外源磷或有机质对板蓝根吸收转运砷的影响

采用土壤培养方法,研究了不同含砷水平土壤中添加外源磷或有机质对砷在板蓝根地下部和地上部累积与分配的影响。结果表明,在外源添加磷或者有机质的情况下,与自然土相比含砷土对板蓝根的生长有一定的促进作用;在自然土(13.4 mg/kg)中,外源磷没有明显影响板蓝根地下部对砷的累积,却显著降低了砷由地下部向地上部的转运,并且添加200 mg P2 O5/kg显著降低了砷在地上部的累积。然而,在含砷土(33.4 mg/kg)中,100 mg P2O5/kg处理显著降低了砷在地下部的累积,但随磷用量的增加反而促进了地下部砷的累积;在添加有机质试验中,10 g/kg的有机质显著降低了自然土中板蓝根地下部和地上部对砷的累积,并且砷的吸收能力也明显下降。在含砷土(23.4 mg/kg)中,添加5 g/kg的有机质不仅降低了砷在板蓝根中的富集,而且降低了其对砷的吸收能力,提高了砷由地下部向地上部的转运,但是随着有机质施用量增至10 g/kg,地下部砷含量及其吸收砷的能力均有一定程度的增大。因此,在砷水平较低的自然土壤上种植板蓝根添加200 mg P2O5/kg和10 g/kg的有机质是控制砷在该草药体内积累的适宜用量,而在砷水平较高的土壤上100 mg P2O5/kg和5 g/kg的有机质是降低板蓝根体内砷累积的适宜用量。

板蓝根化学成分的研究(Ⅲ)

目的 提取分离板蓝根化学成分。方法 板蓝根用 95 %乙醇渗漉 ,不同极性溶剂分级萃取 ,再分别用硅胶和大孔树脂作柱层析分离 ,测定纯化合物的理化常数和波谱数据 ,鉴定化学结构。结果 从板蓝根中分得 2个化合物 ,分别命名为 3 -羟苯基喹唑酮〔3 - ( 2′- hydroxypheny1) - 4 ( 3 H) - quinazolinone〕,依靛蓝酮 ( isaindigodione)。结论 该

盐胁迫对菘蓝幼苗生长和抗性生理的影响

以"定蓝1号"为试验材料,采用不同浓度NaCl溶液(0,30,60,90,120和150mmol·L^(-1))对菘蓝幼苗进行处理,胁迫14d后测定了其生长指标、生物量积累、叶片相对含水量、根系活力、根质膜透性、渗透调节物质含量以及抗氧化酶活性等指标,分析不同程度盐胁迫对菘蓝幼苗生长和抗性生理的影响。结果表明:NaCl胁迫对菘蓝幼苗株高和根长都有抑制作用,对根和叶的物质积累也有显著影响,并随浓度的递增呈降低的趋势;菘蓝幼苗叶片相对含水量和根系活力均随NaCl浓度的增加呈现下降趋势,而根质膜透性、叶片脯氨酸含量则呈升高趋势;丙二醛(MDA)含量、组织自动氧化速率(RAD)、过氧化物酶(POD)活性和超氧化物歧化酶(SOD)活性都随NaCl浓度的增加呈先升高后降低的趋势。但当NaCl浓度低于90 mmol·L^(-1)时,菘蓝幼苗的生长没有受到盐胁迫的明显抑制,根系活力降低不明显,脯氨酸、丙二醛含量和保护酶活性也未显著升高,说明菘蓝幼苗对低浓度盐环境具有一定的耐受性。

板蓝根化学成分研究

目的 分离鉴定板蓝根中的化学成分。方法 用硅胶、ODS等柱色谱分离纯化 ,以核磁、质谱、紫外、红外光谱及理化常数鉴定结构。结果 分离鉴定了 5个化合物 ,为新橙皮苷 ( )、甲酸铵 ( )、异甘草素 ( )、甘草素 ( )和腺苷 ( )。结论 其中新橙皮苷、甘草素和异甘草素为首次从十字花科中分离得到 ;甲酸铵为首次从该植物中分离得到。

四倍体菘蓝毛状根培养系统的建立及外界因子对其生长的影响

用发根农杆菌 Agrobacterium rhizogenes R16 0 1,A4,ATCC15 834菌株感染菘蓝 Isatis indigoticaFort.同源四倍体的子叶 10 d后 ,在子叶切口处均能陆续长出毛状根。转化根在不含激素的 MS固体培养基上快速生长并表现出典型的毛根性状 ,经冠瘿碱分析证明确已被转化。

板蓝根化学成分研究(Ⅰ)

目的 提取分离板蓝根化学成分。方法 板蓝根用 95 %乙醇渗漉 ,用不同极性溶剂分级萃取 ,再分别用硅胶和大孔树脂作柱层析分离 ,测定纯化合物的理化常数和波谱数据 ,鉴定化学结构。结果 从板蓝根中分得 2个化合物 ,分别命名为依靛蓝双酮 (isaindigotidione, ) ,(E) -二甲氧羟苄吲哚酮〔(E) - 3- (3′,5′- dimethoxy- 4′- hydroxy-benzylidene) - 2 - indolinone, 〕。结论 和 为

四倍体菘蓝毛状根的培养及其抗内毒素成分分析

目的 从菘蓝的同源四倍体植物诱导出毛状根并探讨用毛状根培养来大规模生产有用的药用植物次生代谢物的可能性。方法 利用发根农杆菌A4菌株对四倍体菘蓝进行感染 ,采用高效毛细管电泳法同时测定诱导出的毛状根中具有抗内毒素作用的五种有机酸 [邻氨基苯甲酸、水杨酸、丁香酸、苯甲酸、3 (2 苯甲酸 ) 4(3H) 喹唑酮 ]的含量。结果 A4菌株从四倍体菘蓝诱导出毛状根 ,且毛状根含有原植物中具有抗内毒素作用的五种有机酸。结论 发根农杆菌能诱导四倍体植物产生毛状根 。

不同产地来源菘蓝根生物量、蛋白质和多糖含量比较

将北京、河南、山西、内蒙古包头、内蒙古赤峰5个不同产地的菘蓝和河北的四倍体菘蓝引种到江苏省灌南地区,以江苏灌南菘蓝为对照,分析不同来源材料的生物量、蛋白含量和多糖含量,并以生物量、蛋白含量和多糖含量为指标比较各地材料引种到江苏连云港地区的适应性。结果表明:河北的四倍体菘蓝根的生物量、蛋白含量和多糖含量均最高,且具备较好的生物性状和较好的适应性,是苏北地区最佳的引种材料;河南的材料也是较适宜的二倍体引种材料。

中草药提取物对板蓝根根腐病菌抑制作用研究

测试了123种中草药提取物对茄腐镰刀菌（Fusarium solani）菌落生长及分生孢子萌发的抑制作用。结果表明：提取物浓度为0.01 g/mL时,99种提取物对菌落生长具有显著的抑制作用,其中苦楝皮和威灵仙的抑菌率大于50%,北沙参的抑菌率达到了100%;112种提取物对分生孢子萌发具有显著抑制作用,其中11种提取物的抑制率在50%以上,而且北沙参和牛膝的抑制率达到了100%。将抑制率大于50%的11种提取物稀释为200倍,进行二次筛选,发现苦楝皮和威灵仙2种提取物对菌落生长的抑制作用下降,而北沙参对菌落生长抑菌率仍为100%;11种提取物对分生孢子萌发抑制率下降的幅度在21.59%~47.02%,而北沙参的抑制率最高,为74.50%。北沙参的抑制中浓度（EC50）为3.621 mg/mL。

不同氮素形态和配比对菘蓝根的生长及含氮成分含量和总量的影响

以来源于安徽亳州、甘肃张掖、安徽阜阳、山西运城和陕西商洛的5个种源菘蓝(Isatis indigotica Fort.)为实验材料,采用田间试验法对不施氮素(对照),仅施用NO_3^--N(T1)或NH_4^+-N(T2),混合施用氮素〔n(NH_4^+-N)∶n(NO_3^--N)=75∶25(T3)、n(NH_4^+-N)∶n(NO_3^--N)=50∶50(T4)和n(NH_4^+-N)∶n(NO_3^--N)=25∶75(T5)〕以及仅施用CO(NH2)2(T6)条件下各种源菘蓝的单株根鲜质量和干质量,根折干率,根中游离总氨基酸、可溶性蛋白质和总氮含量,以及单株根中游离总氨基酸、可溶性蛋白质和总氮总量的差异进行了比较分析。结果表明:在同一施氮条件下不同种源间菘蓝根的各项指标均有一定差异;而与各自的对照相比,不同施氮条件下同一种源菘蓝根的各项指标也有一定差异。总体来看,安徽亳州和山西运城种源菘蓝根的生长指标均在T6组中较高,甘肃张掖种源根的生长指标则在T2组中相对较高,安徽阜阳种源根的生长指标在T5组中最高,陕西商洛种源根的生长指标在T4组中较高。各施氮条件下安徽亳州种源菘蓝的单株根中游离总氨基酸、可溶性蛋白质和总氮总量均低于其对照,并在T6组中相对较高;甘肃张掖和陕西商洛种源根的上述3项指标分别在T2和T3组中最高,而安徽阜阳和山西运城种源根的上述3项指标则分别在T5和T1组中较高。研究结果显示:不同氮素形态和配比对菘蓝根生长和根中含氮成分积累的影响效应存在种源间的差异,并且对同一种源根生长和根中含氮成分积累有益的氮素形态和配比也不同。因此,为了获得高产优质的板蓝根药材,建议在菘蓝的栽培过程中针对不同种源采取适宜的施氮措施,并兼顾生长量和有效成分含量。

RiT-DNA对四倍体菘蓝的遗传转化及其植株再生

目的 :建立一套利用发根农杆菌转化四倍体菘蓝的有效方法。方法 :利用发根农杆菌R16 0 1,ASTCC15 834和A4感染四倍体菘蓝的子叶外植体诱导出毛状根 ,再将毛状根置于含不同激素的培养基上诱导再生植株。结果 :3种农杆菌具有不同的诱导能力 ,毛状根在不含激素的MS固体培养基上快速生长并表现出典型的毛根性状 :多分枝、多根毛且无向地性 ,经冠瘿碱分析证明确已被转化。毛状根在无激素的MS增养基中悬浮培养两周后其生物量增加近 35倍 ,在含BA的MS固体培养基上不经愈伤组织阶段直接分化出不定芽 ,所有不定芽都可在生根培养基上生根长成再生植株。冠瘿碱检测表明Ri质粒的T DNA部分已转化到再生植株基因组中。结论 :发根农杆菌可以诱导四倍体菘蓝长出毛状根 ,经诱导出的毛状根具有再生完整植株的能力。

应用发根农杆菌RiT-DNA建立菘蓝的毛状根优质株系和植株再生系统

目的 :建立菘蓝 ( Isatis indigotica Fort)的毛状根离体培养系统 ,并诱导毛状根再生植株。 方法 :分别用发根农杆菌A4,R16 0 1和 ATCC15 834三种菌株感染菘蓝的子叶外植体 ,获得毛状根 ,并筛选了优质株系 ;测定了毛状根的生长曲线 ;在含不同激素的培养基上诱导毛状根再生植株 ;利用高压纸电泳法对毛状根和再生植株进行 T- DNA转化的检测。 结果 :首次利用发根农杆菌 A4,R16 0 1和 ATCC15 834三种菌株成功地从菘蓝中诱导出毛状根 ;菘蓝毛状根在含 BA的 MS培养基中成功地诱导出再生植株 ;经高压纸电泳检测 ,菘蓝毛状根及其再生植株中均含有甘露碱 ,表明 Ri质粒的 T- DNA已整合进毛状根和再生植株中。 结论 :菘蓝毛状根离体培养和植株再生系统的建立 ,为进一步进行药用活性成分的工业化生产和引入外源基因改良性状奠定了基础。

火焰原子吸收光谱法测定菘蓝不同部位的金属元素

采用火焰原子吸收光谱法测定药用植物菘蓝的根、茎和叶中 Cu、Zn、Fe、Mg、Ca的含量。加标回收率在 97.6 %— 10 4 .9%之间 ,相对标准偏差 (RSD)小于 1.5 %。该法灵敏度高 ,结果准确。为研究金属元素在菘蓝中的分布及其含量与菘蓝的药效关系提供了有用的数据。

四倍体板蓝根中的苯丙素类成分

目的 考察四倍体菘蓝Isatis indigotica根的化学成分。方法 应用大孔树脂和硅胶柱色谱对化学成分进行分离纯化,应用理化常数测定和光谱(IR、MS、1 H- NMR、1 3C- NMR、2 D- NMR)分析技术鉴定结构。结果 从四倍体板蓝根中分离得到5个苯丙素类化合物,分别鉴定为:落叶松脂素( )、落叶松脂素- 4 - O-β- D-葡萄糖苷( )、落叶松脂素- 4 ,4′- O-二- β- D-葡萄糖苷( )、紫丁香苷( )、4 - (1,2 ,3-三羟基丙基) - 2 ,6 -二甲氧基苯- 1- O- β- D-葡萄糖苷( )。结论 ～ 为首次从该种植物中分离得到, 为新化合物。

氮磷对菘蓝营养生长期根、冠生长的影响

通过盆栽试验,研究了不同的氮磷处理对菘蓝(Isatis indigoticaFort.)的株高、叶面积、叶绿素、可溶性蛋白、根、冠干物质积累、根长、根粗、根冠比等指标的影响。结果表明,氮对菘蓝的株高、单株叶面积、叶绿素的含量、干物质积累均具有明显的促进作用,且氮磷配合施用时效果更好;氮、磷均可以提高菘蓝可溶性蛋白的含量,单施氮肥降低了菘蓝的根冠比,而单施磷肥增大了菘蓝根冠比,以菘蓝根和叶同时采收为目的时,以处理6的效果最佳。

栽培方式对菘蓝农艺性状及产量和品质的影响

栽培方式对中药材产量和品质影响较大。本研究为了探讨河西走廊绿洲灌溉区菘蓝的最佳栽培方式,通过田间试验,采用栽培模式(平作和垄作)和覆膜方式(不覆膜、覆白膜和覆黑膜)二因素随机区组试验设计,设置6个处理。按照播种至收获每月一次定期采集菘蓝植株样品,测定了6种栽培方式下菘蓝根农艺性状指标、板蓝根产量及检测成分(R,S)-告依春含量。结果表明,不同栽培方式对菘蓝根长、根直径、单株根干重的累积动态、板蓝根产量和质量均具有显著影响。垄作覆黑膜栽培菘蓝根的快速生长持续期最长,根系最发达,根长、根直径和单株根干重均较高。板蓝根产量以垄作覆黑膜栽培最高(4 514.4 kg·hm^(-2)),垄作覆白膜产量最低(3 116 kg·hm^(-2));(R,S)-告依春含量以垄作覆白膜最高(2.61 g·kg^(-1)),垄作不覆膜最低(1.37 g·kg^(-1))。在不同栽培方式下,菘蓝主根长、根直径和单株根干重生长随生长时间均呈现"S"型生长趋势,符合Logistic生长模型。河西走廊绿洲灌区菘蓝收获板蓝根适宜栽培方式为垄作覆黑膜栽培。

四倍体菘蓝毛状根的诱导及其植株再生

利用发根农杆菌A4和R1000感染四倍体菘蓝子叶,毛状根诱导频率和得根率分别达72.5%和27%以上。A4诱导四倍体菘蓝毛状根优于R1000,光照对毛状根的诱导起着重要作用,外源激素IAA能明显地促进毛状根的诱导作用。rolB、rolC基因的PCR分析表明,Ri质粒中的T-DNA片段已整合到毛状根细胞基因组中。毛状根能在不含激素的MS固体培养基上分化出不定芽,6-BA能促进毛状根不定芽的诱导;NAA促进不定芽生根,再生完整植株。

四倍体菘蓝毛状根的抗内毒素作用

目的 :从菘蓝的同源四倍体植物诱导出毛状根 ,并探讨用毛状根代替自然根作为药用的可能性。 方法 :利用发根农杆菌 A4菌株感染四倍体菘蓝 ,采用细菌内毒素检查法考察诱导所得毛状根的抗内毒素作用。结果 :A4菌株能诱导四倍体菘蓝产生毛状根 ,毛状根具有较强的抗内毒素作用。 结论 :发根农杆菌诱导四倍体植物产生的毛状根有可能成为传统中药材的一种代用品。

菘蓝叶片离体培养与试管无性系的建立

以菘蓝幼嫩叶片为外植体,研究了不同激素及其组合对菘蓝离体叶片的分化方向及不定芽诱导效率的影响,建立了菘蓝叶片高效不定芽发生、植株再生体系。结果表明,在MS基本培养基中单纯添加2,4-D,不能诱导离体叶片发生不定芽,只诱导愈伤组织发生。如果在MS基本培养基中加入2,4-D和6-BA,也无不定芽发生,而添加NAA和6-BA,可以诱导其发生不定芽。在激素组合为NAA 1.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L时,不定芽的诱导率达到95%,在单纯加入NAA1.0 mg/L的MS基本培养基上,菘蓝叶片也可以发生不定芽,不定芽诱导率为93%,且不定芽生长健壮,不易老化,经过一段时间的培养可以直接生根并移栽成活。

激素对菘蓝叶片组织培养的影响

[目的]为提高菘蓝的生产效率、降低其生产成本提供技术支持。[方法]以菘蓝无菌苗的叶片为外植体,利用正交设计研究6-BA和NAA对菘蓝叶片分化的影响。[结果]处理6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.6 mg/L和6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L的不定芽分化率均为93.75%,分化系数分别为40.0和38.75。NAA对叶片分化率的影响最大,其与6-BA的交互作用较强,6-BA的影响相对较小。菘蓝叶片分化的最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.6 mg/L。IBA和NAA对菘蓝试管苗生根均有一定的促进作用。单独使用0.1 mg/LNAA的生根率达97%以上且根的质量较好,而过高浓度抑制生根。IBA对菘蓝生根的促进作用不如NAA,生根率较低且根的质量较差。菘蓝生根的适宜培养基为MS+NAA 0.1 mg/L。[结论]该研究为菘蓝的组织培养和快速繁殖奠定了初步基础。