干旱胁迫下 rolB 基因对杜梨生长和抗旱性的影响

以转rolB基因杜梨和非转基因杜梨杜梨组培苗为试材,研究轻度(土壤相对含水量50%~55%,T2)、中度(土壤相对含水量40%~45%,T3)和重度(土壤相对含水量30%~35%,T4)干旱胁迫对植株生长、活性氧含量、MDA含量和抗氧化酶活性的影响,以土壤相对含量水70%~75%处理(T1)为对照,旨在明确rolB基因对转基因杜梨抗旱性的影响,为今后选育抗旱性强的杜梨种质资源提供依据。结果表明:胁迫处理前(T0)转rolB基因杜梨的根冠比、叶片中总叶绿素、类胡萝卜素含量和CAT活性显著高于非转基因杜梨,活性氧(O-2、H 2O 2)、MDA含量和SOD、POD活性无显著差异。与对照(T1)相比,轻度胁迫(T2)对转基因杜梨总鲜重、总干重、活性氧和抗氧化酶活性无显著影响,显著降低了非转基因杜梨总鲜重、总干重、根冠比。中度(T3)、重度(T4)胁迫显著降低了2株系总鲜重、总干重、根冠比,而O-2、H 2O 2含量和SOD、POD、CAT活性显著增加。但是,中度和重度干旱胁迫下转基因杜梨的活性氧、丙二醛含量显著低于非转基因杜梨,SOD、POD、CAT活性和叶片相对含水量显著高于非转基因杜梨。由此可知,rolB基因提高了转基因植株的根冠比、叶片中色素含量,增强了干旱胁迫下抗氧化酶活性,降低活性氧和MDA的积累,缓解了干旱对转基因杜梨生长的抑制作用。

转rolB/pttGA20ox双价基因提高银白杨生根能力及生长速度的研究

为提高银白杨的扦插生根能力和生长速度,该文利用含有rolB和pttGA20 ox双价基因的植物表达载体对银白杨进行遗传转化,经过PCR和Southern杂交检测,获得了4株转化双价基因的植株。组培苗研究结果表明:转双价基因银白杨在形态特征方面具有rolB和pttGA20 ox单个基因在其他植物中表达的优良性状;在生根能力方面,转化植株的生根时间较对照提前3 d左右,而且生根的数量和长度明显高于对照组银白杨;在生长速度方面,转双价基因银白杨的生长率明显大于对照组银白杨,其生长差异达到了极显著的水平。

rolB基因导入对农垦58S内源激素水平、株型和育性的影响

对以农杆菌介导法获得的rolB转基因农垦 5 8S的研究表明 ,rolB能明显改变水稻内源激素水平。其中 ,叶片和长日照条件下幼穗IAA水平有明显升高 ,同时长日照条件下iPAs及GA含量也有不同程度增加 ,但ABA水平无明显改变。rolB对水稻株型有明显影响 ,表现为株型紧凑 ,叶片直立、深绿 ,多数后代株系分蘖减少 ,叶片和颖花等器官变小 ,库容受限 ;也发现部分株型有明显改良、但其他性状变化较小的株系。rolB基因还能导致农垦 5 8S长日照条件下不育性明显逆转、光敏性减弱 ,可能与内源激素水平改变有一定关系。

外源rolB基因对已转Ri质粒的杨树苗期生长与光合特性的影响

为研究多拷贝rolB基因在转基因植物中的表达,对转入多拷贝rolB基因的三倍体毛白杨1年生植株进行了苗期生长、叶绿素含量及光合特性的测定。结果表明:rolB基因多拷贝株系和转Ri质粒三倍体毛白杨的苗高、节间距和地径(其中多拷贝株系863B的地径与未转基因三倍体毛白杨一样)均低于未转基因三倍体毛白杨;rolB基因多拷贝株系与Ri质粒转化株系的苗高、节间距和地径的差异无规律性。rolB基因多拷贝株系和Ri质粒转化株系的叶绿素a、b、和a+b含量及净光合速率均低于未转基因三倍体毛白杨,其中01B组多拷贝株系的叶绿素a、b、和a+b含量均低于其Ri质粒转化株系,而63B组多拷贝株系与其Ri质粒转化株系之间的差异无规律性。rolB基因多拷贝株系与Ri质粒转化株系净光合速率的差异无规律性。对蒸腾速率、气孔导度和胞间CO2浓度进行比较,rolB基因多拷贝株系与未转基因三倍体毛白杨和Ri质粒转化株系差异均为无规律。

毛白杨转rolB基因植株生根能力的研究

为了提高毛白杨的生根能力,把rolB基因转入毛白杨中,获得7个转化植株.在无激素培养基上,转化植株的生根率达到80%～100%,而未转化植株的生根率只有13%～20%.转化植株对生长素表现出高度的敏感性,当IBA浓度达1.0mgL时,转化植株的生根受到抑制.移栽后,1个转化株系的高生长明显低于对照,2个转化株系的茎节数比对照增加,3个转化株系的节间长比对照降低,其他转化植株与对照无明显差异.硬枝扦插试验结果进一步证实了转化植株扦插生根能力显著提高,扦插生根率达到74.4%～92.3%,根的数量也明显增加.

Bt-BADH-GA20ox-rolB多基因在转化烟草中的表达分析

为探讨Bt-BADH-GA20ox-rolB多基因转化烟草中外源基因的表达情况及对转化植株的影响,对转多基因烟草及对照植株进行了生理生化试验,包括内源激素含量测定、耐盐性试验、Bt毒蛋白测定、移栽后植株生长的观测。结果表明:转基因植株生根能力强,根、茎、叶各部位内源激素(IAA、GA3)与对照差异明显;在低浓度NaCl下,转基因和对照植株生长差异不明显,当NaCl浓度达到300mmol/L时,对照生长受到抑制,转基因植株生长正常;在转基因植株的茎、叶中均检测到高浓度的Bt毒蛋白,以叶片饲喂斜纹夜蛾幼虫明显抑制其发育。移栽后的转基因植株高生长更加明显,苗高和地茎分别为对照的1.61和1.37倍。

RolB基因对三倍体毛白杨的转化研究

为了提高三倍体毛白杨的生根能力,把rolB基因转入三倍体毛白杨中,获得20个转化植株,在无激素培养基上,转化植株的生根率达到100%,而未转化植株的生根率只有15%~20%。PCR扩增证明目的基因已经插入到植物的基因组中。对部分rolB基因转化植株进行了GUS组织化学染色检测,转化植株叶片中有GUS活性的表达。

rolB-pttGA20ox双价基因在毛白杨中的表达及转化植株的形态特征

本研究对已整合外源rolB-pttGA20ox双价基因的毛白杨株系进行半定量RT-PCR检测,并对移栽后的转基因植株进行形态观测。结果表明:rolB和pttGA20ox基因的表达模式不同,rolB基因在不同器官中的表达强度为根>茎>叶,pttGA20ox基因的表达无组织特异性;rolB基因受外源生长素短时间诱导时表达丰度发生变化,pttGA20ox基因表达丰度不受外源生长素短时间诱导。对移栽温室后的转化植株的生长量分析结果表明,4个转化株系及对照的高生长增加量表现为RG-4>RG-1>RG-3>RG-2>CK。4个转化株系的株高和茎间长明显高于对照。转化株系与对照之间以及转化植株之间的形态特征出现了差异。

发根农杆菌Ri质粒rolB基因研究进展(综述)

Ri T-DNA rolB基因是发根农杆菌转化植物的决定因子，rolB 基因表达引起转基因植物形成大量毛状根(hairy root)。本文介绍近年来rolB基因的位点、表达与调控及Rol B蛋白结构与功能方面的研究进展。

转rolB基因棉花抗旱性研究

以导入rolB基因的第6代转基因棉花植株为供试材料,对转基因株系进行苗期抗旱性鉴定,茎粗、根/冠比的调查和分析。结果表明:rolB基因的导入不仅使转基因棉的茎粗明显提高,而且还使其生根能力明显增强,根/冠比显著大于对照,表现为根系更为强大,抗旱性更强。

35SP-rolB基因在棉花转基因系基因组中转录稳定性研究

以8个T7代的棉花35 SP-rolB转基因系为材料,通过提取转基因株系及对照植株叶片总DNA和总RNA,对各个转基因株系分别进行PCR检测和Northern杂交,研究转基因的遗传稳定性和转录稳定性。结果表明,35 SP-rolB目的基因和NPTⅡ选择标记基因在经过对转基因系的连续多代定向选择后,在各个转基因系基因组中都能够稳定遗传和高效转录,说明针对强生根、早发、抗早衰等特殊性状进行定向选择是保持rolB转基因系遗传稳定性和转基因表达稳定性的有效途径。

rolB基因对颠茄表型发育和托品烷生物碱合成的影响

发根农杆菌pRiA4质粒上的rol基因是促进次生代谢的强效基因,可利用rol基因对颠茄进行分子育种以提升颠茄中托品烷生物碱(tropane alkaloids, TAs)含量。本研究将rolB基因在颠茄植株中进行超表达,为了研究rolB基因对颠茄TAs生物合成的影响,分析了转基因颠茄的表型、TAs含量及TAs合成途径中关键酶基因的表达水平。结果表明,转基因颠茄根系发达,叶片增大、叶片鲜重增加、叶片颜色加深,花朵增大、花形改变,雌蕊高度降低,花粉活力下降。转基因颠茄茎中TAs的含量显著高于对照,东莨菪碱、山莨菪碱、莨菪碱的含量分别为对照的2.11~2.91、1.23~2.37、4.88~5.20倍。与对照组相比, TAs合成途径中的关键酶基因N-甲基腐胺转移酶(PMT)、吡咯烷聚酮合酶(PYKS)、托品酮还原酶I (TRI)、芳香族氨基酸氨基转移酶4 (ArAT4)、UDP-糖基转移酶1 (UGT1)和莨菪碱6-β-羟化酶(H6H)的表达上调,且托品酮还原酶II (TRII)作为代谢分流基因表达下调。研究表明rolB基因通过增强TAs合成途径代谢流和减弱竞争支路代谢分流,增强了颠茄根中TAs的合成能力和茎中的积累。本研究为利用rolB基因进行高产TAs颠茄的分子育种奠定了基础。

用ro/B基因转化大红甜橙的初步研究

为建立大红甜橙的再生及遗传转化体系,提高转化芽的成株率,以30d龄的大红甜橙(CitrussinensisOsbeck)实生苗上胚轴为材料,导入rolB基因,进行遗传转化研究.结果表明:MS+3.0mg/L6-BA培养基诱导不定芽的效果最好,达95%以上.遗传转化时,采用培养基Ⅱ(MS+3mg/L6-BA+200μmol/LAs)+培养基Ⅳ(MT+3mg/L6-BA+50mg/LKan+500mg/LCef)组合的抗性芽诱导最快,诱导率为51%.用微芽嫁接的方法,将抗性芽嫁接到卡里佐枳橙上,成苗良好,已获得19株转rolB基因植株,盆栽在温室中生长良好.

基于Cre/loxP重组系统的多基因载体构建及烟草转化研究

利用一套基于Cre/loxP重组系统的植物多基因表达载体系统将苏云杆菌毒蛋白基因(BtCryIAc)、甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)、GA20氧化酶基因(pttGA20ox)和rolB基因构建于植物表达载体pYL1305上,命名为pYL1305BBGR。采用农杆菌介导的叶盘法转化烟草,经PCR和Southern blot检测发现,多基因已成功转入烟草基因组中;经半定量RT-PCR检测证实,4个基因均能正常表达。

人参发根的诱导及其分子检测

[目的]探讨发根农杆菌诱导人参发根分子机理。[方法]用发根农杆菌A4菌株感染3年生人参根外植体,在无激素的MS培养基上诱导人参发根,并对其进行分子检测,考察rolB和rolC基因是否转化并整合到人参基因组中。[结果]成功获得了人参发根,该发根在固体和液体培养基上得到了很好的继代;从人参发根DNA中检测到rolB和rolC基因,与已发表发根农杆菌质粒相应的核苷酸序列的同源性达到99%。[结论]发根农杆菌质粒的rolB和rolC基因已转化并整合到人参基因组中,是人参发根产生的分子机理。

发根农杆菌诱导产生发状根及其在植物科学领域中的应用

发根农杆菌Ri质粒上T-DNA中含有的rolB基因可以通过转化侵染植株形成大量的发状根。由于通过发状根体系容易获得再生的转化植株,而且这些植株可表现出很多能稳定遗传的表型变异,因此该技术在植物科学领域中有着广阔的应用前景。对发根农杆菌的生物学特性、Ri质粒的结构和功能、rolB基因的位点与特征、发根农杆菌诱导发状根的转化机制和方法、诱导发状根发根的影响因素、发状根除菌后植株再生及鉴定等方面进行了归纳和分析,并对发根农杆菌诱导产生发状根在植物科学各领域的应用进行了简单的综述。

几种化学杀虫剂对蓝莓园白蚁的诱杀效果研究

安徽皖南蓝莓园近年来白蚁危害严重。试验在对黄胸散白蚁开展室内生物活性筛选的基础上,结合果园毒饵诱杀,研究了几种毒饵对蓝莓园白蚁的防治效果。室内毒饵饲喂结果表明:氟虫腈、氟铃脲、阿维菌素和吡虫啉的毒杀致死速率适中,比较符合白蚁诱杀的要求。果园诱杀结果表明:毒饵中氟虫腈以500 mg/kg处理时的区域白蚁减退率高达83.4%,以250 mg/kg处理时减退率为79.3%,且单株蚁数均显著低于对照。氟虫腈可作为一种较好的杀虫剂用于蓝莓园白蚁毒饵诱杀防控。

胡杨组织培养叶片及插穗毛状根发生

胡杨(Populus euphratica)是唯一分布在干旱沙漠地区的高大乔木,根蘖能力强,但自然条件下插穗难以生根,扦插繁殖困难。该文研究发根农杆菌菌株ATCC11325诱导胡杨发根,菌液浓度为OD_(600)=0.4,添加100 mg·L^(–1)乙酰丁香酮,叶片切段划伤预培养后侵染10分钟,培养20天,在叶片创伤部位诱导发生无向性的健壮毛状根;浸染肉质根插穗,须根发生和植株成活率从20%提高到60%,且地上部分分枝多,生长茂盛。该发根农杆菌菌株显著促进胡杨插穗生根成活。