miR-204-5p通过靶向负性调控RAB22A促进膀胱癌细胞的恶性生物学行为

目的探讨MiR-204-5p靶向RAB22A对膀胱癌细胞生物学行为的影响及其分子机制。方法TCGA数据库进行了miR-204-5p的生存分析和临床病理性状的相关性分析;检测膀胱癌组织和癌旁组织以及正常尿路上皮细胞和膀胱癌细胞中miR-204-5p的表达水平;过表达/敲低miR-204-5p后检测细胞增殖、迁移和侵袭、和凋亡等变化;转录组测序,数据库分析和多种实验证实miR-204-5p靶向抑制RAB22A基因调控膀胱癌细胞的生物学行为。结果TCGA数据库中MiR-204-5p高表达患者的中位生存期较低,表现出较差的预后(P<0.05);miR-204-5p在膀胱癌组织和细胞表达明显上调(P<0.05);过表达miR-204-5p可促进细胞增殖(P<0.05)、迁移和侵袭(P<0.05),减少细胞凋亡(P<0.05),敲低后则相反;转录组测序,数据库分析和双荧光素酶实验提示RAB22A是miR-204-5p下游关键因子,qRT-PCR,Western blotting证实过表达miR-204-5p可抑制RAB22A的表达(P<0.05);过表达RAB22A可部分逆转miR-204-5p对膀胱癌细胞生长的促进作用(P<0.05)。结论miR-204-5p通过靶向负性调控RAB22A促进膀胱癌细胞的恶性生物学行为。

血清miR-22 miR-98-5p表达与非小细胞肺癌三维适形放疗疗效的关系研究

目的:观察非小细胞肺癌(nonsmalcellungcancer,NSCLC)实施三维适形放疗后不同疗效情况患者机体微小RNA(microRNA,miR)-22、miR-98-5p表达水平差异,并分析其表达水平与疗效间的关联性。方法:纳入2020年1月至2024年1月本院收治的104例NSCLC患者,所有患者接受三维适形放疗,完成放疗后通过实时荧光定量PCR法测定患者机体miR-22、miR-98-5p表达水平,采用单因素方差分析不同疗效患者miR-22、miR-98-5p表达水平差异,采用Logistic多因素回归模型分析影响放疗疗效的相关因素,绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)分析miR-22、miR-98-5p表达水平对放疗有效性的评估效能。结果:不同疗效患者miR-22、miR-98-5p表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05),其中SD组与PD组miR-22表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05),CR组、PR组与SD组、PD组miR-22、miR-98-5p表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05),CR组与PR组miR-22、miR-98-5p表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析发现不同病理类型、TNM分期、分化程度及miR-98-5p、miR-22表达水平与放疗的疗效有关,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归模型分析发现,TNM分期(OR=3.360,95%CI:1.229~9.184)、分化程度(OR=2.779,95%CI:1.066~7.246)及miR-98-5p(OR=2.085,95%CI:1.147~3.792)、miR-22表达水平(OR=0.590,95%CI:0.368~0.946)是评估放疗疗效的影响因素(P<0.05)。ROC曲线表明:miR-98-5p、miR-22评估放疗有效性的曲线下面积(AUC)分别为0.798、0.800,敏感度分别为0.589、0.630,特异度分别为0.871、0.839,而miR-98-5p+miR-22评估放疗有效性的AUC为0.895,明显高于单项指标(P<0.05),敏感度为0.726,特异度为0.935。结论:在NSCLC实施三维适形放疗后不同疗效患者血清miR-98-5p、miR-22表达水平存在一定的差异,与放疗有效性明显相关,并对疗效有一定的评估价值。

乳腺癌患者外周血miR-22-5p表达情况的诊断及预后价值

目的:探讨微小RNA-22-5p(microRNA-22-5P,miR-22-5p)在乳腺癌患者外周血中的表达及其与肿瘤相关性。方法:选取2017年6月—2018年5月于海安市人民医院肿瘤科就诊的成年乳腺癌患者60例及同期健康体检者30名,分别为乳腺癌组及健康对照组。应用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测两组研究对象外周血miR-22-5p水平;绘制ROC曲线评估miR-22-5p对乳腺癌的诊断效能;采用Kaplan-Meier生存曲线分析外周血miR-22-5p水平对乳腺癌的预后价值。结果:qRT-PCR结果显示,乳腺癌组患者外周血miR-22-5p相对表达量显著低于健康对照组(P<0.05);乳腺癌不同分子分型、TNM分期、淋巴结转移、远处转移、脉管受侵、组织学分级之间miR-22-5p水平比较差异有统计学意义(P<0.05);外周血miR-22-5p诊断乳腺癌的AUC为0.882,CA153诊断乳腺癌的AUC为0.667,联合检测的AUC为0.901;Kaplan-Meier生存分析显示,miR-22-5p低水平组患者5年总生存期明显高于miR-22-5p高水平组(P<0.05)。结论:MiR-22-5p在乳腺癌的诊断及预后评估方面有一定的临床价值。

大鼠血浆外泌体源性mir-22-5p在短暂性脑缺血中的表达变化及其作为诊断标志物的研究

目的短暂性脑缺血发作(transient ischemic attack, TIA)是临床中常见的一种缺血性脑血管病。本研究主要将探讨血浆外泌体源性rno-miR-22-5p在大鼠短暂性脑缺血发作中潜在的诊断价值。方法设置假手术组及大制造大脑中动脉栓塞模型,建立缺血5 min、10 min、2 h组。并通过HE染色法对缺血后脑组织受损的程度进行评估。按照试剂盒说明书步骤,提取大鼠血浆外泌体以及外泌体源性RNA,并通过透射电子显微镜进行鉴定。使用q RT-PCR方法验证miR-22-5p的表达量。采用单因素方差分析进行统计学分析,并通过ROC曲线评估miR-22-5p作为诊断大鼠短暂性脑缺血发作标志物的价值。结果与假手术组对比,脑缺血5 min和10 min组的血浆外泌体源性rno-miR-22-5p的表达显著升高(P<0.05)。而且与脑缺血5 min和10 min组对比,脑缺血2 h组的大鼠血浆外泌体源性rno-miR-22-5p表达显著下调(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示:与假手术组相比,rno-miR-22-5p在脑缺血5 min的大鼠展现出了极高的诊断价值,其ROC曲线下面积分别为0.880。结论血浆外泌体源性miRNA-22-5p有可能成为诊断大鼠短暂性脑缺血发作的一种诊断生物标志物。

LncRNA MIR22HG通过海绵吸附miR-22-5p对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、凋亡和炎性反应的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)MIR22HG对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLSs)增殖、凋亡和炎性反应的影响及其分子机制。方法收集在本院接受治疗的37例RA患者及30例关节创伤患者的滑膜组织样本,采用qRT-PCR检测滑膜组织中MIR22HG和miR-22-5p表达水平。体外分离、培养和鉴定人RA-FLSs,将MIR22HG siRNA干扰质粒(si-MIR22HG)及其阴性对照质粒(si-NC)和miR-22-5p inhibitor及其阴性对照(inhibitor-NC)分别或同时转染至RA-FLSs中,qRT-PCR检测细胞中MIR22HG和miR-22-5p表达水平;CCK-8检测各组细胞增殖活性;Annexin Ⅴ-FITC/PI检测各组细胞凋亡率;ELISA检测各组细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6水平;Western blot检测各组细胞中Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证MIR22HG与miR-22-5p之间的靶向关系。结果与关节创伤患者比较,RA患者滑膜组织中MIR22HG表达水平升高(P<0.05),而miR-22-5p表达水平降低(P<0.05)。干扰MIR22HG可抑制RA-FLSs增殖活性,降低细胞上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6水平及细胞中Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05),提高细胞凋亡率、miR-22-5p及Bax、Cleaved casepase-3等蛋白表达水平(P<0.05)。然而,抑制miR-22-5p表达可逆转MIR22HG基因沉默对RA-FLSs增殖、凋亡和炎症的影响(P<0.05)。双荧光素酶报告实验显示,miR-22-5p是MIR22HG潜在的下游靶miRNA。结论MIR22HG在RA患者关节滑膜组织中高表达,其可能通过靶向下调miR-22-5p表达促进RA-FLSs增殖及炎性反应,并抑制细胞凋亡。

miR-192-5p和miR-22-3p在痛风性关节炎患者中的表达水平及调节机制

目的:分析痛风性关节炎患者血清miR-192-5p和miR-22-3p的表达水平及调节机制。方法:将秦皇岛市第一医院2020年1月2021年12月收治65例痛风性关节炎患者和65例健康体检人员分别分为观察组和对照组,采用实时荧光定量PCR法检测患者血清miR-192-5p和miR-22-3p的表达水平及相对表达量,采用红细胞沉降压积仪检测红细胞沉降率(ESR),用全自动生化分析仪检测血尿酸(BUA)。结果:与对照组比较,观察组患者血清miR-192-5p和miR-22-3p相对表达量升高(均P<0.05),ESR和BUA升高(均P<0.05),血清TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-10表达水平升高(均P<0.05),Th1细胞表达水平和Th1/Th2比值升高(均P<0.05),Th2细胞表达水平降低(P<0.05)。ROC曲线分析发现,血清miR-192-5p和miR-22-3p在痛风性关节炎中具有良好的诊断效能。结论:痛风性关节炎患者血清miR-192-5p和miR-22-3p异常升高,其可能机制与炎症反应和免疫反应相关。

miR-138-5p靶向调控RAB22A表达抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-138-5p对胶质瘤细胞增殖、迁移与侵袭的影响以及其作用机制。方法:U251细胞分为miR-NC组(对照组)、miR-mimics组、miR-inhibitor组以及miR-mimics+RAB22A-pcDNA3.1组。qRT-PCR检测miR-138-5p在胶质瘤细胞中的表达量;CCK8实验检测U251细胞的增殖能力;Transwell实验检测U251细胞的迁移和侵袭能力;Targetscan数据库预测miR-138-5p的下游靶基因;运用双荧光素酶报告基因实验验证细胞周期蛋白RAB22A是miR-138-5p的靶基因;RNA结合蛋白免疫沉淀实验进一步验证miR-138-5p与RAB22A之间的相互作用;运用蛋白免疫印迹实验检测组织和细胞中RAB22A的蛋白表达水平。结果:与正常人星形胶质细胞相比较,miR-138-5p在胶质瘤细胞中表达量降低(P<0.05);CCK8和Transwell实验结果表明,在U251细胞中,过表达miR-138-5p能显著抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05);运用Targetscan数据库预测miR-138-5p下游靶基因为RAB22A,miR-138-5p作用于RAB22A的3'UTR区域,双荧光素酶报告基因实验与蛋白免疫沉淀实验结果证实miR-138-5p与RAB22A之间的相互作用;RAB22A在胶质瘤细胞中明显高表达(P<0.05),在U251细胞中过表达miR-138-5p明显抑制RAB22A的表达(P<0.05)。结论:miR-138-5p在胶质瘤细胞中表达降低,miR-138-5p通过下调RAB22A表达而抑制细胞增殖、迁移和侵袭。

针刺对CIRI大鼠缺血侧海马区miRNA表达及miR-20a-5p和miR-22-5p的影响

目的观察针刺对脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)大鼠缺血侧海马区miRNA表达及miR-20a-5p和miR-22-5p的影响,以探究针刺修复CIRI的可能机制。方法60只大鼠采用随机数字表法分成正常组、假手术组(Sham组)、CIRI组及CIRI+针刺组,每组15只。CIRI组及CIRI+针刺组参照优化版Zea Longa线栓法复制大脑中动脉缺血再灌注模型;Sham组只插入线栓不阻断中动脉。Sham组及CIRI组造模后不予针刺,CIRI+针刺组造模后于人中、百会、大椎穴予针刺干预,正常组不予任何处理。分别于治疗前后行神经功能症状缺损评分观察大鼠神经症状变化;治疗后,采用TTC染色检测脑梗死面积比;基因芯片技术检测CIRI大鼠缺血侧海马区miRNA表达;qPCR检测CIRI大鼠缺血侧miR-20a-5p、miR-22-5p的表达量。结果(1)与治疗前比较,治疗后CIRI+针刺组的神经功能症状缺损评分显著下降(P<0.01),其余各组差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后,与正常组及Sham组比较,CIRI组及CIRI+针刺组神经功能症状缺损评分及脑梗死面积比均显著升高(P<0.01);与CIRI组比较,CIRI+针刺组神经功能症状缺损评分及脑梗死面积比明显下降(P<0.05)。(2)基因芯片检测结果示,与正常组比较,CIRI组差异表达4个miRNA,且其中2个参与调控细胞增殖、3个参与调控细胞凋亡;与Sham组比较,CIRI组差异表达5个miRNA,且其中3个参与调控细胞增殖、1个参与调控细胞凋亡;与CIRI组比较,CIRI+针刺组差异表达16个miRNA,且其中12个参与调控细胞增殖、10个参与调控细胞凋亡。CIRI+针刺组与CIRI组改变了相同功用的miRNA,其中包括miR-20a-5p和miR-22-5p。(3)qPCR结果示,与正常组比较,CIRI组miR-20a-5p表达增加(P<0.01)、miR-22-5p表达降低(P<0.01);与Sham组比较,CIRI组miR-20a-5p表达增加(P<0.01)、miR-22-5p表达降低(P<0.05);与CIRI组比较,CIRI+针刺组miR-20a-5p表达降低(P<0.01)、miR-22-5p表达增加(P<0.05)。结论针刺能明显改善CIRI大鼠神经功能症状缺损评分及脑梗死面积比,促进脑缺血再灌注后修复,其机制可能与激发多种类、多功能miRNA的改变,特别是与下调miR-20a-5p、上调miR-22-5p的表达量,促进细胞增殖、抑制细胞凋亡功能相关。

miR-491-5p靶向CCL22对舌鳞状细胞癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究miR-491-5p对舌鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法RT-qPCR检测人正常口腔角质细胞培养NHOK、人舌癌细胞TCA8113、UM1、SCC1中miR-491-5p、趋化因子配体(CCL)22的表达;将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-491-5p组(转染miR-491-5p mimics)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-491-5p组(转染anti-miR-491-5p)、si-NC组(转染si-NC)、si-CCL22组(转染si-CCL22)、miR-491-5p+pc DNA组(共转染miR-491-5p mimics和pc DNA)、miR-491-5p+pc DNA-CCL22组(共转染miR-491-5p mimics和pc DNA-CCL22),用脂质体法转染至TCA8113细胞;Western印迹检测细胞中CCL22的蛋白表达;噻唑蓝(MTT)、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡;双荧光素酶报告实验检测细胞中miR-491-5p与CCL22的结合力;裸鼠成瘤实验检测肿瘤的生长。结果与NHOK组相比,TCA8113组、UM1组、SCC1组舌鳞状细胞癌细胞中miR-491-5p mRNA表达明显降低,CCL22 mRNA表达和蛋白表达均明显升高(P<0.05)。其中TCA8113细胞的变化最大,故选用该细胞用于后续研究。与miR-NC组相比,miR-491-5p组TCA8113细胞miR-491-5p mRNA表达显著升高,在48、72 h时,细胞增殖显著降低,细胞凋亡率显著升高(均P<0.05)。miR-491-5p的5′UTR端存在7个与CCL22的3′UTR端互补的核苷酸序列。与miR-NC组相比,miR-491-5p组WT-CCL22细胞的荧光素酶活性明显降低(P<0.05)。与anti-miR-NC组CCL22蛋白(0.99±0.04)相比,anti-miR-491-5p组(2.01±0.14)显著升高,与miR-NC组CCL22蛋白(1.00±0.66)相比,miR-491-5p组(0.38±0.01)显著降低(P<0.05)。与si-NC组相比,si-CCL22组TCA8113细胞CCL22蛋白表达明显降低,在48、72 h时,细胞增殖明显降低,细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。与si-NC组相比,si-CCL22组肿瘤组织CCL22蛋白表达明显降低,肿瘤质量和体积也均明显降低(P<0.05)。与miR-491-5p+pc DNA组相比,miR-491-5p+pc DNA-CCL22组TCA8113细胞中miR-491-5p mRNA表达明显降低,在48、72 h时,细胞增殖明显升高,细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。结论miR-491-5p可调控舌鳞状细胞癌细胞的增殖和凋亡。

重症急性胰腺炎患者外周血miR-22-3p和miR-324-5p水平及其对重症急性胰腺炎相关性急性肺损伤的诊断价值分析

目的检测miR-22-3p、miR-324-5p在重症急性胰腺炎(SAP)患者外周血中表达情况,探讨二者与SAP患者临床病理参数的关系及在SAP相关性急性肺损伤(ALI)诊断中的应用价值。方法回顾性收集2015年2月至2017年2月确诊并治疗的86例急性胰腺炎患者为研究对象,根据是否合并ALI分为合并ALI组(n=49)和未合并ALI组(n=37)。选取同期健康体检者45例作为健康对照组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各受试者外周血miR-22-3p、miR-324-5p水平,并计算受试者工作曲线(ROC曲线)下面积(AUC)和对SAP诊断校能,观察上述指标与临床病理参数的相关性。结果健康对照者、未合并ALI、合并ALI的SAP患者外周血miR-22-3p水平逐渐升高、miR-324-5p水平逐渐降低,两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。检测外周血miR-22-3p、miR-324-5p水平诊断SAP疾病的AUC分别为:0.729、0.683,灵敏度分别为:57.41%、50.89%,特异度分别为:83.70%、78.61%。miR-22-3p、miR-324-5p表达与SAP患者CT分级、胸水情况、APACHEⅡ评分和是否并发ALI疾病有关(P<0.05)。miR-22-3p、miR-324-5p水平诊断SAP合并ALI疾病的AUC分别为:0.791、0.748,灵敏度分别为:63.82%、58.90%,特异度分别为:83.91%、81.71%。COX比例风险模型分析结果显示,miR-22-3p、miR-324-5p水平、CT分级是影响SAP患者ALI发生风险的独立危险因素。结论 miR-22-3p在SAP患者外周血中高表达,miR-324-5p低表达,且在合并ALI患者和未合并ALI患者中存在明显差异,检测外周血miR-22-3p、miR-324-5p水平对SAP合并ALI疾病的诊断具有一定应用价值。

lncRNA NEAT1调控miR-22-3p促进NHE5的表达对神经胶质瘤细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨lncRNA NEAT1对神经胶质瘤细胞迁移和侵袭的影响及相关机制。方法运用qRT-PCR检测神经胶质瘤细胞系C6中lncRNA NEAT1、miR-22-3p、NHE5的mRNA相对表达量;蛋白质免疫印迹检测NHE5的蛋白质表达;运用细胞集落形成实验、划痕实验和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭情况。结果在神经胶质瘤细胞系C6中lncRNA NEAT1表达升高,miR-22-3p表达降低;过表达miR-22-3p可抑制神经胶质瘤细胞系C6的迁移和侵袭;miR-22-3p可降低NHE5的表达,NHE5可促进神经胶质瘤细胞迁移和侵袭。lncRNA NEAT1可负向调控miR-22-3p的表达,促进C6细胞的迁移和侵袭。结论lncRNA NEAT1通过负向调控miR-22-3p促进NHE5的表达促进神经胶质瘤细胞的迁移和侵袭。

rno-miR-16-5p靶基因预测、生物信息学分析及鉴定

目的对rno-miR-16-5p靶基因进行预测、生物信息学分析及鉴定,为深入研究rno-miR-16-5p的生物学功能奠定基础。方法应用TargetScan、miRDB、miRanda数据库预测出rno-miR-16-5p的靶基因,对靶基因进行基因本体论(GO)注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)生物通路富集分析,并利用双荧光素酶报告实验鉴定。结果3个数据库预测出的交集靶基因有48个,rno-miR-16-5p靶基因主要富集于细胞生长发育、促进突触合成及神经系统发育等生物过程,富集于血小板α颗粒、细胞质动力蛋白复合体等细胞组件与粘多糖分子功能中。信号通路则显著富集于唾液分泌通路、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路、环磷酸腺苷(cAMP)信号通路与胰腺分泌通路。双荧光素酶报告实验结果提示脑源性神经营养因子(BDNF)是rno-miR-16-5p的靶基因。结论rno-miR-16-5p靶向作用于BDNF的表达,可能通过参与cAMP信号通路促进神经系统发育的生物学过程。

MiR-30a-5p通过泛素水解酶22抑制人宫颈癌细胞上皮-间质转化功能

【目的】研究microRNA-30a-5p(miR-30a-5p)对人宫颈癌Hela细胞上皮-间质转化功能的影响及其相关机制。【方法】宫颈癌Hela细胞株分别转染目的mir的模拟物和阴性对照模拟物,分别以30a-5p组、NC组命名并标记细胞。同时,以未经过处理的Hela细胞作为对照(Control组)。分别用逆转录-聚合酶链反应法检测各组宫颈癌细胞的miR-30a-5p含量。Transwell实验检测3组细胞迁移能力和侵袭能力。Western-blot法检测3组细胞神经-钙粘素(N-cadherin)、α-连环蛋白(α-Catenin)和泛素水解酶22(USP22)表达水平。运用生物信息学方法预测miR-30a-5p的靶基因。采用Westernblot法检测USP22过表达对miR-30a-5p抑制EMT的拮抗作用。双荧光素酶实验检测miR-30a-5p与USP22的关系。建立皮下移植瘤模型观察miR-30a-5p的体内作用。【结果】30a-5p组宫颈癌细胞miR-30a-5p的表达水平明显上调,表达水平为Control组的853.82(862.26~843.11)倍(P<0.01)。30a-5p组侵袭细胞数量8.17(8.32~8.03)明显低于Control组(P<0.01)。30a-5p组细胞N-cadherin蛋白的细胞内含量明显下降,α-Catenin蛋白的细胞内含量明显上升,USP22蛋白表达量明显降低。合并USP22过表达处理的30a-5p组宫颈癌细胞中N-cadherin蛋白表达量明显升高,α-Catenin蛋白表达量明显降低。双荧光素酶检验结果显示USP22为miR-30a-5p的下游靶基因(P<0.01)。30a-5p组皮下移植瘤明显小于Control组(P<0.01)。与Control组肿瘤组织相比,30a-5p组肿瘤组织miR-30a-5p的相对含量升高,USP22蛋白含量降低,Ncadherin蛋白的含量降低,α-Catenin蛋白含量升高。【结论】miR-30a-5p在宫颈癌Hela细胞中,可能通过靶向识别下游靶基因USP22,进而抑制其翻译。最终实现对宫颈癌细胞EMT过程的抑制。

2型糖尿病合并桥本甲状腺炎患者血清微小RNA-22-5p和25羟维生素D水平变化及其预测价值研究

目的:探讨2型糖尿病(T2DM)合并桥本甲状腺炎(HT)患者血清微小RNA-22-5p(miR-22-5p)、25羟维生素D水平变化及其预测价值。方法:选取T2DM患者96例,根据是否合并HT分为T2DM组(50例)和T2DM+HT组(46例)。另选择同期体检健康者40例为对照组。比较三组一般资料、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、甲功五项[游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)]、血清炎症因子[高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-10]、25羟维生素D和miR-22-5p。采用Spearman法分析甲功五项、血清炎症因子与miR-22-5p及25羟维生素D的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-22-5p、25羟维生素D对T2DM合并HT的预测价值。结果:三组一般资料比较差异无统计学意义(均P>0.05)。与对照组比较,T2DM组FBG、HbA1c、hs-CRP、TNF-α、IL-6和miR-22-5p升高,25羟维生素D降低(均P<0.05);T2DM+HT组FBG、HbA1c、FT3、FT4、TSH、TPOAb、TGAb、hs-CRP、TNF-α、IL-6和miR-22-5p升高,IL-10和25羟维生素D降低(均P<0.05)。T2DM组FT3、FT4、TSH、TPOAb、TGAb、hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-10与miR-22-5p、25羟维生素D无相关性(均P>0.05)。T2DM+HT组FT3、FT4、TSH、IL-10与miR-22-5p、25羟维生素D无相关性(均P>0.05),TPOAb、TGAb、hs-CRP、TNF-α、IL-6与25羟维生素D呈负相关(均P<0.05),与miR-22-5p呈正相关(均P<0.05)。25羟维生素D、miR-22-5p以及两者联合检测预测T2DM合并HT的曲线下面积(AUC)分别为0.774、0.842、0.915,联合检测的预测价值较高。结论:T2DM合并HT患者25羟维生素D水平降低,miR-22-5p表达升高,两者与TPOAb、TGAb、hs-CRP、TNF-α、IL-6具有相关性,对T2DM合并HT具有较好的预测价值。

瘢痕疙瘩组织中miR-22-5p的表达及与eIF4E的相关性研究

目的:观察瘢痕疙瘩组织中微小RNA-22-5p(miR-22-5p)和真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)的表达,分析其相关性及临床意义。方法:选择51例瘢痕疙瘩组织作为观察组,51例增生性瘢痕组织作为对照组,51例正常皮肤组织作为正常对照组。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测三组中miR-22-5p的表达,应用免疫组化法和Western Blot法检测瘢痕疙瘩组织中eIF4E的表达。结果:观察组中miR-22-5p的表达明显低于对照组和正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-22-5p的表达在不同病变最大径、增殖指数和有无家族史中的表达差异有统计学意义(P<0.05);而在不同性别、年龄中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。瘢痕疙瘩中miR-22-5p与eIF4E呈负相关。结论:MiR-22-5p在瘢痕疙瘩中的表达下降,与临床及病理特征有关,miR-22-5p与eIF4E可能具有协同负向作用。

miR-22-5P靶向调控相关信号通路对毛囊干细胞增殖和分化的影响

目的 探讨miR-22-5P靶向调控相关信号通路对毛囊干细胞增殖和分化的影响。方法 将培养后的毛囊干细胞分为空白对照组、空白转染组、miR-22-5P转染组。空白对照组未作处理;空白转染组使用miR-NC转染;miR-22-5P转染组使用miR-22-5P mimics进行转染。利用CCK8、EdU实验检测各组细胞增殖活性。采用流式细胞法进行细胞周期检测。分别采用定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)、Western blot法检测各组细胞中的细胞增殖标志物(KI67、PCNA)、细胞增殖经典通路标志物(AKT、m TOR)、细胞分化标志物(K6、S100A3)、细胞分化经典通路标志物(Notch1、β-catenin)的m RNA水平和蛋白表达。结果 miR-22-5P转染组的细胞增殖能力低于空白对照组、空白转染组,差异有统计学意义(P <0.05)。miR-22-5P转染组处于S期的毛囊干细胞比例较空白对照组、空白转染组减少,差异有统计学意义(P <0.05);处于G0~G1期的毛囊干细胞比例较空白对照组、空白转染组增加,差异有统计学意义(P <0.05)。miR-22-5P转染组的KI67、PCNA、AKT的mRNA表达水平和蛋白表达量均低于空白对照组、空白转染组,差异有统计学意义(P <0.05);K6、S100A3、Notch1的mRNA表达水平及蛋白表达量均高于空白对照组、空白转染组,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 miR-22-5P能够对毛囊干细胞发挥增殖抑制作用,且可通过激活相关信号通路促进毛囊干细胞向毛囊分化。

lncRNA RPL22P1-201通过调控miR-216b-5p表达影响前列腺癌细胞增殖、细胞周期和多西紫杉醇的敏感性

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)RPL22P1-201通过介导miR-216b-5p表达对前列腺癌细胞增殖、细胞周期以及多西紫杉醇敏感性的作用机制。方法:基于Cancer LncRNA Census数据库分析前列腺癌组织和正常组织中RPL22P1-201的表达差异。实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测前列腺癌细胞株(DU-145、C4-2B、PC3、22Rv1、LNCaP)和正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)中RPL22P1-201表达水平。将PC3细胞分为si-RPL22P1-201组(转染RPL22P1-201干扰序列)和si-NC组(转染si-NC序列),集落形成实验检测PC3细胞增殖能力,流式细胞术检测PC3细胞周期,CCK-8法检测多西紫杉醇处理后各组PC3细胞的增殖情况,双荧光素酶报告基因实验验证RPL22P1-201与靶基因的结合,qRT-PCR检测miR-216b-5p表达水平,Western印迹检测TrkB、CDK4、cyclin D2、cyclin D3、CDK6蛋白表达水平。结果:前列腺癌组织中RPL22P1-201表达水平高于正常组织(P<0.01),前列腺癌细胞株中RPL22P1-201表达水平高于正常前列腺上皮细胞(P<0.01),si-NC组和si-RPL22P1-201组集落数量分别为(256.1±28.79)个和(78.77±14.52)个,差异有统计学意义(P<0.01)。si-NC组和si-RPL22P1-201组G0/G1细胞率分别为(43.18±4.56)%和(68.85±3.40)%,S细胞率分别为(36.84±2.28)%和(24.27±2.74)%,G2/M细胞率分别为(19.98±2.69)%和(6.88±1.57)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。si-RPL22P1-201组在多西紫杉醇作用下的细胞存活率均低于si-NC组(均P<0.05),RPL22P1-201能够与miR-216b-5p配对结合(P<0.01)。相比si-NC组,si-RPL22P1-201组PC3细胞中miR-216b-5p表达降低(P<0.01),TrkB、CDK4、cyclin D2、cyclin D3、CDK6蛋白表达均降低。结论:RPL22P1-201在前列腺癌中高表达,沉默RPL22P1-201通过升高miR-216b-5p表达抑制前列腺癌PC3细胞增殖和细胞周期,并增强PC3细胞对多西紫杉醇的敏感性。

MicroRNA-195-5p调节Bmpr1α表达对骨髓间充质干细胞成脂分化的影响

目的探讨miR-195-5p在补肾方含药血清干预大鼠原代骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BM SC)中的表达及其对成脂分化的影响。方法体外贴壁法原代培养的大鼠BM SC细胞经流式细胞术、CD44和CD34免疫荧光染色鉴定后,与椎间盘软骨细胞和成骨细胞一起采用荧光定量RT-PCR方法检测细胞中rno-miR-195-5p的表达情况;采用荧光素酶报告基因实验验证骨形态发生蛋白受体-1α(Bmpr1α)是否为rno-miR-195-5p的靶基因,采用Western印迹法和油红O染色检测rno-miR-195-5p对Bmpr1α表达和BMSC成脂分化的影响。结果流式细胞术与免疫荧光分析显示所培养细胞具备BMSC特征。rno-miR-195-5p在补肾方含药血清干预的原代BM SC中表达明显升高(P<0.01),且在分化完成的软骨细胞和成骨细胞中高表达。双荧光素酶报告实验与Western印迹法证实Bmpr1α是rno-miR-195-5p的靶基因。转染rno-miR-195-5p mimics上调BM SC中rno-miR-195-5p可抑制Bmpr1α的表达(P<0.05),降低成脂分化能力;而转染rno-miR-195-5p inhibitor可显著增加BM SC中Bmpr1α的表达(P<0.01),增强成脂分化能力。结论补肾方含药血清干预BMSC上调rno-miR-195-5p,通过降低其靶基因Bmpr1α的表达而降低BMSC的成脂分化,改善骨质疏松症状。

血浆外泌体源性miR-335-5p可作为三阴性乳腺癌诊断指标并抑制免疫逃逸

目的本研究旨在探究血浆外泌体源性miR-335-5p调控泛素特异性蛋白酶22(USP22)对三阴性乳腺癌(TNBC)免疫逃逸的影响。方法收集TNBC患者血浆与健康人血浆,之后分离血浆外泌体,实时定量PCR检测外泌体中miR-335-5p的相对表达。双荧光素酶报告实验验证miR-335-5p与USP22的相互作用。调节外泌体、MDA-MB-436细胞中miR-335-5p与USP22的表达,将其与CD8^(+)T淋巴细胞共培养并将其分为不同组。流式细胞术检测各组细胞中细胞凋亡情况,ELISA检测各组细胞γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。Western blot法检测细胞中USP22对程序性死亡蛋白1配体1(PD-L1)稳定性的影响。裸鼠成瘤实验检测miR-335-5p与PD-L1在体内对肿瘤生长的影响。结果TNBC外泌体样本中miR-335-5p的表达下调。USP22被证实为miR-335-5p的一个靶基因,此外,USP22可以抑制PD-L1蛋白泛素化。过表达miR-335-5p能抑制TNBC的免疫逃逸。抑制miR-335-5p可以促进TNBC的免疫逃逸,该作用可以通过下调USP22得到部分挽救。敲低miR-335-5p能促进体内肿瘤生长,加入PD-L1抗体后肿瘤生长被抑制。结论外泌体源性miR-335-5p通过下调USP22,促进USP22对PD-L1的泛素化,并抑制PD-L1介导的TNBC免疫逃逸。

CircPTPN22作为miR-766-3p分子海绵促进类风湿关节炎病理进程

目的本研究旨在探索circPTPN22在类风湿关节炎(RA)外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达及参与RA的机制。方法RT-PCR检测circPTPN22在20例RA和20例健康人(HCs)PBMCs中的表达,生物信息学预测能与其结合的microRNA(miRNA),并用功能学实验和双荧光素酶试验进行验证。检测miRNA在RA患者PBMCs中的表达并计算受试者工作特征曲线(ROC)评估miRNA在RA中的临床意义。结果CircPTPN22表达水平在RA PBMCs中显著降低。ROC分析提示circPTPN22是RA患者的潜在诊断生物标志物(AUC=0.7025),相关性分析结果显示cirPTPN22的表达与RA的SJC、anti-CCP呈负相关关系(SJC:r=-0.723;anti-CCP:r=-0.618)。MiR-766-3p在RA PBMCs中显著上调;ROC分析提示miR-766-3p的表达可以将RA患者与HCs区分开来(AUC=0.9125)。生物信息学分析、双荧光素酶试验和功能学实验显示circPTPN22能抑制miR-766-3p的表达,miR-766-3p通过调控下游靶基因SIRT5参与RA。结论CircPTPN22通过与miR-766-3p竞争性结合调控下游靶基因SIRT5参与RA的发生与发展,且circPTPN22是RA的潜在诊断生物标志物。