三种血清学方法和qPCR方法在鸡滑液囊支原体检测中的综合应用研究

为评价不同方法对鸡滑液囊支原体(MS)活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果,研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测,其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗(MS-H株),B、C鸡群不免疫MS疫苗。结果显示:三种血清学检测方法所测MS抗体阳性率趋势基本一致,HI抗体效价变化规律和ELISA抗体效价变化规律相似,但血清学方法相对于qPCR方法具有一定的滞后性,qPCR可以最早发现MS野毒感染,且在使用活疫苗免疫的情况下对疫苗和野毒进行鉴别检测。研究提示:在条件允许的情况下,qPCR可以作为MS首选的监测方法;当检测条件受限时,上述三种血清学方法同样也可以用于评估MS野毒感染状况,但对结果的判断受母源抗体水平、疫苗免疫状况、野毒感染时间等多重因素的影响,在结果判断时应进行综合分析。

鸡白痢沙门氏菌自制抗原的制备及检测效果评价

为了评价鸡白痢沙门氏菌自制抗原的检测效果,试验从通过特异性凝集试验和非特异性凝集试验筛选结果中随机选择1株鸡白痢沙门氏菌临床分离株SP-41,与鸡白痢沙门氏菌标准菌株CVCC1792按照1∶1比例混合,采用平板凝集试验和微量凝集试验两种方法分别制备染色抗原和凝集抗原,并以100份鸡血清样品为检测对象,比较了自制抗原、鸡白痢鸡伤寒多价染色平板凝集试验抗原(以下简称为商品染色抗原)的检测结果及其与D群沙门氏菌抗体ELISA试剂盒检测结果的一致性。结果表明:商品染色抗原、自制染色抗原、自制凝集抗原和D群沙门氏菌抗体ELISA试剂盒检测的阳性率分别为50%、78%、40%和72%。商品染色抗原Cohen’s kappa系数仅为0.08,提示一致性较差;自制染色抗原和自制凝集抗原的Cohen’s kappa系数为分别为0.363和0.375,一致性一般。自制染色抗原检测结果的阳性符合率最高,可达87.50%;而自制凝集抗原的阴性符合率更高,可达96.43%。说明试验成功制备了鸡白痢沙门氏菌染色抗原和凝集抗原;与商品染色抗原相比,自制抗原与D群沙门氏菌抗体ELISA试剂盒的检测结果一致性更高。

近5年白云鄂博矿区牛羊布鲁氏菌病流行状况分析

为了解近年白云鄂博矿区牛羊布鲁氏菌病(简称布病)流行状况,从而为家畜布病防控提供参考,将2018—2022采用虎红平板凝集试验(RBPT)对白云鄂博矿区牛羊血清检测的结果进行统计,分析布病流行状况。结果显示:2018—2022年白云鄂博矿区共检测养殖户38个,共检测血清5435份,检出(羊)阳性血清25份,平均个体阳性率为1.83%;其中阳性养殖户3家,场点平均阳性率为5.36%;各年份羊的个体阳性率分别为0、0、1.12%、0.71%、0,场点阳性率分别为0、0、16.67%、9.09%、0,2018、2019年阳性率为0,2020年突然增高,随后呈下降趋势;按照不同家畜种类统计,牛、羊的平均个体阳性率分别为0和0.36%。结论:白云鄂博矿区2018—2022年布病发病率处于比较低水平,平均个体阳性率仅为1.83%,表明白云鄂博矿区开展的布病防控和净化工作效果显著。研究还发现,母畜患病概率比公畜更大,布病发病时间多在7—8月,与布病常见的时间分布有所区别。

鸡志贺氏菌凝集抗原及其标准血清的研制

利用分离鉴定的鸡鲍氏和鸡痢疾志贺氏菌，分别经细菌培养、灭活、浓度调整等方法研制诊断用鸡志贺氏菌凝集抗原，并用鸡志贺氏菌疫苗免疫清洁级小白鼠研制鸡志贺氏菌标准血清。结果显示，制备细菌抗原的最佳培养基是1％葡萄糖营养琼脂，抗原最佳灭活温度和时间为121℃和120min，凝集抗原合适浓度为40亿／mL，最佳稀释液为pH7．2的0．5％石炭酸生理盐水。制备的鸡鲍氏和鸡痢疾志贺氏菌阳性血清经效价测定分别可达8log2和10log2，阴性血清与鸡志贺氏菌凝集抗原作用无凝集反应发生。通过研究同时确定了平板凝集试验反应的合适温度为20～35℃，结果判定时间为3～5min。研制的凝集抗原及其标准血清具有特异性强、稳定性好、使用方法简便、便于保存和检测结果准确可靠等优点，便于在基层生产单位推广应用。

应用平板凝集试验诊断雉鸡结核病的研究

本项研究应用平板凝集试验诊断雉鸡结核病。用禽型结核快速平板凝集反应抗原 ,检测雉鸡血清中的抗结核杆菌抗体。结果表明 ,本试验方法特异性强 ,敏感性高 ,检出率高 ,速度快 ,简便易行 ,适于现场大批检疫。从而解决了雉鸡结核活体不能诊断的难题 。

狐狸阴道加德纳氏菌病虎红平板凝集试验诊断方法研究

利用研制的虎红平板凝集抗原对狐狸阴道加德纳氏菌病进行血清抗体检测，试验表明，该抗原检出率为９２．２％，符合率为８５。１％，无交叉反应，重复性好。适用于狐狸阴道加德纳氏菌感染的确诊、流行病学调查、免疫水平监测、现场与口岸动检狐狸检疫。

川西北牦牛布鲁氏菌病血清流行病学调查

同时采用间接ELISA、虎红平板凝集试验和试管凝集试验三种血清学方法调查川西北牦牛布鲁氏菌病血清流行情况。对1070份采自川西北阿坝州8个草地县的牦牛血清样品经三种血清学方法检测,间接ELISA检测阳性率为25.4%(272/1070),虎红平板凝集试验检测阳性率为12.7%(136/1070),而试管凝集试验检测阳性率为9.1%(97/1070)。8个县均发现阳性布鲁氏菌病血清。与间接ELISA相比,虎红平板凝集试验的相对敏感性和特异性分别为50%和100%,而试管凝集试验的相对敏感性和特异性分别为35.7%和100%。布鲁氏菌病在川西北地区广泛存在,血清学方法是检测和监测布鲁氏菌病最常用和最简便的方法,其中间接ELISA方法最为敏感。

福建省某公猪站布氏杆菌病的诊断

为了解福建省某公猪站布氏杆菌病情况,采用平板凝集试验与试管凝集试验相结合的方法以及PCR诊断方法 ,对该站50头种公猪进行布氏杆菌病诊断。经平板凝集试验筛选,检出疑似阳性血清样本14份,经试管凝集试验复检,确诊阳性血清样本4份。为进一步确诊疑似病例,采用PCR诊断方法 ,在剩下的10份疑似阳性血清样本中确诊2份。

江西部分地区鸡白痢杆菌病的血清学调查

采用血清平板凝集试验方法对江西省部分地区不同类型、不同品种的鸡群进行了鸡白痢的血清流行病学调查。结果表明:在614份鸡血清样品中检出阳性194份,阳性率为32%;不同品种及类型的鸡感染率差异较大,最高达45%,最低为14%。鸡白痢杆菌病在江西部分地区鸡群中感染较普遍,阳性率很高,且流行呈现多样化。

布鲁杆菌病常规血清学与细菌学检测方法的临床应用比较

目的通过比较虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)、间接酶联免疫吸附试验(iELISA)的检测结果,并分别与血培养检测结果比较,分析这4种检测方法对布鲁杆菌病的诊断效率和价值。方法对2014年1月-2016年4月在我院门诊和住院治疗的布病患者以及健康体检者分别采用RBPT、SAT、iELISA和血培养检测,操作步骤按照试剂盒说明书和实验室标准操作规程进行。结果 142例患者标本,血培养检测均为阳性,健康对照组为全阴性;RBPT法检测139例阳性,3例阴性,健康对照组为全阴性;SAT法检测135例阳性,7例阴性,健康对照组为全阴性;iELISA法检测137例阳性,5例阴性,健康对照组为全阴性。3种血清学检测方法两两比较阳性检出率无显著差异(P>0.05);分别与血培养结果比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论为了降低布病漏检率,临床上可将多种检测方法相互结合。

后备种鸡血清中沙门氏菌病抗体的检测

采用全血平板凝集试验,对重庆市某种鸡场1113只3月龄后备种鸡进行鸡白痢抗体检测,结果:阳性率为10.3%,其中X品系种公鸡阳性率为3.6%、种母鸡阳性率为1.3%,Y品系种公鸡阳性率为17.6%、种母鸡阳性率为11.8%。试验说明该鸡场后备种鸡中沙门氏菌病感染严重;不同品系、不同性别后备种鸡感染程度差异较大。

白痢康复鸡种用及经济价值的评价

本文对某农场688只白痢康复鸡的种用及经济价值进行的评价结果为,日产蛋率比发病前正常水平降低了12.3％,蛋的受精率降低了5.1～8.1％,孵化率降低了18.9％;全血平板凝集试验、血清琼脂扩散及卵黄琼脂扩散反应的阳性率分别为92.5％、90.0％和84.0％。从这些康复鸡所产的鲜蛋,入孵后7日龄和21日龄的死胚以及后代死雏中均分离出鸡白痢沙门氏菌,检出率依次为8.0％(2/25)、16.6％(5/30)、53.3％(16/30)和77.7％(7/9)。为此,该鸡群显然不能留作种用,其继续喂养的经济价值亦低,建议于产蛋期后全部淘汰。

张家口市规模化奶牛场布鲁菌病血清学检测与分析

为了查清张家口市规模化奶牛场布鲁菌病流行动态,采用虎红平板凝集试验和试管凝集试验的方法对2 680头奶牛做了布鲁菌病血清学检测。结果表明,布鲁菌病血清阳性率为0.45%,已经出现零星感染。

某种鸡场鸡白痢抗体检测分析

采用全血平板凝集试验,对漯河市某种鸡场2317只3月龄后备种鸡进行鸡白痢抗体检测,结果:阳性率为10.3%,其中A品系种公鸡阳性率为3.4%、种母鸡阳性率为1.2%,B品系种公鸡阳性率为18.4%、种母鸡阳性率为11.4%。试验说明该鸡场后备种鸡中沙门氏菌病感染严重;不同品系、不同性别后备种鸡感染程度差异较大。

虎红平板凝集试验与试管凝集试验检测奶牛布鲁菌病的比较

布鲁菌病主要采用凝集试验来检测,本试验用虎红平板凝集试验和试管凝集试验对江苏海安、江都、无锡和兴化地区的660头奶牛的血清样品进行平行检测,虎红平板凝集试验的阳性检出率为9.7%,试验管凝集试验的阳性检出率为5.5%;与后者相比,虎红平板凝集试验的敏感性为100%,特异性为95.3%,符合率为95.6%。这些数据表明,江苏地区某些奶牛场存在布鲁菌感染,虎红平板凝集试验可以用于布鲁菌病初步检测。

两种诊断制品对临床样品中布鲁氏菌抗体的检测比较

本研究以国家标准《动物布鲁氏菌病诊断技术》(GB/T 18646-2018)中的试管凝集试验方法为确诊金标准,对353份临床牛、羊和猪血清样品进行确诊,然后分别采用虎红平板凝集试验抗原和抗体检测试纸条,对该353份临床血清进行检测,比较两种诊断制品在布鲁氏菌病初筛中的差异。经统计分析发现,虎红平板凝集试验抗原敏感性为100%(23/23),特异性为97.88%(323/330),与确诊结果间的Kappa值为0.86;布鲁氏菌抗体检测试纸条敏感性为100%(23/23),特异性为99.39%(328/330),与确诊结果间的Kappa值为0.95,两种方法的重复性试验结果均一致。试验结果证明,布鲁氏菌抗体检测试纸条和布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原都能满足布鲁氏菌病初筛的需求;由于布鲁氏菌抗体检测试纸条的储存、运输和操作的便捷性,在部分地区或特殊环境下可替代布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原用于布鲁氏菌病初筛。

两例小熊猫疑似布鲁菌感染的鉴别诊断

为了研究小熊猫这类野生动物是否存在布鲁菌感染,采用虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)及BCSP31-PCR对成都大熊猫繁育研究基地小熊猫保护研究中心产房饲养的小熊猫进行了布鲁菌病的血清学及分子生物学调查。结果表明:有2只小熊猫RBPT检测阳性,表示疑似布鲁菌感染,而进一步采用SAT及BCSP31-PCR诊断为阴性,排除了RBPT检测为阳性的2只小熊猫感染布鲁菌的可能性。说明RBPT存在假阳性结果,临床诊断此病时应结合分子生物学技术等进行鉴别诊断。

延边地区延边黄牛布鲁氏菌病的流行病学调查

[目的]为布鲁氏菌病的防制与治疗提供科学依据。[方法]通过虎红平板凝集试验对延边地区延边黄牛进行布鲁氏菌病检测。[结果]对采集到的304份牛血清进行检测,其中43份血清呈阳性,阳性率达14.47%。[结论]延边地区延边黄牛中布鲁氏菌病得到了较好控制。

2015～2016年新疆某地区牛羊布鲁氏菌病流行病学调查与分析

目的调查分析新疆某地区2015~2016年之间家畜牛和羊布鲁氏菌病的流行情况。方法本研究用虎红平板凝集实验方法对2015~2016年期间新疆某地区11个乡镇的牛和羊进行布鲁氏菌病血清学检测,其中牛血清2877份,羊血清8049份。结果 2015~2016年,该地区牛布鲁氏菌病总阳性检出率达1.39%(40/2877),羊布鲁氏菌病达0.40%(33/8049);散养户牛阳性率3.04%(26/856)、羊阳性率1.62%(19/1176),规模养殖场牛阳性率0.69%(14/2019)、羊阳性率0.20%(14/6873)。此外,该区2016年牛羊布鲁氏菌病总体流行情况均较2015年低,即2015年牛、羊布鲁氏菌病阳性检出率分别为1.66%(25/1508)和0.5%(21/4008),而2016年牛羊该病阳性检出率分别为1.09%(15/1369)和0.29%(12/4029)。结论 2015~2016年间新疆某地区牛羊群存在布鲁氏菌病疫情,但总体发展有所好转,呈下降趋势。

试管凝集试验与虎红平板凝集试验对布鲁氏杆菌病的诊断价值

目的研究试管凝集试验与虎红平板凝集试验对布鲁氏杆菌病的诊断价值。方法于2017年1月至2019年12月将清丰县疾病预防控制中心接受布鲁氏杆菌病筛查的120例疑似布鲁氏杆菌病患者纳入研究,对血液标本进行试管凝集试验、虎红平板凝集试验,比较试管凝集试验与虎红平板凝集试验的诊断结果。结果在布鲁氏杆菌病诊断中,参照布鲁氏杆菌病综合检测结果,虎红平板凝集试验的灵敏度、阴性预测值均高于试管凝集试验,而试管凝集试验的特异度、阳性预测值均高于虎红平板凝集试验(P<0.05),试管凝集试验与虎红平板凝集试验的准确度无显著差异(P>0.05)。试管凝集试验、虎红平板凝集试验诊断结果与布鲁氏杆菌病综合检测结果之间均呈高度一致(Kappa=0.807、0.823)。结论试管凝集试验、虎红平板凝集试验在布鲁氏杆菌病诊断中具有各自优势,临床诊断时可结合两种凝集试验方法进行综合诊断,以提高诊断的准确性。