钩藤总碱抗实验性脑缺血的作用

目的 观察钩藤总碱 (Rhynchophyllatotalalkaloids,RTA )对脑缺血损伤的影响并对其作用机制作初步探讨。方法 采用小鼠断头张口喘气模型 ,大鼠大脑中动脉缺血 2h/再灌注 2 2h模型 ,神经病学评分 ,脑梗死范围及脑组织水含量变化 ,观察对脑缺血 /再灌注损伤的影响 ;通过测定大鼠脑组织中一氧化氮合酶 (nitricoxidesynthase,NOS)、超氧化物歧化酶 (superoxidedisumtase ,SOD)活性及丙二醛 (malon dialdehyde ,MDA)含量的变化 ,并经原位末端标记法观察对脑细胞凋亡的影响以探讨药物作用的机制。结果 RTA可延长小鼠张口喘气时间 ,降低大鼠脑缺血 /再灌注后神经病学评分及梗死范围 ,降低脑组织MDA、NOS含量及升高SOD活性 ,RTA还能减少神经细胞的凋亡。结论 RTA对脑缺血 /再灌注损伤有保护作用 ,其作用与抑制NOS活性 ,提高SOD活性 ,减少神经细胞脂质过氧化损伤和抑制神经细胞凋亡有关。

钩藤总碱对焦虑模型行为学和脑组织单胺类神经递质的影响

目的考察钩藤总碱(rhynchophylla total alkaloids,RTA)抗焦虑药效。方法采用国际通用的大鼠高架十字迷宫焦虑动物模型(elevated plus-maze anxiety animal model,EPM)和小鼠期待性焦虑实验,观察RTAⅠ组[200 mg/(kg.d)]、RTAⅡ组[400 mg/(kg.d)]、RTAⅢ组[800 mg/(kg.d)]3个剂量组对大、小鼠焦虑行为学的影响;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定RTA干预前后EPM大鼠的脑组织内去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)单胺类神经递质的含量。结果与空白对照组比较,RTA 3个剂量组大鼠进入开放臂次数比例(OE%)和在开放臂滞留时间比例(OT%)有显著升高(P<0.05),RTA 3个剂量组小鼠均无应激性体温升高,RTAⅢ组EPM大鼠脑组织中NE、DA、5-HT含量较空白对照组显著下降(P<0.05)。结论在大鼠EPM和小鼠期待性焦虑实验中,RTA显示出一定的抗焦虑作用,其作用机制可能与降低EPM刺激后大鼠脑组织中NE、DA和5-HT含量有关。

钩藤中不同成分降压作用的差异

目的 :比较钩藤中提取的异钩藤碱、钩藤碱、钩藤总碱及非生物碱部分的降压作用。方法 :大鼠麻醉后经颈总动脉插管记录外周血压和经股静脉微量输注实验用药。结果 :实验表明钩藤中 4种成分的降压强度为异钩藤碱(4 2 .0 % ) >钩藤碱 (32 .1% ) >钩藤总碱 (2 1.3% ) >钩藤非生物碱 (12 .4% )。结论 :提示钩藤中主要降压成分为异钩藤碱和钩藤碱。

酸性染料比色法测定钩藤的总生物碱含量

目的:探讨钩藤中总生物碱含量测定的方法。方法:采用酸性染料比色法测定钩藤中总生物碱含量。结果:酸性染料比色法的显色条件为pH3.6缓冲液5.0 ml,溴甲酚绿液5.0 ml;氯仿萃取三次,每次4.0 ml,每次萃取振摇2 min,静置5 min。钩藤碱在6.018μg～108.324μg范围内呈线性关系,回收率平均值97.19%,RSD=1.34%(n=6)。结果:该方法灵敏度高,准确度好、重现性好。

钩藤总生物碱和芥子碱硫氰酸盐组分配伍对血管内皮细胞的变化作用和机制

目的研究中药组分钩藤总生物碱、芥子碱硫氰酸盐及其配伍对肿瘤坏死因子α(TNF-α)导致的血管内皮细胞的变化作用和机制。方法体外培养大鼠血管内皮细胞,以TNF-α建立血管内皮细胞炎症模型。采用扫描电镜技术观察细胞形态的变化,采用ELISA测定细胞分泌内皮素1(ET-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1),RT-PCR测定ICAM-1、VCAM-1和ET-1的mRNA表达,硝酸还原酶法测定细胞分泌血管内皮舒张因子一氧化氮(NO)水平。结果 TNF-α(5μg/L)可在体外诱导血管内皮炎症模型。钩藤总生物碱与芥子碱硫氰酸盐配伍可改善细胞形态结构,降低ET-1、ICAM-1和VCAM-1分泌,与钩藤总生物碱、芥子碱硫氰酸盐差异无显著性(P>0.05);提高细胞NO分泌,优于钩藤总生物碱、芥子碱硫氰酸盐(P<0.05);下调细胞ICAM-1 mRNA表达,优于钩藤总生物碱、芥子碱硫氰酸盐(P<0.05);下调细胞VCAM-1和ET-1 mRNA表达,优于芥子碱硫氰酸盐(P<0.05)。结论钩藤总生物碱、芥子碱硫氰酸盐及其配伍具有保护TNF-α致血管内皮细胞炎症的作用。

钩藤总碱与夏天无总碱合用对大鼠脑缺血再灌注的影响

目的观察钩藤总碱(钩藤)与夏天无总碱(夏天无)合用对脑缺血/再灌注损伤的保护作用。方法各组造模前灌胃给药每天2次,共5次,末次给药30min后,采用大鼠大脑中动脉缺血(2h)/再灌注(22h)制作脑缺血损伤模型,造模12h后再给药1次,并进行神经病学评分,检测脑梗塞范围及脑组织水含量,大鼠脑组织中一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的变化。结果两药合用可降低大鼠脑缺血/再灌注后神经病学评分及梗塞范围,降低脑组织MDA含量、NOS活性及升高SOD活性(P<0.05),联合用药的效应较单用钩藤或夏天无增强(P<0.05),而对中枢抑制作用较单用钩藤减轻。结论钩藤和夏天无联合应用对脑缺血/再灌注损伤有保护作用,其作用机制与抑制脑NOS活性、提高SOD活性及减少脑神经细胞脂质过氧化损伤有关。

钩藤总生物碱胶囊降压作用研究

目的观察钩藤总生物碱胶囊的降压效果。方法给予原发性高血压大鼠模型、肾性高血压大鼠模型及正常大鼠钩藤总生物碱30．0、15．0、7．5mg／kg3个剂量，灌胃1次／d，观察钩藤总碱胶囊的降压作用。结果钩藤总碱胶囊对原发性高血压大鼠给药1d能缓慢降低血压，给药第3天时能明显降低血压，并抑制醛固酮（ALD）的分泌。对于肾性高血压大鼠模型，钩藤总碱胶囊于给药后12h开始使血压降低，降压程度维持在12％。20％，并有降低血管紧张素Ⅱ和内皮素的趋势。钩藤总碱胶囊能于给药第3天降低正常大鼠的血压，并能持续降压。结论钩藤总碱胶囊具有明显的降压作用，其起效较慢，但作用平稳，持续。其降压的作用机制可能与肾素～血管紧张素一醛固酮系统有关。

钩藤生物碱对小鼠苯丙胺行为敏化的影响

目的:探讨钩藤生物碱对苯丙胺行为敏化的影响。方法:测定小鼠的自主活动,观察钩藤及钩藤总碱对小鼠自主活动的影响。分别采用单次给予苯丙胺致小鼠高活动性及反复间断苯丙胺处理建立苯丙胺行为敏化小鼠模型,观察钩藤生物碱对苯丙胺高活动性及行为敏化获得和表达的影响。结果:钩藤碱低(40 mg.kg-1)、高(80 mg.kg-1)剂量和钩藤总碱(80 mg.kg-1)灌胃给药后,均能减少小鼠的自主活动,降低苯丙胺的高活动性,抑制小鼠苯丙胺行为敏化的获得,阻断小鼠苯丙胺行为敏化的表达,其中高剂量钩藤碱和钩藤总碱的作用较显著。结论:钩藤生物碱对中枢神经系统功能具有抑制作用,对苯丙胺诱导的小鼠行为敏化的获得和表达有抑制作用。提示钩藤生物碱对苯丙胺类物质的精神依赖具有干预作用.

钩藤总碱治疗阿尔茨海默病的药理作用研究

目的:观察钩藤总碱对阿尔茨海默病(AD)斑马鱼模型的防治作用以及对AD小鼠学习记忆能力的影响。方法:用三氯化铝(AlCl3)诱发斑马鱼AD模型,观察钩藤总碱对AD斑马鱼的运动功能和反应能力的影响。采用Morris水迷宫观察钩藤总碱对Aβ25-35(β淀粉样肽25-35)所致AD小鼠学习记忆能力的影响。结果:在实验浓度条件下,钩藤总碱对AD斑马鱼的最大耐受浓度为100μg/mL,钩藤总碱11、33和100μg/mL浓度组的运动距离分别为1896、2363和1953 mm,其运动功能改善作用分别为41.5%、61.0%和43.9%。在对位训练(检测工作记忆)中,钩藤总碱低剂量组能够显著缩短Aβ25-35所致AD小鼠找到平台的潜伏期和游泳距离;在对位探查训练(检测空间记忆)中,钩藤总碱高、低剂量组均能够显著延长Aβ25-35所致AD小鼠在原平台所在象限的活动时间,显著增加其穿越原平台位置的次数;表明钩藤总碱对Aβ25-35所致AD小鼠的工作记忆和空间记忆有显著改善作用。结论:钩藤总碱对阿尔茨海默病具有防治作用,主要表现为对AD斑马鱼的运动功能和反应能力有明显改善作用,并且能够显著改善AD小鼠记忆能力。

钩藤总碱缓释滴丸的急性毒性研究

目的观察钩藤总碱缓释滴丸对小鼠的急性毒性反应并与钩藤总碱进行比较。方法小鼠一次性分别灌胃钩藤总碱及钩藤总碱缓释滴丸，观察14天内的毒性反应和死亡情况，计算其LD50。结果小鼠灌胃钩藤总碱的LD50为649．85mg／kg，95％的可信区间为549．45—768．59mg／kg；钩藤总碱缓释滴丸的LD50为1900．7mg／kg，95％的可信区间为1651．8～2167．9mg／kg。结论钩藤总碱缓释滴丸按临床常用剂量给药具有较好的安全性。

夏天无、钩藤生物碱抗脑细胞凋亡作用及急性毒性

目的 观察钩藤总碱 (RHA)、夏天无总碱 (COAMTA)对脑缺血损伤诱发凋亡的保护作用。方法 采用小鼠断头张口喘气模型 ,大鼠大脑中动脉缺血 2h/再灌注 2 2h模型 ,观察RTA、COAMTA抗脑缺血 /再灌注损伤的效应。结果 两药合用可延长小鼠张口喘气时间 ,降低大鼠脑缺血 /再灌注后细胞凋亡。结论 两药合用对脑缺血 /再灌注损伤有保护作用。

钩藤总碱对大鼠肝脏及肝功能的影响

目的研究钩藤总碱对大鼠肝脏及肝功能所造成的影响。方法选取SPF级SD大鼠92只,按钩藤总碱剂量不同,分为小剂量组,中剂量组、高剂量组和空白对照组,各23只,分别对大鼠给予生理盐水与不同剂量的钩藤总碱水溶液,药效结束后的第10周处死,检测大鼠肝脏各项指标。结果钩藤总碱各剂量组的肝功能指数明显比对照组高,对照组肝脏指数为(28.47±3.55),大剂量组肝脏指数为(46.28±2.98),2组之间差异具有统计学意义(P<0.05);对照组血清丙氨酸氨基转移酶指数为(51.22±6.33),大剂量组血清丙氨酸氨基转移酶指数为(158.39±8.36);对照组谷氨酸氨基转化酶指数为(152.14±11.25),大剂量组谷氨酸氨基转化酶指数为(293.14±41.58),差异有统计学意义(P<0.05),钩藤总碱剂量越大,肝功能指数的水平越高。给药10周后,对各组大鼠的白细胞、红细胞、血小板等进行检测,对照组及各剂量组的血液指标均无明显变化(P>0.05)。结论钩藤总碱具有肝毒性,钩藤总碱的剂量越高,对肝功能的影响越大,因此在临床治疗中要合理使用钩藤总碱的剂量。

钩藤总碱对麻醉兔窦房结功能及心电图的影响

采用心房起搏法观察了钩藤总碱对窦房结功能及心电图的影响，静脉注射钩藤总碱8mg／kg，心率减慢，心电图P－R间或延长，约藤总碱15mg／kg减慢心率及延长P－R间期作用增强，窦房传导时间延长，窦房结恢复时间一过性增加，而校正的窦房结恢复时间及窦房结恢复时间指数未见变化。

贵州不同产地钩藤的总生物碱含量测定

为贵州钩藤总生物碱含量的测定及质量标准制定提供参考,以钩藤碱为对照品,采用酸性染料比色法在pH 3.6的邻苯二甲酸氢钾-盐酸缓冲液条件下,于波长413nm处测定总生物碱的含量。结果表明:钩藤碱含量(x)在0.022 4~0.358 4mg与吸光度(y)有良好的线性关系,其回归方程y=0.500 1x-0.043 4,R^2=0.99 9;平均回收率为97.11%,RSD为1.93%,该方法灵敏度高,准确度好,重现性好。贵州不同来源钩藤的总生物碱平均含量存在差异,即贵州黎平无柄果钩藤(2.218 3 mg/g)>贵州开阳钩藤(1.834 9mg/g)>贵州剑河无柄果钩藤(1.456 9mg/g)>贵州黎平钩藤(1.089 5mg/g)。

钩藤地上部营养器官总生物碱积累规律研究

【目的】研究钩藤[Uncaria rhynchophylla(Miq.)Miq. ex Havil.]地上部营养器官总生物碱含量变化规律,阐明总生物碱积累及源库关系,确认钩藤药材最佳采收部位及采收期,改变仅以带钩枝条为药材的传统方式,从而避免钩藤药材资源的浪费,同时为钩藤总生物碱研究提供基础资料。【方法】运用酸性染料比色法测定钩藤主茎、侧枝、叶及钩总生物碱含量,从而阐明总生物碱的积累规律。【结果】钩藤地上部营养器官中总生物碱积累的最大值分布在6—9月及11月,钩中总生物碱积累最大值为6.599 mg/g、主茎为7.726 mg/g、侧枝为6.880 mg/g、叶为6.890 mg/g,且钩中总生物碱含量在钩藤营养生长期表现为升高趋势,在生殖生长期则呈降低趋势,而全年积累均值由大到小表现为主茎、钩≈侧枝、叶;综合各营养器官基本生理功能与其总生物碱积累规律,从而推测叶为生物碱合成源,主茎及侧枝作为运输通道,钩为库;丹寨基地不同生长年限钩藤中总生物碱积累由大到小表现为三年生、五年生、六年生、四年生,长顺基地为四年生、五年生、六年生、三年生,而3—12月地上部营养器官中总生物碱积累总量较高的是:7月8.911 mg/g、11月8.750 mg/g、6月8.237 mg/g。【结论】钩藤地上部营养器官均可作为药材采收,其采收期应在6月、7月及11月。

钩藤生物碱提取工艺研究

目的:优选钩藤生物碱的最佳提取工艺。方法:以钩藤总碱的含量,钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱的含量总和及浸膏得率为评价指标,对比了水煮、渗漉、索式回流和回流四种方法的提取效果,优选出回流的提取方法,并采用正交设计的方法考察溶剂浓度、溶剂倍量、提取时间及提取次数对钩藤生物碱的提取率和含量的影响。结果:钩藤生物碱的最佳提取工艺为:10倍量90%乙醇,回流提取2次,每次1h。结论:优选确定的工艺简便、稳定可行。

钩藤总碱预处理对小鼠急性脑梗死模型神经元活性的影响

目的考察钩藤总碱对急性脑梗死和脑缺氧的作用。方法用光化学方法制作脑梗死动物模型,用连二亚硫酸钠制作化学缺氧细胞模型。结果钩藤总碱预处理能减轻脑梗死面积并对抗皮层神经元缺氧。结论钩藤总碱对中枢神经元有保护作用。

钩藤总碱与天麻素联用对自发性高血压大鼠血压和血压变异性的影响

背景钩藤和天麻是治疗高血压的传统中药,常联合应用。目的研究钩藤、天麻的活性成分钩藤总碱及天麻素抗高血压和改善血压变异性的协同作用。方法 60只自发性高血压大鼠随机分为11组,分别是:对照组、钩藤总碱4组(25、50、100、200mg/kg)、天麻素3组(8、80、800mg/kg)、钩藤总碱+天麻素3组[(50+8)、(50+80)、(50+800)mg/kg],腹腔给药。采用清醒自由活动大鼠血压测定系统监测给药前后大鼠的血压和血压变异性。用两因素多水平析因设计、概率和法和q检验方法评价钩藤总碱和天麻素降压以及改善血压变异性的协同作用。结果在25～200mg/kg剂量范围内,钩藤总碱给药量与血压降低幅度有量效关系。其中,200mg/kg剂量组给药前后收缩压分别为(182±16)和(142±12)mmHg,舒张压分别为(133±21)和(100±19)mmHg,给药前后血压平均值的差异有统计学意义(P<0.01)。天麻素单独注射剂量达到800mg/kg也没有降低自发性高血压大鼠的血压。而钩藤总碱+天麻素组[(50+8)、(50+80)、(50+800)mg/kg]有降压作用,钩藤总碱和天麻素联用具有协同降压作用,对血压变异性没有不良影响。结论钩藤总碱具有确切的降压作用,但对血压变异性没有影响。天麻素本身不降低血压,但与钩藤总碱联用具有协同降压作用。

钩藤总生物碱增强自噬降低氧化应激诱导的内皮细胞炎性反应

目的:探讨钩藤总生物碱调控细胞自噬对氧化应激诱导的内皮细胞炎性反应的影响。方法:将HUVECs随机分为6组:正常对照组、oxLDL组、DMSO组、雷帕霉素(Rap)组、钩藤总生物碱组、钩藤总生物碱+3-MA组。以oxLDL诱导氧化应激并进一步诱导产生炎性反应。透射电镜和免疫荧光进行自噬形态学检测,Western blot检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、p62以及核转录因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)表达,ELISA法检测培养上清中细胞间黏附分子1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子1(VCAM-1)含量,流式细胞技术评价细胞凋亡情况。结果:oxLDL明显上调NF-κB、TNF-α、CRP表达和ICAM-1、VCAM-1含量(P<0.05)。同时oxLDL组自噬小体增多,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin-1的表达显著上调,p62表达下调(P<0.05)。与oxLDL组比较,钩藤总生物碱明显促进了自噬小体的产生,显著上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Beclin-1的表达,下调p62表达(P<0.05)。同时减少NF-κB、TNF-α、CRP的表达及ICAM-1、VCAM-1含量(P<0.05),减轻了细胞凋亡,3-MA在一定程度上抑制了其作用效果。结论:钩藤总生物碱能够通过增强细胞自噬而降低氧化应激诱导的内皮细胞炎性反应,减轻细胞凋亡。

离子交换树脂对钩藤总生物碱的纯化工艺

目的:建立阳离子交换树脂纯化钩藤总生物碱的工艺。方法:以钩藤总生物碱为研究指标,考察离子交换树脂分离钩藤总生物碱的工艺条件。结果:选择732型阳离子交换树脂,以1 mL.min-1的流速上样,分别用10 BV水,6 BV 80%乙醇洗脱除杂,最后选用1%氨性80%乙醇洗脱得到钩藤总生物碱,含量达到50%。结论:该方法工艺较简单,总碱含量较高,适合工业化生产。