕凤林
陈彩宇
《中国新医药》
2004
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