miR-335及ROCK1在骨肉瘤中表达及相互关系研究

目的探讨miR-335及rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)在骨肉瘤组织及细胞系中表达的情况及两者的相关性。方法临床选取18例骨肉瘤组织标本及配对正常骨骼肌组织标本;设定人正常成骨细胞为对照组,骨肉瘤细胞系MG-63和U2-OS为实验组,RT-PCR检测骨肉瘤组织与各组细胞中miR-335与ROCK1 mRNA的表达差异;miR-335 mimic转染MG-63和U2-OS两细胞系,检测miR-335过表达对ROCK1mRNA和蛋白表达的影响。结果 miR-335在骨肉瘤组织及细胞系中特异性低表达,而ROCK1则呈高表达,两者呈负相关;转染miR-335mimic后,miR-335mRNA过表达,ROCK1mRNA和蛋白表达在MG-63和U2-OS两细胞系中受到显著抑制。结论 miR-335与ROCK1表达在骨肉瘤组织学水平和细胞学水平均成负相关;过表达miR-335可降低ROCK1的表达。

螺内酯对ROCK1在单肾切除糖尿病大鼠肾组织中表达及活性的影响

目的观察小G蛋白Rho相关蛋白激酶1（ROCKl）在单肾切除糖尿病大鼠肾组织中的表达及活性改变，探讨螺内酯对糖尿病肾病（DN）的保护机制。方法制作单肾切除加链脲菌素（45mg／kg）诱导的大鼠糖尿病模型，随机分为假手术组（N）组、单肾切除对照（C）组、单肾切除糖尿病模型（D）组、单肾切除糖尿病螺内酯干预（S）组。分别于给药4周和8周后观察各组大鼠各项生化指标、肾组织病理形态学改变；免疫组织化学和实时PCR法检测肾皮质ROCKl、结缔组织生长因子（CTGF）水平；Western印迹法检测肾皮质肌球蛋白磷酸酶目标亚单位1（p-MYPTl）表达情况。结果与N组、C组比较，实验第4周和第8周D组血糖、肾质量指数（肾质量，体质量，KWI）、24h尿蛋白量（Upro）、收缩压（SBP）均明显增高（均P〈O．01）；肾小球细胞外基质（ECM）沉积增多；肾小管肿胀变性；8周时血清白蛋白（Alb）明显下降、Scr明显上升（均P〈0．05）。随时间延长，D组肾皮质中ROCKl、CTGF表达逐渐增强，p-MYPTl蛋白表达逐渐增加。ROCKl表达和活性和CTGF表达呈正相关（r=0．874，P=0．000；r=0．858，P=0．000）。与同期D组比较，S组24hUpro、KWI、肾组织病理改变、肾皮质ROCKl、CTGF和P—MYPTl表达等均得到明显改善，而两组血糖、Scr、Alb、SBP间差异无统计学意义。结论ROCKl表达和活性在单肾切除糖尿病大鼠肾脏中均上调，并和CTGF表达呈正相关。螺内酯可能通过下调ROCKl表达及活性，降低CTGF表达，从而发挥保护早期糖尿病大鼠。肾脏的作用。