rno-miR-16-5p靶基因预测、生物信息学分析及鉴定

目的对rno-miR-16-5p靶基因进行预测、生物信息学分析及鉴定,为深入研究rno-miR-16-5p的生物学功能奠定基础。方法应用TargetScan、miRDB、miRanda数据库预测出rno-miR-16-5p的靶基因,对靶基因进行基因本体论(GO)注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)生物通路富集分析,并利用双荧光素酶报告实验鉴定。结果3个数据库预测出的交集靶基因有48个,rno-miR-16-5p靶基因主要富集于细胞生长发育、促进突触合成及神经系统发育等生物过程,富集于血小板α颗粒、细胞质动力蛋白复合体等细胞组件与粘多糖分子功能中。信号通路则显著富集于唾液分泌通路、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路、环磷酸腺苷(cAMP)信号通路与胰腺分泌通路。双荧光素酶报告实验结果提示脑源性神经营养因子(BDNF)是rno-miR-16-5p的靶基因。结论rno-miR-16-5p靶向作用于BDNF的表达,可能通过参与cAMP信号通路促进神经系统发育的生物学过程。

miR-4645-5p通过靶向MUC16调控食管癌细胞的恶性生物学行为

目的 探讨微小RNA(miR)-4645-5p靶向黏蛋白16(MUC16)对食管癌细胞增殖、侵袭、上皮间充质转化的影响及其分子机制。方法 通过TCGA数据库在线分析miR-4645-5p在食管癌组织中的表达。利用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)分析食管癌细胞系中miR-4645-5p的表达水平。通过脂质体转染技术将miR-4645-5p模拟物和阴性对照模拟物转染KYSE-30细胞,作为miR-4645-5p组和对照模拟物组。分别采用CCK-8法、划痕实验、Transwell实验分析转染KYSE-30细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力。通过生物信息学网站预测miR-4645-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因实验检测miR-4645-5p对靶基因的结合。采用qPCR检测MUC16 mRNA的表达水平,Western blotting检测MUC16、转录因子-1(ZEB-1)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、紧密连接蛋白-1(Claudin-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达水平。结果 食管癌组织中miR-4645-5p表达水平低于癌旁组织(P<0.01)。与HET-1A比较,食管癌细胞系中miR-4645-5p呈低表达(P<0.05)。miR-4645-5p过表达后,KYSE-30细胞增殖能力降低(P<0.05),迁移能力降低(P<0.01),侵袭能力明显降低(P<0.01)。miR-4645-5p靶向负调控MUC16 mRNA的表达(P<0.01)。miR-4645-5p过表达后,MUC16、ZEB-1、α-SMA蛋白表达均下调,ZO-1、Claudin-1蛋白表达均上调。结论 miR-4645-5p通过靶向MUC16调控食管癌KYSE-30细胞的恶性生物学行为。

安罗替尼通过调控miR-16-5p/PD-1轴抑制人非小细胞肺癌细胞系增殖并促进凋亡

目的 探讨安罗替尼对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法 将非小细胞肺癌细胞系A549和H1299分别采用安罗替尼、miR-16-5p激动剂和/或PD-1过表达载体进行处理。CCK-8实验和EDU实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-16-5p相对表达量;Western blot检测程序性细胞死亡-1蛋白(PD-1)的表达。双荧光素酶报告实验确定miR-16-5p和PD-1的靶向关系。用A549细胞构建裸鼠成瘤模型,检测安罗替尼对体内肿瘤生长的影响。结果 安罗替尼在A549和H1299细胞中以剂量依赖的方式显著增加miR-16-5p表达,同时降低PD-1表达,并且抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p过表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p能靶向PD-1,且负调控PD-1表达。siRNA下调PD-1表达后明显抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡(P<0.05)。过表达PD-1则可逆转安罗替尼介导的miR-16-5p对A549和H1299细胞的促增殖和抗凋亡作用(P<0.05)。体内实验证实,安罗替尼能够明显抑制肿瘤生长(P<0.05)。结论 安罗替尼可有效抑制非小细胞肺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,减少体内肿瘤生长,其作用机制与miR-16-5p/PD-1信号轴相关。

NKX2-1-AS1介导miR-96-5p/PRDM16轴对未分化甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)NK2同源异形盒1-反义RNA 1(NKX2-1-AS1)介导微RNA(miR)-96-5p/含有PR结构域的蛋白16(PRDM16)轴对未分化甲状腺癌(ATC)细胞体外增殖、迁移和侵袭以及体内移植瘤生长的影响。方法基于生物信息学筛选ATC组织及细胞中差异表达的lncRNA NKX2-1-AS1,并进一步筛选其靶基因miR-96-5p和下游靶基因PRDM16。双荧光素酶报告基因实验验证NKX2-1-AS1与miR-96-5p以及miR-96-5p与PRDM16之间的关系。Western blotting检测过表达miR-96-5p对NKX2-1-AS1过表达的CAL-62细胞PRDM16表达的影响。平板克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验分别检测敲减PRDM16对过表达NKX2-1-AS1的CAL-62细胞增殖、迁移和侵袭的影响。裸鼠皮下注射CAL-62细胞,观察敲减PRDM16对NKX2-1-AS1过表达的CAL-62细胞移植瘤生长的影响。结果基于生物信息学筛选出参与调节ATC发展的NKX2-1-AS1/miR-96-5p/PRDM16轴。双荧光素酶报告基因实验验证结果显示NKX2-1-AS1与miR-96-5p、miR-96-5p与PRDM16结合。过表达NKX2-1-AS1上调CAL-62细胞中PRDM16蛋白表达;而过表达miR-96-5p可逆转此上调作用。过表达NKX2-1-AS1抑制CAL-62细胞体外增殖、迁移和侵袭以及体内移植瘤生长;而敲减PRDM16可逆转此抑制作用。结论NKX2-1-AS1可能作为竞争性内源性RNA与miR-96-5p竞争结合下游靶基因PRDM16,上调PRDM16表达,从而抑制ATC细胞体外增殖、迁移和侵袭以及体内移植瘤生长。

感染性休克患者血清miR-16-5p和miR-155-5p表达水平及其与预后的关系

目的本研究旨在评估感染性休克患者血清miR-16-5p和miR-155-5p表达水平及其与预后的关系。方法选取2021年6月至2023年7月长安医院急诊科收治的86例确诊为感染性休克的患者(男47例,女39例,<60岁45例,≥60岁41例),根据病情程度分为轻度组30例、中度组29例、重度组27例。对患者进行为期1个月的生存状况统计,基于生存情况将患者划分为死亡组20例和生存组66例。对比各组患者的临床资料,分析miR-16-5p和miR-155-5p表达水平与急性生理学和慢性健康状况评价(APACHEⅡ)评分的相关性,构建受试者操作特征曲线(ROC)分析血清miR-16-5p和miR-155-5p预测感染性休克患者预后的价值,logistic回归分析感染性休克患者预后不良的危险因素。采用独立样本t检验、F检验、χ^(2)检验、Pearson相关性分析。结果重度组的心率(HR)、C反应蛋白(CRP)、APACHEⅡ评分、miR-16-5p和miR-155-5p表达水平均高于轻度组和中度组(均P<0.05),平均动脉压(MAP)、中心静脉压(CVP)、氧合指数(OI)均低于轻度组和中度组(均P<0.05)。死亡组的CRP、APACHEⅡ评分、miR-16-5p和miR-155-5p表达水平均高于生存组(均P<0.05),OI低于生存组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示miR-16-5p和miR-155-5p表达水平与APACHEⅡ评分均呈正相关(r=0.509、0.722,均P<0.001)。血清miR-16-5p联合miR-155-5p预测感染性休克患者预后不良的曲线下面积(AUC)为0.944,95%置信区间(CI)为0.894~0.994,灵敏度为90.0%,特异度为84.8%,显示出较高的预测效能。miR-16-5p和miR-155-5p均为感染性休克患者预后不良的危险因素[OR=10.608(2.275~49.461)、25.410(4.573~141.176),均P<0.05]。结论在感染性休克患者中,血清miR-16-5p和miR-155-5p表达水平与病情严重程度和预后显著相关,这两种miRNA可作为感染性休克患者预后不良的生物标志物。

lncRNA SNHG16通过miR-182-5p/PPARG轴调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和侵袭

目的:确定小核仁RNA宿主基因16(SNHG16)在类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)中的表达及其在RA发展中的作用。方法:RT-qPCR用于测量SNHG16、miR-182-5p和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARG) mRNA表达;双荧光素酶实验用于检测SNHG16、miR-182-5p和PPARG mRNA的相互作用关系;EdU和Transwell用于检测细胞增殖、侵袭;Western blot用于检测PPARG蛋白水平。结果:RA滑膜组织和人RA-FLS系(HFLS-RA)中SNHG16和PPARG mRNA表达上调,miR-182-5p表达下调。SNHG16负靶向调节miR-182-5p表达,正调节PPARG(miR-182-5p靶标)表达。沉默SNHG16抑制HFLS-RA增殖、侵袭;下调miR-182-5p部分逆转SNHG16沉默对细胞增殖、侵袭的抑制作用;过表达PPARG部分逆转miR-182-5p上调对HFLS-RA增殖、侵袭的抑制作用。结论:沉默SNHG16靶向miR-182-5p/PPARG轴抑制HFLS-RA的增殖、侵袭。

MicroRNA-16-5p和血管内皮生长因子与糖尿病微血管病变的相关性研究

目的探讨血清MicroRNA-16-5p(miR-16-5p)和血管内皮生长因子(VEGF)与糖尿病微血管病变(DMVC)的相关性.方法选取2021年6月至2023年6月收治的2型糖尿病(T2DM)患者作为研究对象,根据是否合并微血管病变分为单纯糖尿病(DM)的DM组(n=20)和发生微血管病变的DMVC组(n=51).同时选取同期健康体检者作为阴性对照(NC)组(n=20).统计临床资料,比较各组生化指标,qRT-PCR检测各组血清miR-16-5p的表达以及ELISA试剂盒检测各组血清VEGF的表达.分析糖尿病患者发生微血管病变的危险因素.结果DM组和DMVC组的DBP、FBG、LDL-C和HbA1c水平高于NC组(P<0.05),DMVC组的BMI、SBP和TG水平高于NC组(P<0.05).DMVC组血清miR-16-5p水平低于NC和DM组,血清VEGF水平高于NC和DM组,差异有统计学意义(P<0.05).Pearson相关分析显示血清miR-16-5p表达与VEGF呈负相关(P<0.05).logistic回归分析显示VEGF和miR-16-5p表达是糖尿病患者发生微血管病变的影响因素,ROC曲线分析显示血清miR-16-5p、VEGF及两者联合预测糖尿病患者发生微血管病变的曲线下面积(AUC)分别为0.841、0.702和0.837.结论血清miR-16-5p表达降低与糖尿病的发生发展有关,是发生微血管病变的危险因素,miR-16-5p和VEGF可作为预测糖尿病患者发生微血管病变的潜在生物学标志物.

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-16-5p/CREB1轴减轻缺氧/复氧诱导大鼠H9c2心肌细胞凋亡的机制研究

目的:探究长链非编码RNA(LncRNA)FGD5反义RNA1(FGD5-AS1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的影响以及对微小RNA-16-5p/cAMP响应元件结合蛋白1(miR-16-5p/CREB1)轴的调节机制。方法:将H9c2细胞分为对照组和H/R组(缺氧6 h,复氧6 h),然后将H/R组细胞分别进行转染,分为oe-NC组、oe-FGD5-AS1组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic-NC组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic组。实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测细胞中FGD5-AS1、miR-16-5p、CREB1的mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法测定裂解凋亡蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;CCK-8法测定细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶活性实验分别验证miR-16-5p和FGD5-AS1、CREB1的靶向关系。结果:与对照组比较,H/R组细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),miR-16-5p mRNA水平、细胞凋亡率及cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与H/R组和oe-NC组比较,转染过表达FGD5-AS1基因的H9c2细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达增高,凋亡率及miR-16-5p、cleaved Caspase-3、Bax水平下降(P<0.05)。双荧光素酶活性实验验证了FGD5-AS1、CREB1均与miR-16-5p有结合位点。结论:过表达FGD5-AS1可能通过靶向下调miR-16-5p表达,上调CREB1表达,抑制H/R诱导的H9c2心肌细胞凋亡。

circTLK1靶向miR-16-5p对MPP+诱导的帕金森病模型细胞损伤的影响

目的探讨circTLK1对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病(PD)模型细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法采用MPP+诱导人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH建立PD模型记为PD组;用脂质体法分别将si-阴性对照(NC)、si-环状RNA(circTLK)1、miR-NC、miR-16-5p mimics、si-circTLK1+anti-miR-NC、si-circTLK1+anti-miR-16-5p转染至SK-N-SH细胞,转染成功后建立PD模型记为PD+si-NC组、PD+si-circTLK1组、PD+miR-NC组、PD+miR-16-5p组、PD+si-circTLK1组+anti-miR-NC组、PD+si-circTLK1+anti-miR-16-5p组。qRT-聚合酶链反应(PCR)法检测circTLK1、miR-16-5p的表达量;利用试剂盒检测丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的水平;流式细胞术测定细胞凋亡;双荧光素酶报告实验验证circTLK1与miR-16-5p的靶向关系;Western印迹测定蛋白切割型(cleaved)-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)3、cleaved-caspase9表达。结果与Con组比较,PD组circTLK1的表达量和MDA的水平增加,凋亡率和蛋白cleaved-caspase3、cleaved-caspase9水平增加,miR-16-5p的表达量和GSH的水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与PD+si-NC组比较,PD+si-circTLKL组MDA水平、凋亡率和蛋白cleaved-caspase3、cleaved-caspase9水平降低,GSH水平增高,差异均有统计学意义(P<0.05);circTLK1可靶向调节miR-16-5p的表达。与PD+si-circTLK1组+anti-miR-NC组比较,PD+si-circTLK1+anti-miR-16-5p组MDA水平、凋亡率和蛋白cleaved-caspase3、cleaved-caspase9水平增加,GSH水平和miR-16-5p表达量降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论干扰circTLK1表达可减轻MPP+诱导的神经细胞氧化应激及凋亡从而改善PD模型细胞损伤,其机制与靶向上调miR-16-5p表达相关。

结直肠癌组织microRNA-16-5p、microRNA-493-5p表达与PI3K/Akt/mTOR信号通路和预后的关系研究

目的 探讨结直肠癌组织微小RNA-16-5p(miR-16-5p)、microRNA-493-5p(miR-493-5p)表达与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路和预后的关系。方法 选取2016年1月至2019年1月该院收治的126例接受根治性切除手术的结直肠癌患者,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测癌组织及癌旁组织中miR-16-5p、miR-493-5p及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关基因mRNA的表达水平并进行比较,分析癌组织中miR-16-5p、miR-493-5p与PI3K/Akt/mTOR信号通路相关基因mRNA及临床病理特征的关系。术后随访3年,采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-16-5p、miR-493-5p高表达和低表达患者的预后情况。结果 总RNA A260/A280为1.90,琼脂糖凝胶电泳提示28S与18S rRNA带亮度比值均>1.5,总RNA浓度750 ng/μL,说明RNA纯度高、完整性较好。癌组织中miR-16-5p、miR-493-5p表达水平均低于癌旁组织,PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平均高于癌旁组织(P<0.05)。癌组织中miR-16-5p、miR-493-5p与PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平均呈负相关(P<0.05)。临床分期为Ⅲ期患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达者占比高于Ⅰ期和Ⅱ期(P<0.05);低分化患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达患者占比高于中分化和高分化,且中分化患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达患者占比高于高分化(P<0.05);有淋巴结转移患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达患者占比高于无淋巴结转移(P<0.05);T4分期患者中miR-16-5p、miR-493-5p低表达患者占比高于T1和T2分期(P<0.05),T3分期患者中miR-493-5p低表达患者占比高于T1分期(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,miR-16-5p高表达和低表达患者3年累积生存率为93.22%、68.33%,生存率比较差异有统计学意义(P=0.017)。miR-493-5p高表达和低表达患者3年累积生存率为94.74%、67.74%,生存率比较差异有统计学意义(P=0.012)。结论 miR-16-5p、miR-493-5p在结直肠癌组织中表达下调,且与PI3K/Akt/mTOR信号通路呈负相关,miR-16-5p、miR-493-5p高表达患者的预后更好。

重楼皂苷Ⅱ干预后肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力变化及其与miR-16-5p表达的关系

目的探讨重楼皂苷Ⅱ对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用及其可能的机制。方法取对数生长期的肺癌A549细胞,分为高浓度组、中浓度组、低浓度组和对照组,分别加入3、2、1μmol/L重楼皂苷Ⅱ及等量二甲基亚砜溶液,干预24 h。采用CCK-8法检测细胞增殖能力(以细胞增殖活力表示),细胞划痕实验检测细胞迁移能力(以细胞迁移率表示),Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力(以侵袭细胞数表示),Western blotting法检测凋亡相关蛋白[Cleave-Caspase-3、Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶2(MMP-2)]表达,实时荧光定量PCR法检测miR-16-5p表达。取对数生长期的A549细胞,分为miR-16-5p inhibitor组和miR-16-5p NC组和阴性对照组,miR-16-5p inhibitor组和miR-16-5p NC组分别转染含有绿色荧光标记的miR-16-5p inhibitor和miR-16-5p inhibitor NC,并加入2μmol/L重楼皂苷Ⅱ溶液,阴性对照组未进行细胞转染并加入等量二甲基亚砜溶液,干预24 h,参照上法检测miR-16-5p、凋亡相关蛋白表达及细胞生物学行为。结果高、中、低浓度组和对照组细胞增殖活力、细胞迁移率及侵袭细胞数均依次升高,组间两两比较P均<0.05。与对照组比较,高、中、低浓度组Cleave-Caspase-3、Bax、miR-16-5p表达均升高,Bcl-2、MMP-2蛋白表达均降低,以高浓度组变化最明显(P均<0.05)。miR-16-5p inhibitor组、miR-16-5p NC组和阴性对照组miR-16-5p相对表达量分别为0.07±0.05、1.57±0.07、1.00±0.03,miR-16-5p inhibitor组低于miR-16-5p NC组、阴性对照组(P均<0.05)。miR-16-5p NC组细胞增殖活力、细胞迁移率、侵袭细胞数及Bcl-2、MMP-2蛋白表达均低于miR-16-5p inhibitor组和阴性对照组,Cleave-Caspase-3、Bax蛋白表达均高于miR-16-5p inhibitor组和阴性对照组(P均<0.05),miR-16-5p inhibitor组和阴性对照组上述指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论重楼皂苷Ⅱ可抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与升高miR-16-5p表达有关。

新生儿脓毒血症血清miR-16-5p、miR-96-5p水平与疾病严重程度和机体炎性反应的相关性研究

目的探讨血清微小RNA-16-5p(miR-16-5p)和微小RNA-96-5p(miR-96-5p)水平与新生儿脓毒血症(NS)疾病严重程度和机体炎性反应的相关性。方法选择2020年3月—2022年3月海南现代妇女儿童医院收治的52例NS患儿作为脓毒血症组,同时选择同期住院的52例非脓毒血症患儿作为对照组。定量检测两组血清miR-16-5p、miR-96-5p、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)和白介素6(IL-6)含量,收集两组基线资料与入院24 h内临床检查结果。采用双变量Pearson相关性检验分析血清miR-16-5p、miR-96-5p水平与疾病严重程度和炎性反应指标的相关性。结果脓毒血症组格拉斯哥昏迷评分(GCS)、急性生理学和慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)、序贯器官衰竭估计评分(SOFA)、白细胞计数(WBC)、血肌酐、PCT、CRP和IL-6水平显著高于对照组,而血清白蛋白水平显著低于对照组(均P<0.05)。脓毒血症组血清miR-16-5p表达水平显著高于对照组,而miR-96-5p表达水平显著低于对照组(均P<0.05)。miR-16-5p高表达者的GCS评分、APACHEⅡ评分、SOFA评分、WBC、PCT、CRP和IL-6水平均显著高于miR-16-5p低表达者(均P<0.05)。miR-96-5p高表达者的APACHEⅡ评分、SOFA评分、WBC、PCT、CRP和IL-6水平均显著低于miR-96-5p低表达者(均P<0.05)。脓毒血症组血清miR-16-5p水平与GCS评分、APACHEⅡ评分、SOFA评分、WBC、PCT、CRP和IL-6水平呈正相关(均P<0.05),而血清miR-96-5p水平与APACHEⅡ评分、SOFA评分、WBC、PCT、CRP和IL-6水平呈负相关(均P<0.05)。结论NS患儿血清miR-16-5p水平升高,miR-96-5p水平降低,与疾病严重程度和机体炎性反应相关,提示miR-16-5p和miR-96-5p可作为NS早期诊断和病情评估的标志物。

生物信息学分析miR-16-5p在乳腺癌中的作用及临床验证

目的 生物信息学分析miR-16-5p在乳腺癌(BC)中的作用并进行临床验证。方法 BC的队列数据集来自高通量基因表达数据库(GEO)和癌症基因组图谱(TCGA),并通过生物信息学工具进行分析。在临床验证中,前瞻性纳入2018年1月至2022年2月接受手术的BC患者(BC组),获取BC组织和对应的癌旁正常组织。另纳入同期150例体检健康女性作为对照组,获取其血清样本,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测组织及血清miR-16-5p表达。所有BC患者至少随访3年。结果 共鉴定出195个差异表达基因(DEG),根据logFC≥1.5或logFC≤-1.5阈值,miR-16-5p表达显著下调,其受试者工作特征(ROC)曲线和Kaplan-Meier曲线分析显示,miR-16-5p区分BC组织及正常乳腺组织的曲线下面积(AUC)为0.73(95%CI:0.68~0.79),且miR-16-5p低表达的患者预后较差(P=0.013),因此miR-16-5p可作为候选miRNA。在临床验证集中,BC组织miR-16-5p相对表达量明显低于癌旁正常组织[0.46(0.29,0.66)vs. 0.82(0.56,1.08),P<0.001]。且BC患者血清miR-16-5p相对表达量也显著低于对照组[0.34(0.15,0.50)vs. 0.99(0.70,1.20),P<0.001]。ROC曲线显示,当血清miR-16-5p相对表达量≤0.520时可良好地诊断BC患者,AUC值为0.897(95%CI:0.863~0.932)。BC患者血清样本和BC组织样本中miR-16-5p相对表达量呈正相关(rs=0.373,P<0.001)。血清miR-16-5p表达与T分期、N分期、TNM分期有关(P<0.05)。血清miR-16-5p低表达组是影响BC患者患者3年内发生局部复发/远处转移及死亡的独立预测生物标志物(P<0.05)。结论 血清miR-16-5p表达对BC有诊断效能,低血清miR-16-5p表达预示着BC患者更差的疾病进展情况和3年内预后不良。

脓毒症并发急性肾损伤患者外周血单个核细胞中微小RNA-16-5p、干扰素诱导跨膜蛋白3表达及临床意义

目的检测脓毒症及脓毒症并发急性肾损伤(sepsis-associated acute kidney injury,S-AKI)患者外周血单个核细胞中微小RNA-16-5p(microRNA-16-5p,miR-16-5p)、干扰素诱导跨膜蛋白3(interferon-induced transmembrane protein,IFITM3)表达情况,分析两者对S-AKI患者的临床意义。方法本研究以2019年2月至2021年2月武汉市蔡甸区人民医院确诊的脓毒症患者为研究对象,共纳入106例,将合并急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的脓毒症患者作为AKI组(52例),未合并AKI的患者为非AKI组(54例)。收集所有患者的血液样本3 mL并分离单核细胞,利用实时荧光定量技术检测外周血单个核细胞中miR-16-5p、IFITM3 mRNA的表达水平,酶联免疫吸附法测定外周血中白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)水平,全自动生化分析仪检测外周血中胱抑素(cysteine,Cys)和尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平;比较两组间的临床指标及miR-16-5p、IFITM3 mRNA表达水平,Pearson法分析miR-16-5p、IFITM3 mRNA分别与BUN、Cys水平的相关性,以及miR-16-5p与IFITM3 mRNA表达水平的相关性,采用多元线性回归分析S-AKI患者miR-16-5p、IFITM3 mRNA表达水平的影响因素,受试者工作特性曲线(receiver operator characteristic curves,ROC)评估miR-16-5p和IFITM3 mRNA对脓毒症患者发生S-AKI的诊断价值。结果AKI组患者急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluationⅡ,APACHEⅡ)评分(15.67±4.39比13.31±3.56)、序贯器官衰竭评分(sequential organ failure assessment,SOFA)评分(5.62±1.28比4.89±1.41)、IL-1β[(22.03±5.78)mg/L比(10.44±3.05)mg/L]、Cys[(2.72±0.45)mg/L比(1.98±0.31)mg/L]和BUN[(7.93±2.24)μmol/L比(4.49±2.07)μmol/L]水平均高于非AKI组患者(P<0.05),AKI组患者的miR-16-5p(1.64±0.30比1.17±0.28)表达水平显著上调,IFITM3 mRNA(2.87±0.62比4.06±0.92)及蛋白(1.63±0.41比3.15±0.85)(r=0.560,P<0.05)水平呈正相关,IFITM3 mRNA表达水平与IL-1β(r=-0.754,P<0.05)、Cys(r=-0.554,P<0.05)、BUN(r=-0.695,P<0.05)水平呈负相关,miR-16-5p与IFITM3 mRNA的表达水平呈负相关(r=-0.496,P<0.05);多元线性回归分析结果显示,IL-1β升高、Cys升高是miR-16-5p、IFITM3 mRNA表达水平的影响因素(P<0.05);miR-16-5p、IFITM3 mRNA单一检测诊断脓毒症患者发生S-AKI的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.876(95%CI:0.809~0.944)、0.874(95%CI:0.811~0.938),miR-16-5p和IFITM3 mRNA联合检测的AUC为0.956(95%CI:0.929~0.992)。结论S-AKI患者中miR-16-5p表达上调,IFITM3表达下调,与S-AKI的病理过程密切相关,可能通过促进炎症反应加重肾损伤,有助于早期诊断S-AKI,为临床治疗S-AKI提供了有希望的靶点。

LncRNA SNHG16通过调控miR-195-5p/MYB促进胃癌细胞增殖及迁移

目的探讨lncRNA SNHG16(SNHG16)对胃癌细胞增殖、迁移的影响及其分子调控机制。方法基于在线数据库检索SNHG16在胃癌组织中的表达情况并筛选SNHG16的下游靶基因。通过生物信息学方法分析、双荧光素酶报告基因实验验证SNHG16与miR-195-5p间相互作用关系。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SNHG16、miR-195-5p和MYB在胃癌细胞(HGC-27、MKN-28)中的表达情况;敲低SNHG16检测miR-195-5p或MYB表达;过表达miR-195-5p检测MYB表达;蛋白质印迹分析(Western blot)检测各组中MYB的蛋白表达水平。敲低SNHG16或过表达miR-195-5p,通过细胞增殖及划痕实验分别检测胃癌细胞(HGC-27、MKN-28)增殖及迁移能力。结果LncRNA SNHG16在胃癌组织及胃癌细胞(HGC-27、MKN-28、MKN-45、NCI-N87)中表达升高。双荧光素酶报告基因实验结果显示,将psiCHECK2-SNHG16-WT和miR-195-5p mimic同时转染进HGC-27中,显著抑制了HGC-27细胞的荧光素酶活性。qRT-PCR及WB实验结果显示:敲低HGC-27、MKN-28细胞中SNHG16可上调miR-195-5p并抑制MYB在转录及翻译水平的表达;过表达HGC-27、MKN-28细胞中miR-195-5p可抑制MYB表达。CCK8增殖实验及细胞划痕实验结果表明:敲低SNHG16或过表达miR-195-5p均可抑制HGC-27、MKN-28细胞的增殖和迁移。结论LncRNA SNHG16可通过miR-195-5p调节MYB在胃癌细胞中的表达,SNHG16高表达可促进胃癌细胞增殖和迁移。

circDUSP16调节miR-126-5p/SHH轴对结直肠癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探究circDUSP16对结直肠癌(CRC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法:qRT-PCR检测circDUSP16、miR-126-5p、SHH表达水平,CCK-8法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测SHH、PCNA、Bcl-2、Bax、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达,荧光素酶实验检测circDUSP16和miR-126-5p/SHH的靶向关系。结果:沉默circDUSP16组SW480细胞circDUSP16、SHH mRNA表达、OD450值(24 h、48 h、72 h)、Bcl-2和N-cadherin蛋白表达降低,miR-126-5p、凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白水平升高(P<0.05);下调miR-126-5p减弱了沉默circDUSP16对SW480细胞的增殖、EMT发生的抑制,降低了细胞的凋亡能力;circDUSP16靶向负调控miR-126-5p表达,miR-126-5p靶向负调控SHH表达。结论:沉默circDUSP16可能通过上调miR-126-5p并下调SHH抑制SW480细胞增殖和EMT发生,促进凋亡。

大黄素调控miR-16-5p/STAT3对心肌梗死大鼠模型保护作用机制研究

目的探究大黄素通过调控miR-16-5p/信号转导和转录激活因子3(STAT3)对心肌梗死大鼠模型发挥保护作用的机制。方法取Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、大黄素低剂量组、大黄素高剂量组、miR-16-5p agomir组、miR-16-5p agomir阴性对照组、大黄素高剂量+miR-16-5p agomir组,每组12只。模型组和实验处理组大鼠通过冠状动脉左前降支结扎法建立心肌梗死模型,假手术组大鼠仅穿线不结扎,分组处理后,测定7组大鼠心功能指标左心室收缩末期内径(LVDS)、左心室舒张末期内径(LVDD)、左心室射血分数(EF);以TTC染色检测7组大鼠心肌梗死面积;以HE和TUNEL染色分别检测7组大鼠心肌组织病理变化及心肌细胞凋亡率;以酶联免疫吸附(ELISA)法测定7组大鼠血清及心肌组织炎性因子IL-1β、TNF-α水平;以实时荧光PCR检测7组大鼠心肌组织miR-16-5p水平;以免疫印迹法检测7组大鼠心肌组织凋亡蛋白(Bax、Caspase-3)及STAT3表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织呈现严重病理损伤,LVDS、LVDD、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、血清及心肌组织IL-1β、TNF-α水平、心肌组织Bax、Caspase-3蛋白表达、miR-16-5p表达及p-STAT3/STAT3明显升高(P<0.05),EF明显降低(P<0.05)。与模型组比较,大黄素低、高剂量组大鼠心肌组织病理损伤均减轻,LVDS、LVDD、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、血清及心肌组织IL-1β、TNF-α水平、心肌组织Bax、Caspase-3蛋白表达、miR-16-5p表达及p-STAT3/STAT3均降低(P<0.05),EF均升高(P<0.05);大黄素高剂量组大鼠心肌组织病理损伤比大黄素低剂量组进一步减轻,LVDS、LVDD、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、血清及心肌组织IL-1β、TNF-α水平、心肌组织Bax、Caspase-3蛋白表达、miR-16-5p表达及p-STAT3/STAT3进一步降低(P<0.05),EF进一步升高(P<0.05);miR-16-5p agomir组大鼠心肌组织病理损伤加重,LVDS、LVDD、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、血清及心肌组织IL-1β、TNF-α水平、心肌组织Bax、Caspase-3蛋白表达、miR-16-5p表达及p-STAT3/STAT3升高(P<0.05),EF降低(P<0.05);miR-16-5p agomir阴性对照组大鼠各指标无明显变化(P>0.05)。与大黄素高剂量组比较,大黄素高剂量+miR-16-5p agomir组大鼠心肌组织病理损伤加重,LVDS、LVDD、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、血清及心肌组织IL-1β、TNF-α水平、心肌组织Bax、Caspase-3蛋白表达、miR-16-5p表达及p-STAT3/STAT3升高(P<0.05),EF降低(P<0.05)。结论大黄素可通过下调miR-16-5p/STAT3信号而阻止炎症发生进展,从而减轻心肌梗死大鼠心肌损伤及纤维化,保护心功能。

长链非编码RNA LINC00662/微小RNA-16-5p/wee1信号通路对肝细胞癌细胞增殖及凋亡的作用研究

目的探讨长链非编码RNA linc00662(LncRNA linc00662)通过微小RNA-16-5p(miR-16-5p)[/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(wee1)]信号轴在肝细胞癌(HCC)细胞增殖及凋亡中的作用。方法该研究时间为2019年8月至2020年10月,体外培养正常肝细胞株LO2和肝癌细胞株SK-HEP-1、HepG2、Huh-7和Li-7。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中linc00662、miR-16-5p和wee1的表达。以HepG2细胞作为研究对象,设置shRNA阴性对照(sh-NC)组、linc00662-shRNA干扰(sh-linc00662)组、抑制剂阴性对照(inhibitor-NC)组、miR-16-5p抑制剂(miR-16-5p inhibitor)组、siRNA阴性对照(si-NC)组、wee1-siRNA干扰(siwee1)组、linc00662-shRNA干扰联合miR-16-5p抑制剂(sh-linc00662+miR-16-5p inhibitor)组和miR-16-5p抑制剂联合wee1-siRNA干扰(miR-16-5p inhibitor+si-wee1)组。CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞凋亡水平;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白基因(Bax)]表达。双萤光素酶报告基因实验检测linc00662、miR-16-5p和wee1之间的相关性。结果PCR结果显示相比较LO2细胞,linc00662在SK-HEP-1、HepG2、Huh-7和Li-7细胞中普遍高表达[0.95±0.14比2.12±0.17、3.86±0.15、2.31±0.14、1.82±0.18,P<0.001]。与sh-NC组相比,敲低linc00662能抑制肝癌细胞增殖(P<0.001)并诱导细胞凋亡(P<0.001)。双萤光素酶报告结果显示linc00662直接靶向结合miR-16-5p并负调控miR-16-5p的表达。同时,miR-16-5p直接靶向结合wee1并负调控wee1的表达。下调miR-16-5p表达可以减轻敲低linc00662对肝癌细胞生长的抑制作用。此外,linc00662可能通过miR-16-5p/wee1通路发挥促癌作用。结论Linc00662是一种在肝癌细胞中上调的LncRNA,可以通过miR-16-5p/wee1轴促进肝癌细胞增殖并抑制细胞凋亡。

5-Aza-dC和TSA对胃癌细胞系p16和hMLH-1基因甲基化水平及表达的影响

目的:探讨5-Aza-dC及TSA对胃癌细胞系中抑癌基因p16和hMLH-1基因甲基化水平和基因表达的影响.方法:5-Aza-dC及TSA处理体外培养的MKN-45细胞和MGC-803细胞,应用逆转录PCR(RT-PCR)法及甲基化特异性PCR(MSP)法分别检测两株细胞药物干预前后抑癌基因p16和hMLH-1的表达及甲基化情况.结果:MKN-45和MGC-803细胞系经TSA,5-Aza-dC及联合作用后使原来不表达或有弱表达的抑癌基因p16和hMLH-1重新表达或表达增强.胃癌细胞系MKN-45和MGC-803均显示p16、hMLH-1基因启动子区存在高甲基化,其中p16基因在两种胃癌细胞系中均表现为甲基化,hMLH-1基因在胃癌细胞系MGC-803中表现为甲基化而在胃癌细胞系MKN-45中表现为半甲基化.在5-Aza-dC及TSA的作用下,MKN-45和MGC-803细胞系中p16及hMLH-1基因的甲基化状态得到逆转.结论:胃癌细胞系中抑癌基因p16和hMLH-1基因启动子甲基化可能是导致其基因失活的主要原因,5-Aza-dC单独作用和5-Aza-dC及TSA联合应用效果相似,均能显著增强甲基化的肿瘤抑制基因的重新表达.

5-Aza-CdR对人结肠癌Caco-2细胞系P16基因甲基化状态及其生物学表型的影响

目的观察人结肠癌Caco-2细胞系P16基因启动子区甲基化状态,并探讨去甲基化制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导高甲基化失活的P16基因重新表达的可能性及其对细胞生长的影响。方法用不同浓度的5-Aza-CdR处理Caco-2细胞系,MSP法检测用药前后P16基因的甲基化状态,RT-PCR方法检测P16基因mRNA表达。MTT法观察细胞生长速度,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率。结果 P16基因在人结肠癌细胞系Caco-2中启动子区呈甲基化状态,经过5-Aza-CdR处理后,P16基因启动子区呈去甲基化状态,其mRNA重新表达。CpG岛去甲基化后能明显地抑制细胞的生长,诱导细胞凋亡,影响细胞周期分布,并具有良好的量效依赖关系。结论 5-Aza-CdR能够逆转P16基因甲基化状态,调控P16基因表达并有效地抑制肠癌细胞增殖。