RNF187在前列腺癌细胞中的表达及其对前列腺癌细胞增殖、侵袭的影响

目的探讨环指蛋白187(RNF187)在前列腺癌细胞中的表达及其对前列腺癌细胞增殖、侵袭的影响。方法通过癌症基因组图谱(TCGA)和高通量基因表达(GEO)数据库分析前列腺癌组织和正常组织间RNF187的表达差异,体外培养正常前列腺上皮细胞系RWPE-1和人前列腺癌细胞系LNCaP、C4-2、DU145、PC-3,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)测定RWPE-1、LNCaP、C4-2、DU145、PC-3中RNF187 mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法测定RNF187蛋白表达水平。转染RNF187-siRNA1、RNF187-siRNA2至DU145、PC-3,RT-qPCR测定RNF187 mRNA相对表达量、CCK-8法测定细胞活性,5-乙炔基-2´脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法测定细胞增殖能力,Transwell小室测定细胞的迁移和侵袭能力,蛋白免疫印迹法检测RNF187和上皮-间充质转化(EMT)标志蛋白及基质金属蛋白酶(MMP-9)的蛋白表达水平。结果TCGA和GEO数据集中,前列腺癌组织中RNF187表达量均高于正常前列腺组织,Gleason评分及分期较高者的表达量较高(P均<0.05)。人前列腺癌细胞PC-3、LNCaP、C4-2、DU145中RNF187 mRNA及蛋白表达均高于正常前列腺上皮细胞RWPE-1(P均<0.01)。RNF187-si1组、RNF187-si2组DU145、PC-3中的RNF187 mRNA相对表达量分别低于Control组的DU145和PC-3中的RNF187 mRNA相对表达量(P均<0.001)。RNF187敲减后,DU145、PC-3细胞增殖活性及增殖、侵袭和迁移能力下降,RNF187、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、MMP-9蛋白相对表达量均降低,上皮钙黏蛋白(E-cadherin)相对表达量升高(P均<0.05)。结论RNF187在前列腺癌组织中过表达,敲减RNF187可降低前列腺癌DU145、PC-3的细胞增殖活性及增殖、侵袭和迁移能力。

环指蛋白187过表达后对人脑胶质瘤细胞U87的影响

目的探究环指蛋白187(ring finger protein 187,RNF187)过表达后对人脑胶质瘤细胞U87的影响及其可能机制。方法体外培养胶质瘤细胞系U87,转染过表达RNF187入U87细胞,对比分析RNF187过表达对肿瘤细胞生长增殖能力、细胞干性和体外侵袭及转移能力;最后通过检测RNF187及焦亡标志物,即炎性小体3(inflammasome3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、GSDMD和GSDME的表达,明确RNF187与焦亡的关系。结果CCK-8、细胞克隆和Transwell实验证实,RNF187过表达后U87细胞形态上肿胀肿大,且细胞增殖和侵袭能力较对照组增强,RNF187过表达组细胞增殖率(2.24±0.16)高于其他两组;RT-PCR和Western blot实验表明,RNF187过表达后焦亡相关标志物(NLRP3、ASC、GSDMD、GSDME)表达水平较对照组升高(P<0.05)。结论RNF187在胶质瘤细胞表达增多,增加胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力,可能是通过促进焦亡实现的。

环指蛋白187在乳癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨环指蛋白187(RNF187)在乳癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 选择行乳癌改良根治术的女性病人52例,其中发生间质脉管癌栓29例(高风险组),没有发生间质脉管癌栓23例(低风险组)。采用实时定量PCR法和免疫组织化学法,检测各组乳癌及癌旁正常组织中RNF187 mRNA和蛋白的表达,并分析其表达与病人临床病理特征的关系。结果 乳癌组织中RNF187 mRNA的表达明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(t=2.887,P<0.05);高风险组RNF187 mRNA表达明显高于低风险组(t=3.676,P<0.05)。RNF187阳性染色主要定位于肿瘤细胞的胞质及胞核中,尤以胞质为主,乳癌组织呈明显深染,癌旁正常组织呈淡染,乳癌组织中RNF187表达与相应癌旁正常组织比较差异有统计学意义(χ^(2)=22.190,P<0.01)。高风险组RNF187表达与低风险组比较差异有统计学意义(χ^(2)=4.293,P<0.05)。结论 RNF187在乳癌组织中的高表达可能与乳癌的易复发、转移等不良预后有关。RNF187可能成为判断乳癌不良预后的指标及临床治疗的靶点。

沉默环指蛋白187对人高转移性肝癌细胞裸鼠移植瘤生长机制的研究

目的观察沉默环指蛋白(RNF)187基因的慢病毒载体对人高转移性肝癌细胞裸鼠中成瘤效应的影响。方法将靶向RNF187基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒(LV-shRNA-RNF187)和阴性对照慢病毒(LV-shRNA-NC)转染至高转移性肝癌细胞(MHCC97-H),并分别作为vshRNF187组和vshNC组,未转染MHCC97-H细胞作为空白对照(Control)组。将3组细胞系接种于裸鼠后观察裸鼠移植成瘤情况及移植瘤生长情况。4周后测量肿瘤的体积和重量,绘制移植瘤生长曲线。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测裸鼠移植瘤中RNF187的表达。计量资料进行t检验分析,计数资料组间分析采用χ^(2)检验。结果3组裸鼠接种癌细胞后均有肿瘤形成。vshRNF187组裸鼠的肿瘤体积[(746±154)mm],明显低于vshNC组和Control组[(1502±315)、(1590±418)mm],差异有统计学意义(t=5.885、5.083,P<0.01)。vshRNF187组裸鼠瘤体重量[(0.79±0.13)g],低于vshNC组和Control组[(1.57±0.32)、(1.63±0.41)g],差异有统计学意义(t=5.618、4.926,P<0.01)。vshRNF187组瘤组织中RNF187 mRNA的表达量(0.39±0.06)明显低于vshNC组和Control组(1.03±0.06、1.02±0.07,t=21.192、1.623,P<0.01),vshRNF187组瘤组织中RNF187蛋白的表达量(0.365±0.049)明显低于vshNC组和Control组(1.018±0.123、1.168±0.137,t=13.663、14.798,P<0.01),差异均有统计学意义。结论沉默RNF187基因能有效抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长。

环指蛋白187诱导上皮间变促进肝癌细胞株转移的研究

目的:探讨环指蛋白187(RNF187)表达与肝癌侵袭转移和上皮间变的关系。方法:2019年4月至2019年10月,利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测高转移潜能肝癌细胞株(MHCC97-H)和低转移潜能的肝癌细胞株(PLC/PRF/5、HepG2,中国科学院上海生物所)中RNF187的表达。通过慢病毒转染技术沉默RNF187后,RT-qPCR和Western blot法分别检测RNF187 mRNA及蛋白的表达水平及上皮-间充质转化(EMT)分子标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、黏结合蛋白多糖-1(Syndecan-1)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形纤维蛋白(Vimentin)的表达情况,噻唑蓝(MTT)法和Transwell法分别检测MHCC97-H细胞增殖和侵袭能力的影响。计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验。结果:高转移潜能组MHCC97-H的RNF187的mRNA表达(0.082±0.006)明显高于低转移潜能组PLC/PRF/5(0.014±0.003)、HepG2(0.017±0.002,t=41.755、36.248,P均<0.05),MHCC97-H的RNF187蛋白表达(2.8±0.3)明显高于PLC/PRF/5(1.8±0.2)、HepG2(1.7±0.2,t=11.030、11.667,P均<0.05)。MHCC97-H-Mock和MHCC97-H-短发卡RNA(shRNA)-RNF187的EMT分子标志物的表达分别为,上皮标志物E-cadherin(0.81±0.08,0.31±0.06)、Syndecan-1(0.70±0.08,0.22±0.07);间皮标志物N-cadherin(0.28±0.04,0.73±0.09)和Vimentin(0.26±0.03,0.68±0.08)。两组细胞株EMT各分子标志物的表达比较差异有统计学意义(t=22.312、24.634、19.424、17.854,P均<0.05),提示MHCC97-H-shRNA-RNF187细胞株EMT过程显著下调。MTT法示,72 h后,MHCC97-H-shRNA-RNF187的增殖能力(2.2±0.4)明显低于MHCC97-H-Mock(4.5±0.6,t=2.428,P<0.05)。Transwell小室法示,MHCC97-H-shRNA-RNF187组细胞穿过微孔滤膜的细胞数量[(178±67)个]明显少于MHCC97-H-Mock组[(482±73)个,t=14.563,P<0.05]。结论:RNF187表达可诱导EMT并参与肝癌细胞的侵袭与转移过程。

沉默环指蛋白187表达调控自噬对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨环指蛋白187(RNF187)调节自噬水平产生对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法通过生物信息学手段分析RNF187在肝癌中的mRNA水平。分别使用小干扰RNA(siRNA)阴性对照和靶基因进行转染的Huh7细胞作为未经转染(NC)组和敲低RNF187组;以上两组细胞转染24 h后添加二甲基亚砜(DMSO)的细胞分别作为NC+DMSO组和敲低RNF187+DMSO组;行siRNA靶基因转染24 h后添加巴弗洛霉素A1(BFA)的细胞作为敲低RNF187+BFA组。通过CCK8细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell实验和蛋白质印迹法探究RNF187对肝癌细胞恶性生物学行为和自噬水平的调控。结果与正常肝脏组织样本比较,RNF187在肝癌样本中的mRNA水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与NC组相比,敲低RNF187组细胞在48 h和72 h的吸光度以及12 h和24 h的划痕愈合率均降低,差异具有统计学意义(均P<0.001)。敲低RNF187组24 h后的穿膜细胞数(39.50±5.57)个低于NC组的(128.25±17.35)个,差异具有统计学意义(t=9.74,P<0.001)。与NC组相比,敲低RNF187组总LC3和Beclin-1的相对表达量均增加,而磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白的相对表达量降低,差异具有统计学意义(均P<0.05)。与敲低RNF187+DMSO组相比,敲低RNF187+BFA组的自噬流水平、48 h和72 h的吸光度以及24 h的划痕愈合率均增加,差异具有统计学意义(均P<0.001)。敲低RNF187+BFA组24 h的穿膜细胞数(119.00±2.65)个多于RNF187+DMSO组的(57.67±2.52)个,差异具有统计学意义(t=29.09,P<0.001)。结论RNF187在肝癌细胞中高表达,敲低RNF187可通过升高细胞自噬水平来抑制肝癌细胞恶性生物学行为。