骨髓间充质干细胞对类风湿关节炎小鼠干预效果研究

目的利用自发类风湿关节炎小鼠模型(Tg-huTNFα小鼠),探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对类风湿关节炎及其继发骨量丢失的影响。方法3周龄Tg-huTNFα小鼠分为3组:(1)模型组(Model),每周腹腔注射1次0.1 mL/10 g的生理盐水;(2)huTNFα抗体干预组(Anti-huTNFα),每周腹腔注射1次10 mg/kg的huTNFα抗体;(3)BMSCs干预组(BMSCs),每周双侧膝关节腔各注射1次5×10^(6) Cells的BMSCs。干预期间每周称量1次动物体重,同时对踝关节进行临床评分,各组动物干预10周后处死取材。利用流式细胞仪分析外周血T细胞、B细胞、CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比例,液相芯片法检测血清中huTNFα、IL-4及IL-1β含量,HE染色后评价左侧膝关节和踝关节病理改变,骨形态计量学方法分析右侧股骨骨结构变化。结果与模型组比较,BMSCs和Anti-huTNFα干预均可缓解Tg-huTNFα小鼠体重的下降,抑制小鼠关节肿大变形,下调外周血huTNFα含量,降低Tg-huTNFα小鼠的关节病理评分,减少关节滑膜和软骨损伤面积。此外,骨形态计量学分析发现,BMSCs干预可提高骨小梁数量和骨小梁面积百分数等,改善Tg-huTNFα小鼠股骨骨结构。结论关节腔注射BMSCs可以显著缓解Tg-huTNFα小鼠类风湿关节炎症状,改善股骨骨结构,缓解RA继发的骨量丢失。

人骨髓间充质干细胞对胶原诱导的大鼠关节炎无预防和治疗作用

为探讨间充质干细胞(MSC)在类风湿性关节炎治疗与预防中的作用,以胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)Wistar大鼠模型为研究对象,分别于胶原免疫次日(预防组)和造模2周后(治疗组),腹腔内注射107人骨髓MSC,每周1次,连续2周(预防组)或4周(治疗组)。对照组相应注射生理盐水(NS)。自第2周始,每周记录大鼠踝关节肿胀程度,6周时进行病理学检查及脾脏单核/巨噬细胞活性测定。结果表明:所有实验组大鼠都出现了关节炎症状,而且在后期出现了关节畸形。MSC预防组与治疗组关节炎评分均显著高于NS对照组(P<0.01),6周时分别为9.5±0.5,9.4±0.6和7.6±0.6,MSC预防组和治疗组之间无差异。病理学分析显示,MSC预防与治疗组膝关节滑膜炎和关节炎评分均高于模型组。此外,MSC预防组、治疗组和NS对照组大鼠脾脏有核细胞中,CD86+分别为(4.16±1.48)%,(4.06±1.97)%,(4.15±2.04)%,各组CD11b/c+CD86+分别为(1.04±0.68)%,(0.95±0.56)%,(0.98±0.44)%,3组之间没有显著差异,但均高于健康大鼠〔(0.97±0.18)%和(0.30±0.17)%,均P<0.05。结论:MSC输注对大鼠CIA没有预防及治疗作用,反而加重了关节病理损伤,其机制尚需进一步探讨阐明。

造血生长因子对长期培养中骨髓造血细胞增殖和分化的影响

应用骨髓长期培养法研究了ＨＧＦｓ联合应用对ＬＴＢＭＣ中造血干／祖细胞的增殖、分化的影响，结果显示，在ＬＴＢＭＣ中，含有ＨＧＦｓ（ＩＬ３＋ＩＬ６＋ＧＣＳＦ＋ＧＭＣＳＦ＋Ｅｐｏ）的扩增组与对照组相比，ＨＧＦｓ能显著地扩增ＨＳＣｓ，在第一周，ＣＦＵＧＭ，ＣＦＵＥ和ＢＦＵＥ总数分别扩增了１８０９１６５９倍、１０２６８４８倍和１４９９１２７８倍，而累积扩增倍数分别达３６１９６６３６倍、２０５１３３９０倍和２９９８５１１３倍，有核细胞总数扩增了１６９１９８倍，累积扩增了３９６６９７倍，但２周后各种集落数及大型ＣＦＵＧＭ集落数下降明显加快。结果提示：ＨＧＦｓ组合应用结合长期培养能扩增造血干／祖细胞，并能提高悬浮细胞的生存率；ＨＧＦｓ的组合在扩增ＨＳＣｓ的同时也促进了其分化；对骨髓造血微环境的建立也具有促进作用，在适当的时间内，应用小容量骨髓单个核细胞在体外长期培养扩增体系中可持续地扩增，扩增的造血干／祖细胞具有重要的临床应用潜能。

骨髓间充质干细胞来源外泌体miRNA-320a调控CXCL9表达在类风湿关节炎发生与发展中的作用及机制

目的探讨人骨髓间充质干细胞(hBMMSCs)来源外泌体miRNA-320a调控CXC趋化因子配体9(CXCL9)表达在类风湿关节炎(RA)中的作用及机制。方法分离并鉴定h BMMSCs来源外泌体。收集于医院接受关节置换术的RA患者关节滑膜组织,制备类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs)。q RT-PCR法检测RASFs和hBMMSCs来源外泌体中miRNA-320a和CXCL9表达。双荧光素酶报告基因验证miRNA-320a与CXCL9靶向关系。分别采用CCK-8法和Transwell实验,检测BMMSCs来源外泌体miRNA-320a通过下调CXCL9对RASFs增殖和迁移的影响。结果RASFs中miRNA-320a呈异常低表达,与hBMMSCs来源外泌体共培养后,miRNA-320a表达显著上调(P<0.05);miRNA-320a+CXCL9 WT组荧光强度显著低于miRNA-NC+CXCL9 WT组(P<0.05),而miRNA-320a+CXCL9 MUT组和miRNA-NC+CXCL9 MUT组荧光强度比较,差异无统计学意义(P>0.05);与miR-NC+oe-NC组比较,miR-320a mimic+oe-NC组miR-320a表达显著增加,CXCL9 mRNA表达显著降低,RASFs增殖和迁移能力显著下降(P<0.05);与miR-320a mimic+oe-NC组比较,miR-320a mimic+oe-CXCL9组CXCL9 mRNA表达显著增加,RASFs增殖和迁移能力显著上升(P<0.05)。结论h BMMSCs来源外泌体miRNA-320a可通过靶向下调CXCL9水平,抑制RASFs增殖和迁移,miR-320a有可能成为RA诊断标志物和潜在治疗靶点。

幼年特发性关节炎患儿外周血自然杀伤细胞CD^(16+56+)的随访意义

目的:探讨幼年特发性关节炎全身型(systemic onset juvenile idiopathic arthritis,SOJIA)患儿治疗过程自然杀伤细胞(natural killer cells,NKcells)CD16+56+比率、骨髓细胞形态学等指标的动态变化在提示病情发展、改善预后方面的意义。方法:对我院2006年6月至2008年6月收治的30例SOJIA病例,分析治疗早期及联合治疗后多项炎症指标、外周血NK cells CD16+56+比率、骨髓细胞形态学动态变化与临床表现之间的关系。结果:所有患儿中10例病情反复难治者,均出现非特异性炎症指标升高,9例外周血NK cells CD16+56+比率降低,8例骨髓细胞形态学发生变化(4例发现异形淋巴细胞,4例有吞噬现象)。及时采用强联合治疗方案后,8例病情得到控制,2例进展为巨噬细胞活化综合征。结论:SOJIA临床表现多样,实验室指标非特异性指向,治疗中同时警惕NK cells CD16+56+比率和骨髓细胞形态学等变化,及早采用个体化强联合治疗方案,是阻止病情发展,改善预后的关键。

异基因骨髓间充质干细胞移植对类风湿关节炎大鼠血清IL-1、TNF-α、TGF-β1表达的影响

目的探讨异基因骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)移植对类风湿关节炎(RA)动物模型(CIA大鼠)血清中白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和转化生长因子(TGF-β1)表达的影响。方法分别选取5只Wistar幼年大鼠和20只Wistar成年雌性大鼠。5只Wistar幼年大鼠用以提取BM-MSCs,20只Wistar成年雌性大鼠经CIA造模成功后随机分为BM-MSCs移植A组和空白对照B组。BM-MSCs分离、传代培养后,通过CIA大鼠尾静脉注射移植于A组动物,BM-MSC移植数目为1.0×107/kg(受者体重)。于移植4周后用ELISA方法分别检测2组动物血清中IL-1、TNF-α和TGF-β1的含量。结果经BM-MSCs移植治疗4周后,BM-MSCs移植组血清中IL-1和TNF-α的浓度明显低于空白对照组,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。同时血清TGF-β1的浓度明显高于空白对照组,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论异基因BM-MSCs移植可以影响CIA大鼠血清中IL-1、TNF-α和TGF-β1的表达,对类风湿关节炎的免疫紊乱有调节作用,有可能用于RA的治疗。

海藻酸钠支架复合组织工程化软骨细胞修复兔佐剂性关节炎膝关节软骨缺损的实验研究

目的探讨海藻酸钠支架复合组织工程化软骨细胞对兔佐剂性关节炎膝关节软骨缺损修复的影响。方法将新西兰白兔分为正常对照组、佐剂性模型组和海藻酸盐支架治疗组。模型组和治疗组兔膝关节内注入弗氏佐剂建立佐剂性关节炎模型。抽取治疗组兔左后健侧肢体的骨髓,用Percoll法分离出自体骨髓间充质干细胞(ABMSC),体外培养传代至P3代并诱导分化为软骨细胞。将软骨细胞与海藻酸钠支架混合注入治疗组的病变膝关节。对照组和模型组关节注射等量的生理盐水。海藻酸钠支架复合组织工程化软骨细胞治疗1个月后处死兔,应用Ⅱ型胶原免疫组织化学法染色和HE染色,观察各组兔的膝关节关节软骨缺损的修复情况。结果诱导成功软骨细胞且生长良好,呈现明显的纺锤体形,细胞成活率达98.5%。软骨细胞与海藻酸钠复合后体外培养显示细胞生长旺盛,增殖成株状或岛状,株状细胞团周围有类似的软骨陷窝形成,细胞排列密集,核圆形。组织形态学结果显示,治疗组与模型组比较,治疗组关节炎症反应明显减轻,关节Ⅱ型胶原阳性软骨细胞显著增高,软骨缺损得到明显修复。结论海藻酸钠支架复合组织工程化软骨细胞对兔佐剂性关节炎膝关节软骨缺损有一定的修复作用。

用组织工程学方法探讨兔佐剂性关节炎关节软骨修复的实验研究

目的探讨海藻酸盐支架超微结构及软骨形态变化与组织工程修复佐剂性关节炎软骨缺损的关系,为临床应用组织工程方法治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)提供一定的实验依据。方法将24只新西兰兔随机均分为假手术对照组,关节炎模型组和软骨细胞-海藻酸钙支架复合物治疗组。对模型组和治疗组膝关节处注射0.5 m L完全弗氏佐剂诱导关节炎,假手术组注射等量生理盐水。抽取治疗组骨髓5 m L,Percoll密度梯度分离出自体骨髓间充质干细胞,体外培养纯化,并诱导分化成软骨细胞。与海藻酸钙支架混合培养,对支架进行扫描电镜观察,并将混合物回注相应关节腔内治疗1个月。对各组兔膝关节进行组织学评分检测软骨缺损修复结果。结果海藻酸盐支架电镜扫描显示支架具有一定的孔隙,有利于营养物质的进入,便于细胞的增殖分化。软骨组织评分结果显示软骨纤维化减轻,关节腔内积液消失,软骨缺损得到一定修复。结论软骨组织评分显示海藻酸钙复合工程化软骨细胞对兔佐剂性关节炎软骨缺损有一定的修复作用,其机制可能与支架有利于软骨细胞生长发育有关。

同源异体间充质干细胞上清液干预大鼠佐剂性关节炎

目的:探讨同源异体骨髓来源的间充质干细胞上清液对大鼠佐剂性关节炎的预防作用。方法:培养扩增SD大鼠骨髓间充质干细胞,收集培养间充质干细胞48 h的上清液;将健康雄性SD大鼠右后足跖皮内一次性注射弗氏完全佐剂0.1 mL/只制作佐剂性关节炎模型,造模后行间充质干细胞上清液干预;造模前及造模后第7、14、21和28天测量大鼠体重和后足爪体积,同时观察大鼠生存状况;并于干预后第28天摄四肢关节X片并做病理检查。结果:间充质干细胞上清液干预组大鼠的原发性炎症和继发病变均不明显,关节X片检查和病理检查均未见明显异常;干预组与模型组大鼠相比,体重、足爪体积差异有统计学意义(P<0.05)。结论:间充质干细胞上清液可有效干预弗氏完全佐剂诱导的大鼠佐剂性关节炎的进展。

骨髓间充质干细胞治疗小鼠胶原性关节炎MMP-2及MMP-9 mRNA表达的影响

目的:我们采用骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗小鼠Ⅱ型胶原性关节炎(CIA),观察BMSCs移植对CIA小鼠基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)的影响。为RA(Rheumatoid arthritis)这一难治性疾病提供新的治疗方法。方法:①采用密度梯度离心法沉降、分离单个核细胞后,应用美国BD公司FAcscaliburTM型分选式细胞分析仪,进行骨髓CD34+细胞分选。②弗氏完全佐剂+Ⅱ型胶原初次免疫近交系C57BL/6(H-2b)小鼠,14天弗氏完全佐剂+Ⅱ型胶原第2次免疫动物,建立CIA小鼠模型。③实验分组:正常对照组、模型组、BMSCs移植治疗组、甲氨喋呤治疗阳性对照组。每组10只小鼠。④BMSCs移植采用尾静脉注射,除模型组、正常对照组用生理盐水,BMSCs所含的CD34+细胞数为2×105。⑤观察42天不同分组小鼠的关节症状及进行关节炎指数和肿胀度测定。⑥移植后第42天全部处死动物取脾组织采用RT-PCR法检测MMP-2、MMP-9mRNA的表达,收集数据并做统计分析。结果:BMSCs移植治疗组MMP-2、MMP-9 mRNA的表达,与甲氨喋呤治疗阳性对照组比较有显著性差异(P<0.05);与正常对照组比较,无显著性差异(P>0.05)。结论:BMSc移植治疗CIA小鼠能显著抑制MMP-2、MMP-9mRNA的表达,具有下调MMP-2、MMP-9mRNA表达的免疫调节作用。

TNF-α-siRNA联合骨髓间充质干细胞对大鼠类风湿关节炎治疗效果的研究

抑制患者体内肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达可作为治疗类风湿关节炎(RA)的重要途径。以鸡Ⅱ型胶原法诱导的RA模型大鼠为研究对象,探讨TNF-α-siRNA联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗RA的效果及其作用机制。RA大鼠随机分为PBS组(模型对照)、甲氨蝶呤组(阳性药物对照)、BMSCs移植组、TNF-α-siRNA注射组和TNF-α-siRNA+BMSCs移植治疗组共5个组。结果表明:与PBS组模型大鼠相比,4个治疗组大鼠的生长速度均极显著提高,而血清中TNF-α、IL-1β水平、足趾肿胀值及强迫游泳不动时间均极显著降低。进一步研究表明,与PBS组模型大鼠相比,基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)表达水平在4个治疗组均极显著提高,而基质金属蛋白酶9 (MMP-9)的表达水平均极显著降低;TNF-α-siRNA+BMSCs联合治疗效果显著优于其他治疗组。这一研究说明,TNF-α-siRNA+BMSCs联合治疗可能通过抑制RA关节处MMP-9的表达而发挥作用,从而为基因干扰联合干细胞移植治疗RA提供了重要的试验依据。

miR-29a抑制类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞炎性反应的作用

目的探究miR-29a在类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的炎性反应中的作用及作用机制。方法将NC和miR-29a mimic质粒转染滑膜细胞,设为NC组和miR-29a mimic组,以未转染的细胞为空白组(Control),转染48 h后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-29a表达,MTT实验、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡情况;酶联免疫吸附法(Elisa)检测细胞中白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平;免疫印迹法检测细胞中骨髓细胞白血病蛋白1(Mcl-1)表达,荧光素酶活性实验测定miR-29a对骨髓细胞白血病蛋白1(Mcl-1)的调控作用。结果与Control组、NC组比较,miR-29a mimic组滑膜细胞miR-29a表达升高,增殖抑制率、凋亡率升高,IL-1β、TNF-ɑ、IL-6水平降低,Mcl-1、Bcl-2蛋白表达降低,Caspase-3、Bax表达升高(P<0.05);与miR-29a-NC+Mcl-13’UTR-Wt组比较,miR-29a-mimic+Mcl-13’-UTR-Wt组荧光素酶活性明显降低(P<0.05)。结论miR-29a过表达可抑制滑膜细胞增殖,促进其凋亡,降低炎性因子水平,推测这一作用是miR-29a靶向Mcl-1实现的。

仙龙颗粒联合骨髓间充质干细胞治疗类风湿性关节炎大鼠的疗效及对辅助性T细胞17/调节性T细胞平衡的影响

目的探讨仙龙颗粒联合骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSC)治疗类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)的疗效及对辅助性T细胞17(Thelper cell 17,Th17)/调节性T细胞(Tregulatory cells,Treg)平衡的影响。方法将35只8周龄SD大鼠随机分为模型组、泼尼松组、仙龙颗粒组、BMSC组、联合组5组,每组各7只。造模后7 d,模型组、泼尼松组、仙龙颗粒组分别给予生理盐水、泼尼松溶液、仙龙颗粒溶液灌胃;BMSC组、联合组尾静脉注射BMSC后,再分别给予生理盐水、仙龙颗粒灌胃,均连续灌胃4周。治疗后对各组大鼠进行关节炎指数(Arthritis,AI)、足肿胀程度,滑膜组织Th17、Treg细胞,血清肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-17(Interleukin-17,IL-17)、白介素-10(Interleukin-10,IL-10)及叉状头/翅膀状螺旋转录因子3(Forkhead/winged helix family transcription factor 3,FoxP3)和维甲酸相关孤儿受体γt(Retinoid-related orphan nuclear receptorγt,RORγt)mRNA水平测量。结果治疗后泼尼松组、仙龙颗粒组、BMSC组和联合组AI评分、足肿胀程度均低于模型组,且联合组均低于泼尼松组、仙龙颗粒组和BMSC组(P<0.05)。治疗后泼尼松组、仙龙颗粒组、BMSC组和联合组滑膜组织Th17、Th17/Treg、RORγt mRNA水平均低于模型组,Treg、FoxP3 mRNA水平均高于模型组,且联合组滑膜组织Th17、Th17/Treg、RORγt mRNA水平均低于泼尼松组、仙龙颗粒组和BMSC组,Treg、FoxP3 mRNA水平均高于泼尼松组、仙龙颗粒组和BMSC组(P<0.05)。治疗后,泼尼松组、仙龙颗粒组、BMSC组和联合组血清TNF-α、IL-17、IL-10水平均低于模型组,且联合组均低于泼尼松组、仙龙颗粒组和BMSC组(P<0.05)。结论仙龙颗粒联合BMSC治疗RA大鼠效果好,能够有效改善其AI评分和足肿胀度,还能够通过调节FoxP3 mRNA、RORγt mRNA水平改善RA大鼠的Th17/Treg细胞平衡状态,进而发挥抗炎作用。

静脉注射小剂量IFN-γ对异体骨髓间充质干细胞治疗胶原诱导关节炎小鼠的实验研究

目的研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗胶原诱导关节炎(CIA)小鼠的最佳方法。方法不同时间点给CIA小鼠静脉注射BMSCs,观察诱导42 d各组小鼠的关节炎临床评分和病理学评分;监测CIA小鼠诱导不同时间点的干扰素-γ(IFN-γ)浓度;进一步观察免疫第28天IFN-γ联合BMSCs对CIA小鼠的疗效。结果 PBS注射组、BMSCs 14 d注射组、BMSCs 21 d注射组、BMSCs 28 d注射组的CIA小鼠关节炎临床评分分别为(9.2±0.5)分、(5.6±0.41)分、(10.2±0.53)分、(7.5±0.40)分(P<0.05);关节破坏病理评分分别为(7.3±0.5)分、(2.9±0.3)分、(10.2±0.6)分、(5.6±0.4)分(P<0.05);故与仅注射PBS相比,第14天和第28天注射BMSCs可显著缓解CIA小鼠的关节炎症,第21天注射BMSCs则加重小鼠的关节炎症。BMSCs 14 d注射组和BMSCs 28 d注射组,血清中IFN-γ的浓度分别为(500.14±34.0)pg/mL和(480.22±36.7) pg/mL;CIA小鼠血清中IFN-γ浓度在免疫第14天和第28天达到最高峰。PBS注射组、BMSCs注射组、BMSCs+IFN-γ28 d注射组、IFN-γ注射组对CIA小鼠关节破坏影响的病理评分分别为(7.8±0.3)分、(5.4±0.3)分、(4.6±0.2)分、(8.0±0.4)分(P<0.05)。结论 IFN-γ联合BMSCs可显著提高BMSCs对CIA的治疗效果。

类风湿性关节炎的骨髓源学说

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)一直被认为是一种只局限于关节的自身免疫病,T细胞的功能变化是其发病的主要原因.近来,一系列研究显示骨髓来源的成纤维样和巨噬细胞样滑膜细胞在关节翳的形成中具有更重要的作用;另外,在RA中很早出现具有自身免疫特性的B细胞,滑膜组织的有些方面与骨髓有相似之处,有利于B细胞免疫应答的发生.鉴于RA中同时有骨髓的异常,加上其特有的滑膜生发中心,RA可以被认为是一种有利于B细胞应答的微环境疾病.RA的整个发病过程起源于骨髓,造血干细胞的异常促进了疾病的发生.大多数与RA发病相关的病毒都有嗜骨髓倾向(tropism).RA的骨髓源理论很好地解释了RA经常与其他自身免疫性疾病和良性淋巴细胞增生(如大颗粒T淋巴细胞症)相互交叉的原因.已有报道证实:RA可通过骨髓移植获得缓解,这一治疗手段的风湿病学价值有待深入探讨.RA的发病机制较复杂,但在很大程度上可以被理解为是一种需经骨髓移植等方法治疗的干细胞疾病.

骨髓间充质干细胞来源的外泌体对弗氏完全佐剂诱导类风湿性关节炎大鼠的治疗作用

目的评价大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)来源的外泌体(Exo)在弗氏完全佐剂(CFA)诱导的类风湿性关节炎(RA)大鼠中的治疗作用。方法超速离心分离大鼠BMSC上清中的Exo(BMSC-Exo),利用纳米颗粒跟踪分析和Westernblotting法对BMSC-Exo表征进行鉴定。将20只雄性SD大鼠随机分为Sham组、CFA组、Exo组和Cel组,每组5只;除Sham组注射等体积生理盐水外,其余3组在大鼠左后肢足跖部皮下注射0.1 mLCFA,注射7 d后,Exo组大鼠尾静脉注射BMSC-Exo,Cel组灌胃Cel。采用足趾关节肿胀度、关节炎指数(AI)、热痛阈和脾脏指数评价BMSC-Exo对CFA大鼠的治疗效果;采用旷场实验和自动步态实验评价BMSC-Exo对CFA大鼠自主运动的影响;采用流式技术检测BMSC-Exo对CFA大鼠血清炎症因子水平的影响;采用Westernblotting法检测BMSC-Exo对CFA大鼠关节组织NF-κB通路蛋白表达的影响。结果与BMSC相比,BMSC-Exo特异性表达CD63和TSG101分子,但不表达CM130;BMSC-Exo的粒径分布在82.5 nm处达到峰值。与Sham组相比,CFA组大鼠足趾关节肿胀度、AI、脾脏指数高,热痛阈低,站立次数增加,运动距离及步长变短,步宽增加,摇摆时间变短及触地时间变长,血清炎症因子水平和关节组织NF-κB通路蛋白表达上调(P均<0.05)。与CFA组相比,Exo组、Cel组大鼠足趾关节肿胀度、AI、脾脏指数低,热痛阈高,站立次数减少,运动距离及步长变长,步宽降低,摇摆时间变长及触地时间缩短,血清炎症因子水平和关节组织NF-κB通路蛋白表达低(P均<0.05)。结论BMSC-Exo对CFA诱导的RA模型大鼠具有明显治疗作用,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。

龟甲的强骨活性研究进展

龟甲始载于《神农本草经》,具有滋阴潜阳,益肾强骨之功效,临床用龟甲治疗骨病有很久的历史。通过查阅文献进行分析,发现与龟甲补肾健骨相关的疾病包括骨质疏松、膝骨关节炎,龟甲能促进软骨细胞增殖,促进骨髓间充质干细胞增殖、分化为成骨细胞来防治骨病。故本文从龟甲防治骨病相关疾病及其作用机制进行综述。

血小板裂解液联合骨髓干细胞治疗对大鼠膝关节滑膜组织TRAF6、Gal-3 mRNA及蛋白的影响

目的探讨血小板裂解液联合骨髓干细胞治疗对大鼠膝关节滑膜组织肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、Gal-3 mRNA及蛋白的影响。方法60只5~6周龄Sprague Dawley大鼠采用随机数字表法分为3组:对照组、RA组、联合治疗组,每组各20只。对照组仅用0.9%氯化钠溶液处理作为实验对照,RA组采用胶原诱导建立大鼠RA模型,联合治疗组在RA大鼠的基础上在关节腔施用300μL的血小板裂解液,每周3次,并在大鼠尾静脉移植1×10^(7)个骨间充质干细胞(BMSCs),每周1次,持续5周。通过蛋白印迹分析大鼠膝关节滑膜组织TRAF6、Gal-3蛋白和破骨细胞生成相关蛋白的表达。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)分析大鼠膝关节滑膜组织TRAF6、Gal-3以及促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-8、COX2和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的mRNA表达。通过影像学检查和病理分析对大鼠膝关节炎症指数进行分析。通过显微CT图像对大鼠膝关节骨特异性进行分析。结果第1周,RA组炎症指数较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05),RA组与联合治疗组炎症指数比较,差异无统计学意义(P>0.05);第3周、第5周,RA组炎症指数较对照组升高,联合治疗组炎症指数较对照组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,RA组TRAF6、Gal-3蛋白和mRNA表达、Tb.Sp值、OSCAR和TRAP蛋白表达以及TNF-α、IL-6、IL-8、COX2和MMP-13的mRNA表达均显著增加,Tb.Th和Tb.N值以及OSX和CoL1A1蛋白表达较则显著减少,差异均有统计学意义(P<0.05);而与RA组相比,联合治疗组以上指标变化趋势均与上述相反,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论血小板裂解液联合骨髓干细胞治疗可下调大鼠膝关节滑膜组织中TRAF6、Gal-3 mRNA及蛋白的表达,改善RA大鼠关节炎症和骨损伤,TRAF6和Gal-3可作为RA的潜在治疗靶点。

类风湿关节炎外周血BTLA及BMSCs内Nrf2信号通路相关基因表达与肺部感染的关系

目的 探究类风湿关节炎(RA)患者外周血B/T淋巴细胞衰减因子(BTLA)及骨髓间充质干细胞(BMSCs)内核因子E2-相关因子2(Nrf2)信号通路相关基因表达与肺部感染的关系。方法 选取2019年7月-2021年7月贵州航天医院收治的30例RA合并肺部感染患者为感染组,选取同期收治无肺部感染RA患者30例为未感染组。采集感染组患者痰液标本,分析病原菌分布情况;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测BTLA、Nrf2、Keap1及ARE的mRNA表达量。结果 感染组患者分离病原菌36株,革兰阴性菌20株(55.56%)、革兰阴性菌11株(30.56%)、真菌5株(13.89%);感染组患者年龄、病程均大于未感染组(P<0.05),合并糖尿病占比高于未感染组(P<0.05);感染组患者白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙二醛(MDA)水平高于未感染组,感染组患者超氧化物歧化酶(SOD)水平、BTLA、Nrf2、Keap1及ARE的mRNA表达量低于未感染组(P<0.05);高龄、长病程、有糖尿病史均是RA合并肺部感染危险因素(P<0.05);Nrf2、Keap1及ARE mRNA表达量与MDA呈负相关(P<0.05),与SOD呈正相关(P<0.05)。结论 RA患者并发肺部感染与BTLA及Nrf2信号通路相关基因表达水平降低有关,外周血BTLA基因表达量缺失可加重患者炎症反应,BMSCs内Nrf2相关信号通路可负向调节患者氧化应激反应,损伤肺部组织,增加病原菌感染风险。

BMMSCs来源外泌体对类风湿关节炎滑膜细胞的作用

[目的]探索骨髓间充质干细胞来源的外泌体对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(Rheumatoid arthritis synovial fibroblasts,RA-FLS)的作用以及相关作用机制,以期为类风湿关节炎治疗提供新思路。[方法]将类风湿关节炎滑膜成纤维细胞分为4组,分别用0、1、3、5μmol/L的人骨髓间充质干细胞来源的外泌体进行处理。MTT实验和流式细胞术评估细胞损伤情况;Transwell实验分析细胞迁移能力;ELISA试剂检测炎症因子的含量;蛋白免疫印迹实验分析p38蛋白激活情况。[结果]骨髓间充质干细胞来源的外泌体能够降低RA-FLS迁移能力(198.56±10.89 vs 31.27±1.66),并能促进RA-FLS发生凋亡(6.26%±0.09%vs 23.56%±1.21%)。人骨髓间充质干细胞来源的外泌体还能减少RA-FLS分泌的炎症细胞因子。人骨髓间充质干细胞来源的外泌体能够抑制p38蛋白磷酸化(0.89±0.02 vs 0.11±0.01)。[结论]人骨髓间充质干细胞来源的外泌体能够抑制RA-FLS生长和转移,抑制RA-FLS分泌炎症因子,这些作用与抑制p38 MAPK激活有关。