金线莲资源遗传多样性分析及耐热性评价

金线莲(Anoectochilus roburghii)是具有极高经济价值的珍稀濒危兰科药用植物,高温是制约其广泛生产栽培的首要限制因子,选育耐热品种是抵御高温热害最经济有效的措施之一。本研究利用目标起始密码子多态性(SCoT)分子标记技术对24份金线莲种质资源进行遗传多样性分析,并利用多元统计分析的方法对其中20份样本进行耐热性评价。遗传多样性分析结果显示:在遗传系数0.602水平上,可以把金线莲种质分成I和II两大类,I类分成A和B两个亚群,台湾金线莲(TJ)与其他资源遗传距离较远,单独归为II类;A亚群中除了W来源于云南,其他均为福建西北部收集的资源;B亚群主要来自闽南地区和广西。通过对20份金线莲资源5个生理参数测定,发现热处理后叶绿素含量和SOD活性明显下降,相对电导率明显升高,而丙二醛和可溶性蛋白含量热处理后各资源表现不一。利用多元统计分析方法进行耐热性初步评价,结果显示,TL、L1、A20、GZ1等4份资源较为耐热,TJ、HX、L、M、A21等5份资源不耐热。

不同基质对金线莲栽培的影响

以野生金线莲[Anoectochilus roburghii(Wall.)Lindl]为试验材料,研究不同基质对野生金线莲栽培驯化的影响,通过分析金线莲叶长、叶宽、叶间距、株高及叶片数等指标,以期筛选出适宜的基本培养基质。结果表明,4种基质中以椰糠的栽培效果最好,其叶长、叶宽、叶间距、株高均显著优于其他3组,不同栽培基质之间,叶长、叶宽、叶间距和株高差异显著。研究结果可为金线莲迁地保护与栽培提供技术参考和理论依据。

不同栽培基质对金线莲生长和生物产量的影响

以台湾金线莲为试验材料,研究不同栽培基质对台湾金线莲生长和生物产量的影响,以筛选适合金线莲生长的最优栽培基质。结果表明,金线莲茎生长和生物产量受栽培基质影响较大,且对鲜重的影响大于干重,其中以25%粗松树皮+75%进口泥炭土为栽培基质的金线莲生长最好,其生物产量高、茎粗长、节数多、根长且较多、叶片较多。相关性分析结果表明,金线莲干重与鲜重呈极显著的高度正相关,金线莲茎长、茎径、根长与生物产量关系极密切,通过选择合适栽培基质,能同时增加金线莲茎长、茎径和根长,提高生物产量。

高效液相色谱法同时检测4种金线莲黄酮苷元及其在提取工艺评价中的应用

基于高效液相色谱(HPLC)和提取离子流色谱-质谱(EIC-MS),建立了金线莲提取成分定性定量分析及提取效率评价新方法。方法采用20RBAX Ecipse XDB-C18色谱柱,以乙腈-0.03%乙酸水溶液为流动相,采用梯度洗脱,同时分离测定金线莲提取液中芦丁、山奈酚、异鼠李素和槲皮素4种黄酮苷元的含量,经EIC-MS验证,结果可靠。以黄酮提取率为指标,评价酶解-醇提、回流-醇提、搅拌-醇提、超声-醇提、超声-微波-醇提和煎煮6种提取工艺,结果显示,最佳提取工艺为回流-醇提法,提取时间短,醇用量少,总提取率最高,可达14.96mg/g。

不同激素水平对金线莲组织培养的影响

以金线莲的茎片、带节茎段和不定芽为外植体,研究不同植物生长激素组合和浓度配比对福建金线莲原球茎诱导、丛生芽诱导及幼苗生根壮苗的影响。结果表明:适合原球茎诱导的培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L+ZT 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L,诱导率达81%;适合丛生芽增殖的培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+TDZ 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L,丛生芽诱导增殖效果最佳,90 d时增殖倍数达23倍;适合不定芽生根的培养基为1/2MS+NAA 0.5 mg/L+IBA 4.0 mg/L+6-BA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L+AC 3 g/L+香蕉汁100 g/L。

金线莲练苗及移栽技术研究

以金线莲试管苗为试材,采用室内室外不同练苗方式、9种不同配比移栽基质进行移栽,研究了练苗方式、栽培基质对金线莲移栽成活率及生长状况的影响。结果表明:室外练苗成活率高于室内练苗;以珍珠岩、泥炭土+松木树皮(1∶1)2种基质为移栽基质,金线莲苗的移栽成活率高,成活率分别达到85%、75%(55d),金线莲生长状况良好,生长快,茎长增加明显,根明显伸长,根毛多,叶片绿而硬,重量增加快。

刺梨果酒的研制

以刺梨为原料研制出果香浓郁、营养丰富、风味独特的刺梨果酒。

响应面分析法确定刺梨醋的加工工艺

在单因素的基础上,采用响应面分析法对影响发酵产醋的主要因素进行优化,建立影响因素与响应值之间的函数关系。根据回归方程寻优得出,最佳工艺条件为温度为30℃、接种量为4%、初始酒度为10%。发酵产醋量为11.56%。结果表明,响应面法对发酵产醋的条件优化合理,为工业生产提供理论依据。

发酵条件对刺梨果酒主发酵作用的影响

干酵母的扩大培养级数、驯化培养、酒母添加量、温度等因素都会对刺梨果酒的发酵产生影响。以新鲜刺梨全汁为原料,接种经活化、驯化培养的酒母,控温发酵。试验表明,添加4%经驯化培养的酒母,22±1℃控温发酵,主发酵16d,发酵酒风味品质较好。

金线莲原球茎增殖研究

以金线莲原球茎为试材,研究了基本培养基、添加物以及不同培养方式对原球茎增殖的影响。结果表明:以B5为基本培养基最适合金线莲原球茎的增殖;天然添加物对金线莲原球茎增殖有明显的促进作用,椰汁对增殖的促进作用最大,培养45d后原球茎重量平均增加6.146倍;液体悬浮培养的增殖效果最佳,培养30d增殖倍数达2.150,原球茎生长健壮。

不同产地金线莲根茎和叶中多糖含量对比

考察了不同产地金线莲根茎和叶中多糖含量.应用超声辅助法和微波-超声协同萃取法提取金线莲根茎和叶中多糖,用苯酚-硫酸法测定其含量.微波-超声协同萃取法提取优于超声辅助法提取,金线莲根茎部的多糖含量高于叶中多糖含量,福建华安产金线莲多糖含量最高.金线莲中多糖含量为0.8509%～6.400%,具有开发药用的价值.

一测多评法测定不同种植金线莲中5种黄酮成分含量

目的建立一测多评法同时测定金线莲中5种黄酮类成分芦丁、水仙苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素的含量。方法采用超高效液相色谱法(UPLC),Uitimate?UPLC AQ C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm);0.1%甲酸乙腈(A)-0.3%甲酸水(B)为流动相,梯度洗脱;流速0.3 mL/min,检测波长368 nm,进样量5μL,柱温38℃。以水仙苷为内参物,建立与其他4种成分的相对校正因子,并利用该校正因子计算36批种植金线莲样品其他4种黄酮类成分的含量。同时采用外标法,验证一测多评法的可行性和准确性,并应用于不同种植金线莲的含量测定。结果水仙苷与芦丁、槲皮素、山柰酚、异鼠李素在线性范围内,相对校正因子分别为1.016、0.4650、0.4228和0.4539,4种成分的计算值与实测值无显著性差异,4种不同种植品金线莲的含量存在差异。结论建立的一测多评法可作为种植金线莲中5个黄酮类化学成分的含量测定方法,为种植金线莲的质量评价提供新的技术手段。

响应面分析法确定刺梨酒的加工条件

以刺梨为主要原料,在单因素的基础上采用响应面分析法对影响发酵产酒的主要因素进行优化,建立影响因素与响应值之间的函数关系。确定最佳工艺条件为温度28℃、菌种配比1∶1、含糖量17%。此条件下发酵酒精度为11.56%vol。

金线莲与灰岩金线莲的性状与显微鉴别研究

目的为鉴别金线莲Anoectochilus roburghii(Wall.)Lindl.及其主要混淆品灰岩金线莲Anoectochilus calcareus Aver.提供科学依据。方法采用性状及显微鉴定方法。结果金线莲在性状和显微鉴别方面与灰岩金线莲具有明显的区分特征。结论该研究结果可作为金线莲与灰岩金线莲的鉴别依据。

金线莲组织培养和移栽技术研究

文章通过筛选适宜金线莲丛芽诱导、增殖和生根的培养基和研究影响试管苗移栽的条件,建立起金线莲组织培养的技术体系。结果表明:金线莲丛芽诱导以MS+6-BA3.0 mg/L+NAA0.5 mg/L+KT1.0 mg/L为最佳;丛芽增殖以MS+6-BA3.0 mg/L+NAA0.5 mg/L为最佳;生根以1/2MS+IBA1.0 mg/L+NAA1.0 mg/L水解酪蛋白0.5%+0.5%活性碳为最佳;在移栽中,以混合土(普通土:沙质土:有机肥=1:1:1)作为基质为较好,移栽成活率达到90.9%。

雄性不育无籽刺梨花药发育过程中生理特性的初步研究

为探究无籽刺梨(Rosasterilis)雄性不育原因,采用1%I2-KI染色法观察花粉活性,并对无籽刺梨和正常可育刺梨(R.roburghii)花药不同发育时期的生理生化指标进行了研究。结果表明,无籽刺梨的败育花粉占95.5%,刺梨的正常花粉占99%。刺梨花药的可溶性蛋白质、可溶性糖和脯氨酸含量在各时期的总体变化趋势相似,可溶性淀粉含量呈上升趋势,而无籽刺梨花药的可溶性蛋白质、可溶性糖、淀粉和脯氨酸含量在各时期的变化无规律可循,且花粉成熟期这4种物质的含量均明显低于刺梨,即花粉成熟期缺少各营养物质的积累。在花药发育过程中,无籽刺梨的SOD活性均低于刺梨;MDA含量呈上升趋势,且上升幅度比刺梨大;MDA含量和POD活性均高于刺梨。因此,营养物质的匮乏和酶系统的紊乱可能是导致无籽刺梨雄性不育的原因。

金线莲中六种黄酮成分的含量测定及其主成分、聚类分析

建立HPLC同时测定金线莲中6种黄酮类成分芦丁、异槲皮苷、水仙苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素含量的方法,并对不同栽培方式的金线莲中6种成分的含量进行主成分分析和聚类分析。30批金线莲样品主成分分析中,前3个主成分累积方差贡献率为86. 95%;系统聚类分析,当10<阈值<25时,可聚为2类。建立的方法操作简便,结果准确可靠,可用于金线莲中芦丁、异槲皮苷、水仙苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素含量的同时测定,可为不同种植方式金线莲药材的区分提供科学依据。

金线莲多糖纯化工艺及其抗氧化活性研究

以金线莲多糖粗提取物为原料,通过静态吸附-解吸试验,考察8种不同极性大孔树脂对多糖吸附率、解吸率、脱色率和脱蛋白率的影响,筛选出最优大孔树脂;以吸附、解吸效果为指标,考察大孔树脂纯化多糖的工艺参数;以维生素C(vitamin C,VC)为对照品,通过测定1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)和羟基自由基(·OH)清除能力来评价纯化前后金线莲多糖的抗氧化活性。结果表明:最优大孔树脂为X-5,金线莲多糖的最佳纯化工艺:上样浓度为4 mg/mL,上样流速为2 BV/h,上样体积为4 BV,洗脱剂浓度为40%乙醇溶液,洗脱流速为2 BV/h,洗脱量为5 BV。在此工艺下,金线莲多糖由深褐色变为浅棕色,含量从27.88%提高到76.07%;纯化后的金线莲多糖对DPPH·和·OH具有更强的清除作用,当浓度为0.6 mg/mL时,对DPPH·和·OH的清除率分别从57.27%和60.12%提高至86.24%和88.63%,清除作用略低于VC,表明纯化后的金线莲多糖具有较好的抗氧化活性,可为金线莲多糖的工业化生产和进一步开发利用提供参考。

金线莲液在改善环磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能中的作用研究

目的:探讨金线莲液在改善环磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能中的作用。方法:将48只小鼠随机均分为模型组、金线莲液低剂量组、金线莲液高剂量组、正常组。喂养25d,第1天即给予低、高剂量组灌胃金线莲液,其余两组予以生理盐水对照。于第18天除正常组外,其余三组腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑制模型。于第25天处死并取材。测定小鼠体重及胸腺、脾脏重量后计算胸腺、脾指数,测定IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ炎症因子浓度,并检测外周血白细胞情况。结果:实验后除正常组外,其余三组小鼠体重均明显降低;金线莲液低剂量组、金线莲液高剂量组、模型组的脾脏指数、胸腺指数,炎症因子IL-4、IL-10,外周白细胞总数均低于正常组(P<0.05);炎症因子IL-6、IFN-γ高于正常组(P<0.05)。金线莲液低剂量组脾脏指数、胸腺指数,外周白细胞总数较金线莲液高剂量组高(P<0.05);金线莲液高剂量组IL-4、IL-10高于金线莲液低剂量组,而IL-6、IFN-γ低于金线莲液低剂量组(P<0.05)。结论:金线莲液能有效改善免疫抑制小鼠的免疫功能,增加脾脏指数与胸腺指数,减轻体内炎症反应,提高外周白细胞水平。不同剂量金线莲液在改善免疫抑制小鼠免疫功能中的机制不同,当剂量低时,主要对免疫器官指数影响和白细胞方面起作用,当剂量升高时主要在抗炎方面发挥作用而起到免疫改善功能,为下一步临床实验提供有利支撑。

金线莲组培苗设施栽培技术

从大棚建设、组培苗选择及炼苗、移栽及移栽后的养护管理等方面,阐述了金线莲组培苗大棚设施栽培主要技术。