Rho激酶抑制剂在眼部疾病中的作用研究进展

Rho激酶(ROCK)是Rho家族的关键效应器蛋白,通过Rho/ROCK信号通路在多种细胞生物学过程中发挥关键作用,包括细胞形态改变、细胞骨架重组、细胞运动以及细胞-细胞和细胞-基质相互作用等。Rho/ROCK信号通路的异常激活可介导多种疾病的发生、发展,并与这些疾病的病理过程相关。ROCK抑制剂通过抑制Rho/ROCK信号通路发挥神经保护、抗炎、抗肿瘤和抗纤维化等作用,因此其在多种疾病中具有潜在治疗价值。ROCK抑制剂在眼部疾病(青光眼、角膜疾病和视网膜疾病等)治疗中展现出巨大潜力,或可为这些疾病的治疗提供一种全新的策略和方法。

Rho/ROCK信号通路在糖尿病视网膜病变中的研究进展

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是导致劳动年龄人群视力障碍的重要原因,其复杂的发病机制尚未完全明确。虽然一些新兴治疗方法在DR的治疗中取得显著疗效,但仍存在治疗效果欠佳及并发症等问题。Rho GTP酶是一种小分子蛋白,通过激活下游蛋白ROCK参与细胞骨架调节等多种细胞活动。在DR发病过程中Rho/ROCK信号通路被激活,抑制Rho/ROCK信号传导可能抑制DR的进展。本文从炎症、新生血管、血-视网膜屏障(blood retinal barrier,BRB)、晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)、糖尿病视网膜神经变性(diabetic retinal neurodegeneration,DRN)等方面阐述Rho/ROCK信号通路在DR发病机制中的研究进展,以期为DR的治疗提供新思路。

法舒地尔对大鼠动脉粥样硬化及Rho激酶表达的影响

目的探讨Rho激酶抑制剂-法舒地尔对大鼠动脉粥样硬化的防治作用及其相关机制。方法以普通饮食喂养大鼠作为对照组(n=10);链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠内膜损伤存活后,高脂饮食8周,分为动脉硬化组、瑞舒伐他汀组及法舒地尔组(n=10),继续高脂饮食4周,药物干预2个月,行血脂、血管细胞黏附分子-(lVCAM-1)、细胞间黏附分子-(lICAM-1)及Rho激酶mRNA检测。结果与对照组相比,动脉硬化组大鼠血脂增高,VCAM-1、ICAM-1及Rho激酶mRNA表达增加(P<0.05);与动脉硬化组对比,瑞舒伐他汀组各指标均改善,而法舒地尔组除对血脂无明显影响外,与瑞舒伐他汀具有相似的抗动脉粥样硬化作用(P<0.05)。结论法舒地尔具有抗动脉粥样硬化作用,其机制可能在于通过干预Rho/Rho激酶信号通路表达,抑制动脉内皮的炎症反应。

Rho蛋白调控分子机理研究进展

Rho蛋白作为信号通路重要的开关分子,在所有的真核细胞中发挥着重要的生理功能,因而对Rho蛋白调控的分子机理研究就极为重要.从Rho蛋白的结构、功能、调节Rho蛋白鸟苷酸结合形式的蛋白以及Rho蛋白已知效应物等方面总结了Rho蛋白调控分子机理的研究现状.

Rho激酶抑制剂的研究进展

Rho激酶对许多细胞活动,如血管平滑肌细胞收缩、肌动蛋白细胞骨架重组、细胞黏附和移动、胞质分裂、肿瘤细胞浸润和基因表达等具有重要的调节作用。Rho激酶还与多种疾病的发生和发展密切相关,如心脑血管疾病、支气管哮喘、青光眼、勃起功能障碍和肿瘤等。Rho激酶抑制剂已成为目前新药研究的热点,为心血管等多种疾病的治疗开辟了新途径。本文对近年来Rho激酶抑制剂的研究进展进行了综述。

Rock-1基因在缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织中的表达及法舒地尓的预防作用

目的:观察小G蛋白Rho相关激酶(Rock-1)基因在大鼠缺氧性肺动脉高压(HPH)肺组织中的表达规律,探讨法舒地尔(fasudil)对HPH的预防作用。方法:72只SD大鼠随机分为缺氧模型组(H组)和缺氧+fasudil预防组(fasudil组),对照组(C组)。采用常压间断缺氧法复制大鼠HPH模型,右心导管测平均肺动脉压力(mPAP),计算右心室(RV)/[左心室+室间隔(LV+S)]的重量比值作为右心肥厚指数,并用RT-PCR方法测定肺组织Rock-1及平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达水平。结果:mPAP在缺氧7天后明显增高(P<0.01),并随缺氧时间的延长,进一步升高。右心肥厚指数在H组第7天开始升高,第14天与C组比较差异有显著性(P<0.01)。与H组比较,fasudil组mPAP及右心肥厚指数均明显降低(P<0.01)。Rock-1基因在HPH发生早期即明显上调,第7天达高峰后维持于较高水平。α-SMA基因表达第7天明显上调,第14天达高峰,至模型后期仍高于基础表达;Rock-1基因表达较α-SMA提前达到高峰,二者呈显著正相关(r=0.883,P<0.05);fasudil组两基因表达水平均较H组明显降低(P<0.01)。结论:Rock-1基因在HPH大鼠肺组织中出现了明显表达异常,法舒地尔能显著降低mPAP,改善右心室肥厚,并可能通过抑制肺组织Rock-1基因表达发挥作用。

Rho激酶抑制剂对大鼠血管内皮的保护作用及eNOS表达的影响

目的探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔对大鼠血管内皮的保护作用及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法 30只雄性SD大鼠随机分为5组(每组6只),即空白对照组(Control组,腹腔注射0.9%生理盐水),高同型半胱氨酸血症(HHcy)模型组(HHcy组,腹腔注射0.9%生理盐水),低、中、高剂量法舒地尔干预组[L-、M-、H-干预组,分别经腹腔注射法舒地尔1、5、15mg/(kg.d)]。HHcy组及法舒地尔干预组均采用1.5%蛋氨酸饮用水持续饲养大鼠4周,构建HHcy血管内皮损伤模型;空白对照组大鼠以饮用水喂养。建模成功后采用酶法检测大鼠血清一氧化氮(NO)含量;分别用免疫组织化学法和Western blotting检测主动脉中eNOS、Rho相关的卷曲蛋白激酶(ROCK2)和Ras基因家族成员A(RhoA)蛋白的表达。结果与空白对照组比较,HHcy组大鼠血清中NO含量明显下降,主动脉中eNOS蛋白表达也明显下降(P<0.05)。与HHcy组相比,M-干预组和H-干预组大鼠血清NO浓度明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),而L-干预组则无明显变化(P>0.05);H-干预组主动脉血管内皮细胞eNOS表达明显高于HHcy组和L-干预组,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组相比,HHcy组RhoA和ROCK2表达明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);与HHcy组比较,H-干预组RhoA和ROCK2表达明显降低(P<0.05),而L-干预组和M-干预组则无明显差异(P>0.05)。结论高剂量法舒地尔可能通过抑制Rho/Rho激酶信号通路,增加NO和eNOS的表达,发挥对大鼠血管内皮的保护作用。

补阳还五汤通过调节HUVEC细胞Rho/Rho激酶信号通路作用于动脉粥样硬化的研究

目的研究补阳还五汤抗同型半胱氨酸(Hcy)诱导的脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的作用及其机制。方法采用Hcy造模,将内皮细胞随机分为10组,即空白组(10%空白血清),模型组(Hcy+10%空白血清),补阳还五汤低剂量组(5%含药血清+Hcy)、中剂量组(10%含药血清+Hcy)、高剂量组(20%含药血清+Hcy),10%FBS+Hcy对照组,Rho激酶(ROCK)阻断剂Y27632+Hcy组,靶分子肌球蛋白轻链激酶(MLCK)阻断剂ML-7+Hcy组,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580+Hcy组,细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059+Hcy组,24 h后,用IP裂解液(含PMSF)裂解细胞。用蛋白质印迹法(Western blot)测定ROCK、MLCK蛋白水平,用RT-PCR技术测定ROCK、MLCK m RNA的表达情况,并用激光共聚焦测定细胞骨架结构蛋白纤维肌动蛋白(F-actin)的变化。结果 Western blot与RT-PCR结果显示:模型组与空白组比较,HUVEC细胞ROCK、MLCK蛋白以及其m RNA水平明显上升,而补阳还五汤含药血清组和抑制剂组对其有明显的下调作用。激光共聚焦检测骨架蛋白F-actin实验中,与空白组比较,模型组细胞应力纤维明显增多;而补阳还五汤各剂量组相对于模型组,应力纤维的形成明显降低。结论补阳还五汤可能通过调节内皮细胞Rho/Rho激酶信号通路,阻止细胞骨架的改变,减轻内皮细胞损伤而发挥其抗动脉粥样硬化的作用。

Rho／Rho激酶信号转导通路与他汀类药物

他汀类药物的多效性与Rho/Rho激酶信号转导通路密切相关。他汀类药物通过抑制类异戊二烯的生成而影响Rho的膜定位功能及其对下游效应分子Rho激酶的激活作用,继而引起一系列细胞生物学效应的改变。Rho/Rho激酶信号转导通路与他汀类药物关系的阐明,至少可部分解释他汀类药物调脂作用以外的更广泛的药理活性,以指导其在临床的应用。

肿瘤细胞向血管外游走过程中内皮细胞调控机制的研究

目的 :阐明肿瘤细胞向血管外游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链激酶 (MLCK)及Rho Rho激酶的调控作用。方法 :利用肿瘤细胞向血管外游走的体外模型 ,观察肿瘤细胞的血管外游走状况 ,并测定肿瘤细胞游走过程中血管内皮单细胞层的电阻变化 ;通过Westernblot评价肿瘤游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链 (MLC)的磷酸化水平。结果 :肿瘤细胞可以穿过血管内皮细胞游走至血管外 ;并且肿瘤细胞向血管外游走过程中跨血管内皮细胞层的电阻下降、内皮细胞MLC的磷酸化水平升高 ;而内皮细胞肌球蛋白轻链激酶抑制剂 (ML 7)及Rho抑制剂 (C3转移酶 )、Rho激酶抑制剂 (Y 2 76 32 )能够抑制上述变化。结论 :内皮细胞MLCK及Rho Rho激酶可以通过控制MLC的磷酸化水平来引起内皮细胞骨架蛋白的改变 。

Rho/Rho激酶信号通路与冠心病

Rho/Rho激酶信号通路是体内普通存在的一条信号转导通路,它通过调节细胞内肌动蛋白骨架的聚合状态参与多种细胞功能,包括细胞收缩、迁移、黏附、增殖、凋亡及基因表达等。Rho/Rho激酶信号通路的异常激活在冠心病的发病机制和病理生理中发挥了重要作用,对此信号转导通路的研究可以为冠心病的预防和治疗提供新的靶点。现就Rho/Rho激酶信号通路的特征及其与冠心病的关系作一综述。

压力负荷心力衰竭大鼠心肌细胞内Rho/Rho激酶的表达及药物干预(英文)

目的探讨升主动脉缩窄压力超负荷心力衰竭大鼠心肌细胞内Rho/Rho激酶的表达及法舒地尔(fasudil)——Rho/Rho激酶拮抗剂对心力衰竭的影响。方法—制备升主动脉缩窄大鼠心力衰竭及假手术组(S组)模型。将升主动脉缩窄术后Wistar雌性大鼠随机分为2组,一组为心力衰竭组(H组),给予生理盐水0.1ml,腹腔注射,每日2次;一组为fasudil治疗组(F组),治疗组给予fasudil5mg/Kg,腹腔注射,每日2次;治疗4周。H组、F组及S组每组各10只大鼠。观察各组大鼠各项指标变化。结果H组鼠心肌细胞RhoA,Rho激酶mRNA表达显著增高,F组心肌细胞RhoAmRNA,Rho激酶mRNA表达下降。结论心肌细胞RhoA、Rho激酶表达与充血性心力衰竭密切相关,法舒地尔可有效降低心肌细胞内RhoAmRNA,Rho激酶mRNA表达,缓解心力衰竭症状,可能为一种新的、有效的治疗心力衰竭的血管扩张剂。

Rho激酶抑制剂对百草枯中毒大鼠肺纤维化的干预研究

目的:探讨Rho激酶抑制剂对百草枯(PQ)中毒大鼠肺纤维化的影响及可能的机制。方法:将96只SPF级SD大鼠随机分为4组,每组24只,即正常对照组(Control组),Rho激酶抑制剂对照组(RI组),PQ染毒组(PQ组),Rho激酶抑制剂干预组(PQ+RI组)。在PQ灌胃第7、14、28天后,每组随机取6只大鼠,麻醉后处死,留取肺组织标本。碱水解法测定肺组织羟脯氨酸(HYP)含量,蛋白印迹法(Western blotting)测定Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、结缔组织生长因子(CTGF)的表达。光镜下观察肺组织的病理变化。结果:与Control组相比,RI组无显著变化(P>0.05),PQ染毒组和RI干预组(均满足P<0.05)在第7、14、28天,HYP含量显著升高(P<0.05),I,Ⅲ型胶原蛋白、CTGF的表达也显著提升(P<0.05)。与PQ组比较,RI干预组在第7、14、28天HYP含量显著降低,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、CTGF的表达也显著下降。肺组织的病理结果显示PQ染毒组在灌胃给药后第28天的肺纤维化程度最严重,与之相比RI干预组在第7、14、28天肺纤维化程度均有减轻。结论:Rho激酶抑制剂,通过调节CTGF以及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达并且减少蛋白质沉积,对百草枯中毒导致的肺纤维化有明显的治疗作用。

Rho与中枢神经系统轴突再生

Rho是小分子质量GTP酶Rho家族成员 ,在细胞的一些信号转导途径中起着分子开关的作用 .Rho能通过作用于肌动蛋白骨架系统引起轴突生长锥塌陷 ,从而抑制轴突生长 .研究表明 ,Nogo A、MAG、OMgp等髓鞘源性的轴突再生抑制分子均可通过激活Rho介导的信号转导途径抑制轴突再生 .

Rho/Rho激酶在COPD大鼠气道的表达及其对气道重塑的影响

目的探讨Rho/Rho激酶信号通路在慢性阻塞性肺疾病大鼠气道中的表达及其对气道的影响。方法清洁级相同重量级Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组、COPD组、Y-27632干预组,每组20只。分析各组大鼠的支气管壁厚度(Wat)和平滑肌厚度(Wam),以及RhoA,ROCKⅡmRNA的表达。结果与对照组相比,COPD组大鼠RhoA,ROCKⅡmRNA表达明显增高,Wat、Wam也明显增加(P<0.05);与COPD组相比,Y-27632干预组大鼠RhoA,ROCKⅡmRNA的表达明显降低,Wat、Wam也明显降低(P<0.05)。结论 COPD组大鼠RhoA,ROCKⅡmRNA表达明显增高;应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632能够明显控制RhoA,ROCKⅡmRNA的表达,从而抑制慢性阻塞性肺疾病大鼠的气管壁增厚和平滑肌增殖。

Rho-ROCK信号通路功能及其活性调节

Rho-ROCK信号在细胞分化,细胞周期进展,增殖和凋亡中发挥着重要的作用。机体通过调节Rho-ROCK信号及其相关性因子可以诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分化为脂肪细胞,成骨细胞,成软骨细胞等。不同阶段ROCK信号通路的失调与心血管、代谢、神经退行性疾病、以及癌症的发生有关。主要阐述RhoROCK信号通路功能及调节Rho-ROCK活性的各种模式,为研究与之相关疾病提供思路。

养心颗粒对易损斑块Rho/Rho激酶信号通路血清LDL-C、TC、ET-1、TNF-α含量的影响

目的:观察养心颗粒对易损斑块Rho/Rho激酶信号通路血清LDL-C、TC、ET-1、TNF-α含量的影响。方法:随机将32只雄性家兔分为空白对照组、模型对照组、养心颗粒组、法舒地尔组。分别给予普通饲料及高脂饮食喂养8周,采用球囊损伤颈总动脉并注射P53基因转染建立易损斑块模型。药物治疗2周后采用ELISA法检测LDL-C、TC、ET-1、TNF-α水平。结果:与模型组比较,养心颗粒组和法舒地尔组血清中LDL-C、TC、ET-1、TNF-α含量下降(P <0. 05);养心颗粒组与法舒地尔组比较,血清中LDL-C,TC、ET-1、TNF-α含量,差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论:养心颗粒可降低易损斑块Rho/Rho激酶信号通路血清中LDL-C、TC、ET-1、TNF-α的含量。

法舒地尔对压力负荷心力衰竭大鼠的作用

目的探讨法舒地尔(fasudil)对升主动脉缩窄压力超负荷心力衰竭的作用。方法将升主动脉缩窄术后Wistar雌性大鼠随机分为5组,每组10只。心力衰竭组,腹腔注射生理盐水0.1ml,每日2次;1、5、20mg/kgfasudil组,腹腔注射,每日2次;10mg/kg硝苯地平组,每日3次灌胃。同时制备模型设置假手术组作为对照(n=10),腹腔注射生理盐水0.1ml,每日2次。观察各组大鼠指标变化。结果心力衰竭鼠心肌细胞RhoA、Rho激酶mRNA表达显著增高,fasudil药物治疗4周后,心肌细胞内RhoA、Rho激酶mRNA表达下降,且呈剂量依赖关系;应用硝苯地平治疗4周后,心肌细胞内RhoA、Rho激酶mRNA表达无明显变化。结论心肌细胞内RhoA、Rho激酶mRNA表达与充血性心力衰竭密切相关,法舒地尔可降低RhoA、Rho激酶mRNA表达,缓解心力衰竭症状,可能为一种新的、有效的治疗心力衰竭的血管扩张剂。

辛伐他汀对野百合碱诱导肺动脉高压大鼠Rho/Rock的影响

目的观察辛伐他汀在野百合碱(MCT)诱导的肺动脉高压(PAH)大鼠模型中对Rho/Rock表达的影响,探讨辛伐他汀改善MCT所致PAH的机制。方法雄性SD大鼠30只随机均分为对照组、MCT模型组和辛伐他汀干预组(SS组)。测量各组大鼠干预后平均肺动脉压力(mPAP)、右心室肥厚指数(RVHI);观测大体的组织形态病理改变,采用免疫组化和Westernblot检测肺组织中的PCNA、α-SMA、Rho/Rock的表达。结果与对照组及干预组相比,MCT组的mPAP及RVHI显著增加(P<0.05),PCNA、α-SMA、Rho/Rock的表达显著增多(P<0.05);与对照组相比,SS组的mPAP及RVHI差异无统计学意义(P>0.05);而PCNA、α-SMA、Rho/Rock的表达显著增多(P<0.05)。结论辛伐他汀可有效减轻MCT诱导的PAH大鼠肺动脉压力,其机制可能与辛伐他汀通过Rho/Rock信号通路改善肺动脉平滑肌增生重构有关。

内皮细胞Rho/Rho激酶介导纤维肉瘤细胞血管外游走的机制

目的研究内皮细胞Rho/Rho激酶在纤维肉瘤细胞血管外游走过程中的调控机制。方法采用血管外游走体外模型观察纤维肉瘤细胞血管外游走状况;测定游走过程中血管内皮单细胞层电阻变化;进行细胞内磷酸化实验,利用放射自显影技术评价纤维肉瘤细胞游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平。结果纤维肉瘤细胞可以穿过血管内皮细胞游走至血管外,在游走过程中跨血管内皮细胞层电阻下降,内皮细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平升高。内皮细胞Rho抑制剂(C3转移酶)、Rho激酶抑制剂(Y-27632)能够抑制上述变化。结论内皮细胞Rho/Rho激酶可能是通过调节肌球蛋白轻链磷酸化水平诱导纤维肉瘤细胞向血管外游走。