rK39免疫层析试条在新疆黑热病诊断和流行病学调查中的应用

目的观察rK39免疫层析试条对新疆不同类型黑热病的诊断及流行病学调查中的应用价值。方法用rK39试条检查不同地区确诊的黑热病患者;用rK39-ELISA和rK39免疫层析试条检查不同流行地区居民血清标本与利什曼素皮内反应结果进行比较分析。结果对来自新疆不同地区的黑热病患者共1204例,用rK39试条检测抗体阳性者1169例,阳性率97.09%。其中人源型黑热病患者1052例中1031例阳性,阳性率98.0%;荒漠型黑热病患者158例中阳性143例,阳性率90.5%。二者之间差异显著(P<0.001),荒漠型患者阳性率较低。人源型黑热病流行区居民中rK39抗体阳性率在既往有黑热病史者中为42.7%～59.3%,在无既往史的居民中仅为2.2%～5.8%。在随访的rK39阳性,皮内反应阴性的18人中有4人在4和6个月后出现症状,确诊为黑热病。在黑热病治愈后2年内94.6%的患者rK39抗体仍为阳性。9年后仍有82.5%保持阳性。结论rK39层析试条对新疆黑热病患者有很高的诊断价值。其保存、携带方便,操作简单适于在基层现场使用。由于其可在潜伏期中发现黑热病患者。故可用于在流行地区皮内反应阴性的居民中进行免疫学检测,早期发现病人。由于黑热病患者治愈后血清中rK39抗体长期存在,故不适用于预后判定和疗效评价。

rK39免疫层析试条诊断人体内脏利什曼病和感染犬

目的评价rk39免疫层析试条对内脏利什曼病诊断和流行病学调查中的应用价值。方法用rk39试条检测就诊者或临床医生考虑为黑热病的患者或进行过病原学检查的患者,并在黑热病疫区现场检测家犬。结果用rk39试条检测具有流行病学史就诊者358人,黑热病抗体阳性244例,阳性检出率68.16%。接受rk39试条与病原学2种方法检查的207人中,均为阳性者131例,2者阳性符合率为100%;对单一显示rk39试条阳性71例,用锑剂治疗均治愈,证实均为黑热病。rk39试条检查疫区家犬443只,检出阳性犬43只,阳性率为9.71%,阳性犬以5岁以下犬龄多见。结论与传统诊断内脏利什曼病方法相比较,rK39试条具有更快速、操作简便、敏感和特异性高以及低损伤性,可用于流行区的内脏利什曼病的诊断和筛选;rK39试条可在潜伏期中发现黑热病患者和无症状感染犬,对黑热病患者的诊断和感染犬的检出具有很高的价值。

检测棘球蚴病患者血清内循环抗原的免疫层析试条的制备和评价

目的以棘球蚴囊液纯化抗原特异性单克隆抗体为基础建立一种快速、简便诊断棘球蚴病的胶体金免疫层析试条方法,并对其进行评价。方法纯化棘球蚴囊液抗原,并以此免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,对所制备的单克隆抗体确定其亚类和效价。筛选基于棘球蚴囊液纯化抗原制备的单克隆抗体对,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记筛选到的单克隆抗体,并将其吸附于交联垫;将另一筛选到的单克隆抗体划线包被于同一硝酸纤维素膜适当位置,制成免疫层析试条。用该试条检测手术确诊的细粒棘球蚴病(87例)、多房棘球蚴病(40例)、囊尾蚴病(25例)、日本血吸虫病(10例)、弓形虫病(5例)、并殖吸虫病(5例)、华支睾吸虫病(5例)患者血清,以及60例健康者血清,以评价其检测的敏感性和特异性。结果以棘球蚴囊液纯化抗原为免疫源制备单克隆抗体,共筛选了11株能高效分泌效价在1∶25600~1∶102400特异抗体的细胞株,抗体亚类为IgG_(1)或IgG_(2)a。筛选到的单克隆抗体F 3B 6作为标记抗体,单克隆抗体C 4H 6作为包被抗体制成免疫层析试条,用该试条检测127份棘球蚴病患者血清的敏感性为88.12%(112/127),其中试条检测囊型包虫病患者血清的敏感性为88.51%(77/87),检测泡型包虫病患者血清的敏感性为87.50%(35/40),试条法检测两型包虫病患者血清敏感性之间差异无统计学意义(χ^(2)=0.03,P=0.86)。与25份囊尾蚴病患者血清、10份日本血吸虫病患者血清、5份弓形虫病患者血清、5份并殖吸虫病患者血清和5份华支睾吸虫病患者血清均无交叉反应,60份健康者血清也均为阴性,总特异性为100.00%。结论成功制备了棘球蚴囊液纯化抗原的单克隆抗体,以此单抗为基础研制出的快速诊断棘球蚴病胶体金免疫层析试条敏感性、特异性均较高。

rk39免疫层析试纸条检测黑热病效果评价

目的评价rk39试纸条(Dipstick)对临床黑热病现症患者的诊断效果,为现场应用提供依据。方法以病原学检查结果或特效药物治疗效果为依据,判断rk39试纸条检测黑热病的敏感性和特异性。结果接受rk39试纸条与病原学2种方法检查的83人中,均为阳性者56例,阴性4人,两者符合率为100%(56/56);单一显示rk39试纸条阳性23例;病原学与rk39试纸条阳性率分别为70.89%(56/79)、100%(79/79)。而未做病原学检查的51人中,rk39试纸条阳性12例。对单一显示rk39试纸条阳性35例,用锑剂治疗有效或治愈,证实都是黑热病。结论采用rk39试纸条诊断黑热病现症患者的阳性检出率达100%。与病原学相比,rk39试纸条法快速、简便、敏感和特异性高,适于在基层推广使用。

基于利什曼原虫K26重组抗原检测黑热病特异抗体的免疫层析试条方法的建立与效果评价

目的建立基于利什曼原虫K26重组抗原(Recombinant K26,rK26)检测内脏利什曼病特异抗体的胶体金免疫层析试条方法,并评价效果。方法用胶体金标记链球菌G蛋白(Streptococcal Protein G,SPG),并将其吸附于交联释放垫上;将利什曼原虫K26重组抗原作为包被抗原包被于硝酸纤维素膜适当位置,制成检测特异抗体的免疫层析试条。用该试条检测病原学确诊的内脏利什曼病、其它寄生虫病以及健康者血清,以评价其检测的敏感性和特异性。同时用rK39(Recombinant K39,rK39)试条进行平行检测。结果rK26试条法和rK39试条法检测内脏利什曼病患者血清的敏感性分别为91.82%(101/110)和93.64%(103/110);与10份疟疾患者血清、10份日本血吸虫病患者血清、10份细粒棘球蚴病患者血清、5份弓形虫病患者血清、5份并殖吸虫病患者血清和5份华支睾吸虫病患者血清均无交叉反应,40份健康者血清也均为阴性,rK26试条法和rK39试条法的总特异性均为100.00%。rK26试条法和rK39试条法阳性检出率之间的差异无统计学意义(χ^(2)=0.25,P=0.62),2种试条法检测黑热病患者血清的结果一致性较好(κ=0.73)。结论建立的基于利什曼原虫K26重组抗原检测内脏利什曼病的胶体金免疫层析试条敏感性、特异性均较高。

疟疾胶体金免疫层析试条在间日疟流行区的诊断评价

目的在现场评价疟疾胶体金免疫层析试条(简称试条)的诊断性能。方法2008年9～10月采集安徽省间日疟流行区蒙城县5个乡镇医院门诊部所有就诊的发热病人血样,用双盲法比较镜检法和试条测试的结果。结果共采集发热病人血样292份,镜检法检出疟原虫阳性181份,均为间日疟;试条检出疟原虫阳性163份,亦均为间日疟。两法检测结果一致的血样占92.8%(271/292),其中均为阳性的163份,均为阴性的108份。两法检测结果不一致的21份血样中,镜检阳性的、试条检测阴性的有18份,镜检阴性的、试条检测阳性的有3份。原虫密度在>1000个/μl、100～1000个/μl和<100个/μl时,试条检测阳性率分别为93.5%(115/123)、86.0%(43/50)和62.5%(5/8)。结论该快速诊断疟疾胶体金免疫层析试条在疟疾流行区对间日疟有一定的诊断价值。

快速诊断疟疾胶体金免疫层析试条方法的建立与评价

目的建立一种能区分恶性疟的快速、简便诊断疟疾的胶体金免疫层析试条方法,并对其进行评价。方法筛选基于恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记筛选到的单克隆抗体F4H12、G4C9和D8F7,并将其吸附于样品垫;将单克隆抗体B2G10(针对恶性疟原虫与间日疟原虫)和D6A7(只针对恶性疟原虫)分别划线包被于同一硝酸纤维素膜适当位置,制成免疫层析检测试条。用该试条检测疫区非疟疾发热病人血样(107份)和内脏利什曼病患者血样(17份)以评价其特异性,检测确诊的疟疾患者血样(间日疟110份,恶性疟54份)以评价其敏感性。均用单盲法检测。结果检测107份疫区非疟疾发热病人血样和17份内脏利什曼病患者血样,有119份显示为阴性,特异性约为96.0%;其中17份内脏利什曼病患者血样全部为阴性。检测164份疟疾患者血样,阳性153份,敏感性为93.3%,其中间日疟检出率为92.7%(102/110),恶性疟检出率为94.4%(51/54)。结论研制出的快速诊断疟疾胶体金免疫层析试条敏感性、特异性均较高。

金标免疫层析试条检测样品中黄曲霉毒素B_1的误差分析

为了扩大金标免疫层析试条(GICA)检测食品和饲料中黄曲霉毒素B1的应用范围,研究了样品基质对试剂条信号强度的影响,探讨了GICA测定饲料和各种发酵类食品样品时,提取液中NaCl、金属离子(Fe3+,Cu2+,Pb2+,As3+)和脂肪含量对检测结果的影响,并研究了消除影响的方法。结果表明,3种阴性样品(大米、玉米和小麦粉)均存在不同程度的非特异性干扰,大米的影响最小,其次为玉米和小麦粉,大米的最佳稀释倍数为10倍,玉米和小麦粉为30倍;随NaCl质量浓度增加,检测结果有偏向假阳性的趋势;4种金属离子对检测结果的影响程度依次为Fe3+>Cu2+>Pb2+>As3+;随着样品中油脂含量的增高,用GICA检测结果偏阳性的程度加剧。对粗提取液用氯仿法萃取后挥干再溶解,可将盐离子和重金属离子对测定的影响控制在允许范围之内;用石油醚脱脂,可使油脂对测定结果的影响降到最低。

快速诊断多房棘球蚴病胶体金免疫层析试条方法的建立与评价

目的建立快速、简便诊断多房棘球蚴病的胶体金免疫层析试条方法。方法提取多房棘球蚴原头节总RNA,通过RT-PCR获得编码Em18基因片段并克隆入pGEX-3X表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达得到重组蛋白;采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记抗人IgG单克隆抗体;将重组Em18抗原包被于硝酸纤维素膜适当位置,制成检测特异抗体的胶体金免疫层析试条。用该试条检测多房棘球蚴病(56份)、细粒棘球蚴病(87份)、囊尾蚴病(30份)、日本血吸虫病(10份)和弓形虫病(10份)患者血清,以及健康人(50份)血清,以评价其检测的敏感性和特异性,同时用ELISA法进行平行检测,以评价该试条的诊断性能。结果以重组蛋白Em18为抗原胶体金免疫层析试条检测多房棘球蚴病患者血清,敏感性为92.9%(52/56)。与细粒棘球蚴病和囊尾蚴病患者血清分别存在9.2%(8/87)和3.3%(1/30)的交叉反应,与健康人血清存在8.0%(4/50)的假阳性率,与日本血吸虫病和弓形虫病患者血清则无交叉反应,特异性为93.0%(174/187)。ELISA法检测的敏感性和特异性分别为94.6%(54/56)和92%(172/187),与试条法比较两者差异均无统计学意义(P>0.05)。kappa分析结果显示,试条法与ELISA法检测多房棘球蚴病患者血清的结果高度一致(κ=0.98)。结论以重组Em18抗原建立的快速诊断胶体金免疫层析试条,检测多房棘球蚴病的敏感性和特异性均较高。

光电传感器在金免疫层析试条定量测试中的应用

着重描述了如何设计特殊的光电传感器,以适应金免疫层析试条定量测试的需要。并将人工神经网络技术应用于该检测装置中,提高了定量检测的精度。

检测特异抗体胶体金免疫层析试条诊断内脏利什曼病患者现场评价

目的在现场评价检测内脏利什曼病特异抗体的胶体金免疫层析试条诊断内脏利什曼病患者的效果。方法2013年采集动物源型内脏利什曼病流行区(四川省、甘肃省)和人源型内脏利什曼病流行区(新疆喀什市)疾病预防控制中心门诊就诊的病人血样和骨髓样本,用镜检法、内脏利什曼病试条和rK39试条进行平行测试,以镜检法为金标准,比较两种试条法检测的敏感性和特异性有无差异。结果内脏利什曼病试条和rK39试条检测镜检确诊的97例内脏利什曼病患者的敏感性分别为98.87%(96/97),97.94%(95/97),二者无统计学差异(χ2=0.34,P>0.05)。两种试条检测非内脏利什曼病病例145例,均有2例假阳性反应,特异性为98.62(143/145)。对来自动物源型内脏利什曼病流行区和人源型内脏利什曼病流行区的内脏利什曼病患者分别统计阳性率,结果显示内脏利什曼病试条和rK39试条法检测动物源型和人源型流行区的内脏利什曼病患者血样之间阳性率的差异均无统计学意义(χ2=0.22/0.01,P>0.05)。两种试条法检测动物源型和人源型内脏利什曼病流行区非内脏利什曼病患者血样之间特异性的差异也均无统计学意义(χ2=0.29,P>0.05)。结论快速检测内脏利什曼病的胶体金免疫层析试条适用于检测动物源型内脏利什曼病流行区患者血样中的特异性抗体。

快速诊断疟疾的免疫层析试条的研制

开发成功了一种能快速、灵敏、高特异性检测疟疾的免疫层析试条。选自恶性疟原虫富组蛋白 一级结构中的九肽 ( AHHAHHAAD) ,经人工合成后作为免疫原 ,生产了一些单表位单抗 ;完成了一些单抗的纯化与鉴定 ;制取了金标单抗并对其吸收光谱进行了分析 ;选取了包被单抗和金标单抗间的配对 ;比较了影响检测的各种因子。当用此试条检测 62名已用常规血膜镜检法确证患有疟疾个体的全血 ,准确率达 93.54%。

巨片形吸虫病快速诊断胶体金免疫层析试条的研制与评价

目的建立快速、简便诊断巨片形吸虫病的胶体金免疫层析试条方法。方法提取巨片形吸虫总RNA,通过RT-PCR获得FgCL1-YN基因片段,并克隆入pET28a(+)表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达得到重组蛋白(r FgCL1-YN);将r FgCL1-YN和羊抗鼠IgG抗体分别包被于硝酸纤维素膜的适宜位置作为检测带和质控带,以胶体金标记抗人IgG4抗体的鼠单抗作为检测试剂,制备检测特异性IgG4型抗体的免疫层析试条。用该试条检测巨片形吸虫病患者(30份)、日本血吸虫病患者(15份)以及健康人(32份)血清,评价其诊断价值,同时用ELISA法进行平行检测作为对照。结果试条检测法的敏感性为100%(30/30),特异性为97.9%(46/47),总体符合率为98.7%(76/77)。ELISA法检测的敏感性、特异性和总体符合率分别100%(30/30)、100%(47/47)和100%(77/77)。试条法与ELISA法的敏感性、特异性和总体符合率,经四格表确切概率法检验,P值分别为1、0.5和0.5,全部大于0.05。显示,试条法与ELISA法检测巨片形吸虫病患者血清的结果高度一致。另外,试条法的检测时间为10min,血清用量低于10μL,且具较高的敏感度。结论以r FgCL1-YN建立的快速诊断胶体金免疫层析试条,检测巨片形吸虫病具有较高的诊断价值。

快速检测甲胎蛋白的免疫层析试条的研制

研制了可简便、快速检出原发性肝癌标志物——人血清中甲胎蛋白 ( AFP)的免疫层析试条。为此 ,研究了用国产试剂和材料制备胶体金、用此胶体金标记抗 AFP单抗的影响因素以及抗 AFP抗体固化条件、抗 AFP抗体与其 AFP结合能力等。结果表明 ,自制国产胶体金质量不亚于进口商品 ;金标单抗和固化抗体活性稳定 ,能分别显示出结合 AFP分子不同表位的特异性。所得检测试条的检出速度在 5至 2 0 min内 ,检测阳性阈值定为 2 0 ng AFP/m L血清。

二维Otsu和改进区域生长法的荧光免疫层析试条浓度的定量检测

目前荧光免疫层析试条的定量检测方法绝大多数采用光电反射法,该方法需要对试条进行高精度的定位并且需要复杂的传动装置。利用CMOS图像传感器获取荧光免疫层析试条的图像信息,采用图像分割方法用于荧光免疫层析试条检测线和质控线进行自动识别,首先对采集到的原始图像进行增强预处理,并进行初步分割。然后选定处理后图像的种子点并通过改进的二维Otsu法选取生长阈值对图像进行区域生长,以实现对图像检测线和质控线的分割。结果表明该方法能够在目标和背景对比度很低的情况下,将图像检测线和质控线的轮廓清晰的分割出来,且区域一致性测度和对比度都比较理想。该方法检测不同浓度的试条,得到的特征值重复性小于5%,线性度大于0.99,准确度大于0.98。实验证明用该方法对荧光免疫层析试条进行定量检测是可行的,且较对比仪器具有更宽的检测范围。

夹心法免疫层析试条的数学模型与仿真研究

基于夹心法免疫层析试条检测原理,结合对流扩散方程和流体动力学方程,建立了夹心法免疫层析试条动态反应过程的数学模型,并通过COMSOL软件对试条动态反应过程进行仿真。分别探究了目标待测物A浓度在0~20 mol/L,标记物P浓度在1×10!2~1×103mol/L以及硝酸纤维素膜的孔隙率在0~1范围内变化时,检测线上夹心复合物浓度关于位置和时间的浓度变化情况,并分析了各物质初始浓度以及试条结构对于检测结果和检测时间的影响。结果表明,在一定浓度范围内,目标待测物A以及标记物P浓度的增加将提高试条的定量检测性能,而孔隙率通过影响混合液流速和混合液中各物质反应接触情况来影响检测结果。

纳米金免疫层析试条定量检测的研究

纳米金免疫层析测定法由于符合现代医学倡导的"床边检验"的发展潮流,具有特异性强,操作方法简单、效率高、可以单人份检测及无污染等特点而成为最常用的一种侧流免疫层析快速检测方法。本研究阐述了定量检测的意义,然后分别从纳米金免疫层析试条定量性能的改进、试条信息的采集检测系统与试条信息的处理三个方面来综述纳米金免疫层析定量检测的研究进展,最后对其未来的研究方向进行展望。

免疫层析试条量化检测系统研究

介绍了一种用于免疫层析试条量化检测的光学检测系统。该系统基于光反射原理,包括光电检测单元、信号采集与处理单元、微处理器及数据存储、显示输出、计算机通讯和按键输入等部分。它采用光纤作为光传输媒介,同时获取检测线和质控线的光学信号,分析其吸收率,获得样品溶液中待测物的浓度。系统具有体积小、成本低、适于多种免疫层析试条定量检测等优点,在临床检测上有着广阔的应用前景。

量子点免疫层析试条定量检测系统的设计

一种量子点免疫层析试条定量检测系统,由量子点免疫层析试条、试条架、扫描系统、电荷耦合器(CCD)、信号放大器、模/数转换器(A/D)、微处理器(MCU)、输出显示装置、打印机、键盘和一张与试条配套的IC卡构成。微处理器读取IC卡参数后控制试条架运动以适合扫描系统的光纤探头对试条进行自动扫描,采集的特征波长反射荧光经CCD、信号放大器、模/数转换器传输给微处理器进行光信号识别和浓度计算,输出显示装置显示结果。该系统能快速准确实现样品多元指标定量检测,具有检测快速、灵敏度高、结果客观、使用灵活等特点,在生物医学样品检测方面具有广泛应用前景。