基于HPLC-DAD-SPE-CryoNMR-MS技术的代谢物快速定性和结构确定(英文)

快速定性并有效地确定代谢物结构是代谢组学、植物化学和天然药物发现等研究的重要内容.本文以迷迭香的两种溶剂提取物(氯仿/甲醇=3/1和50%含水甲醇)作为模型样品,通过分析其中的一些化学成分,展现了HPLC-DAD-SPE-CryoNMR-MS无缝联仪技术在确定代谢物结构方面的应用潜力.基于高效液相色谱、紫外吸收、核磁共振波谱及质谱数据,具有代表性的6个迷迭香代谢物的结构得到了确定,它们分别为1个酚类二萜(鼠尾草酚)、2个酚酸(迷迭香酸和咖啡酸)、2个黄酮(6-甲氧基木樨草素-7-葡萄糖苷和高车前甙)和1个香豆酸(顺-4-香豆酸葡萄糖苷).该技术使分析型HPLC柱所分离的组分可以获得高质量同核及异核二维核磁共振波谱,从而能够更加便捷地确定微量成分的结构.这些研究结果不仅提供了上述6种代谢物详细的谱学数据,而且证实HPLC-DAD-SPE-CryoNMR-MS技术是天然产物以及其他复杂体系结构分析的重要工具,即使同一色谱峰中含有浓度相差一个数量级的多个代谢物时,该方法依然有效.

天然迷迭香抗氧化剂的研究进展

迷迭香 (RosmarinusofficinalisL .)是唇形科迷迭香属植物 ,我国南方地区已有大量种植。迷迭香精油是传统的天然香料。从提取精油后的残渣中提取得到的迷迭香提取物 ,具有良好的抗氧化性能 ,是一种天然抗氧化剂。本文综述了国内外迷迭香栽培、迷迭香提取物的主要化学成分和生产工艺及其作为抗氧化剂在油脂和食品中的应用等研究。同时展望了迷迭香提取物在其它领域 ,特别是在医药等领域中的应用前景。

迷迭香抗氧化剂和精油综合提取技术研究(Ⅰ)——两步提取法

极性溶剂和非极性溶剂的两步提取法是迷迭香抗氧化剂和精油综合提取的有效方法，操作简单，容易实施。迷迭香抗氧化剂和精油两步综合提取的合理条件为：粉碎的迷迭香叶子，极性溶剂95％乙醇，90℃提取3—4h，提取物再经非极性溶剂60—90℃石油醚提取。迷迭香精油的提取得率为1．50％，其成分分析显示为西班牙型；迷迭香抗氧化剂的提取得率为16．08％，活性炭脱色精制得率为85．00％，迷迭香抗氧化剂主要含有鼠尾草酸、鼠尾草酚和迷迭香酸等活性成分，它们的平均含量分别为17．78％、6．23％和3．37％。

迷迭香抗氧化剂和精油综合提取技术研究(Ⅲ)——超临界CO_2萃取法

超临界CO2萃取（SCDE）法是迷迭香抗氧化剂和精油综合提取的有效方法之一。迷迭香抗氧化剂和精油超临界CO2萃取的优选条件为：萃取时间4h，夹带剂95％乙醇与迷迭香叶子的质量比为2：5，萃取罐和分离器Ⅰ的温度分别为50和70℃，分离器Ⅱ的温度为40℃，萃取压力20MPa，分离压力为4～5MPa。迷迭香精油的平均得率为1．80％，迷迭香精油主要含有1，8-桉叶素、樟脑、α-松油醇、龙脑、马鞭草烯酮、4-松油醇、乙酸龙脑酯和芳樟醇等成分。迷迭香抗氧化剂的平均得率为11．93％，主要含有鼠尾草酸、鼠尾草酚和迷迭香酸等活性成分，其质量分数分别为23．61％、7．33％和5．13％。

迷迭香抗氧化剂和精油综合提取技术研究(Ⅱ)——一步提取法

极性和非极性混合溶剂一步提取法是迷迭香抗氧化剂和精油综合提取的有效方法，操作简单，容易实施。迷迭香抗氧化剂和精油一步综合提取的合理条件为：混合溶剂石油醚-乙醇-水的体积比80：15：5，其用量为迷迭香叶质量的10倍，80℃提取3h。迷迭香精油的得率在2％-3％，主要含有α-蒎烯、1，8-桉叶素、莰烯、樟脑、马鞭草烯酮、龙脑、4-松油醇、芋烯和乙酸龙脑酯等成分。迷迭香抗氧化剂的得率为16．98％，主要含有鼠尾草酸、鼠尾草酚和迷迭香酸等活性成分，其量分别为15．17％、2．51％和5．62％。

迷迭香叶片愈伤组织诱导及再分化培养

本研究以迷迭香叶片为外植体,探索愈伤组织形成及再分化条件。结果表明:蔗糖含量较高的培养基可促进愈伤组织形成,其中以MS+蔗糖50g/L+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L效果最好,诱导率可达88%;愈伤组织再分化形成不定芽时,以MS+6-BA1.5mg/L+KT0.5mg/L+NAA0.5mg/L效果较好,再分化率达50%;MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.5mg/L诱导不定芽增殖,增殖率可达到300%多;不定芽生根时,MS+NAA0.1mg/L效果较好,生根率可达65%。同时,研究发现,尽管外植体被消毒至无菌,但75%乙醇复合其它灭菌剂共同灭菌时,会导致外植体大量死亡。

迷迭香挥发油提取工艺优化及其化学成分分析

采用水蒸气蒸馏法提取迷迭香(Rosmarinus officinalis L.)挥发油,运用正交设计优化提取工艺。结果表明,迷迭香挥发油最佳提取工艺条件为迷迭香剪成1 cm长的小段、料水质量比1∶15、浸泡时间3 h、提取时间4 h,此条件下挥发油的得率为1.870%。运用GC-MS技术分析并比较了迷迭香鲜样和干样挥发油的化学成分,结果表明二者化学成分基本相同,药材阴干后挥发油品质没有受到明显影响。

山东迷迭香挥发油化学成分及抑菌活性研究

提取迷迭香挥发油并对其化学成分进行分析,测定挥发油的抑菌活性,对挥发油的主要成分进行理论计算。采用水蒸气蒸馏法提取迷迭香挥发油,用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对挥发油化学成分进行分离鉴定,采用琼脂扩散法测定迷迭香挥发油的抑菌活性,采用密度泛函理论B3LYP方法在6-311++G**基组水平上对挥发油的主要成分进行理论计算。从迷迭香挥发油共鉴定了28种化合物,且对金黄色葡萄球菌,大肠杆菌,枯草芽孢杆菌,乙型副伤寒沙门氏菌都有较强的抑菌效果,迷迭香桉叶油素环外的3个甲基及环中氧均是抑菌活性的中心。为迷迭香的进一步研究和开发应用提供了理论依据。

迷迭香组培快繁技术研究

以迷迭香茎段为外植体进行组织培养,结果表明:在M S+6 BA 4.0m g/L+NAA 0.1m g/L培养基上培养一周后,诱导出幼芽;M S+6 BA 3.0m g/L+KT 0.2m g/L+NAA 0.1m g/L培养基对丛生芽的增殖效果最好,增殖倍数达3.70;生根培养基选用1/2M S+NAA 0.5m g/L为最佳,生根率达86.7%。

迷迭香叶中鼠尾草酸超声波辅助提取的优化(英文)

利用超声波辅助提取法提取迷迭香中的主要生物活性成分鼠尾草酸,分别研究了不同条件对鼠尾草酸提取率的影响。对5.0 g粉碎后的迷迭香叶子进行超声波辅助提取的结果表明,室温较适宜的超声波提取条件是:乙醇质量分数75%、3 g盐酸为酸稳定剂、超声波频率28 kHz、超声波功率200 W、超声波提取时间40 min、料液比(g∶g)1∶16。在上述提取条件下,鼠尾草酸的得率可达18.64 mg/g。

迷迭香中天然防腐剂的提取方法及其抑菌作用研究

本文研究了迷迭香中天然防腐剂的提取方法和抑菌作用,结果表明,用食用乙醇提取迷迭香中防腐物质的最佳提取工艺参数为：固液比1：15、提取温度80℃、提取时间为15 h。迷迭香醇提取物对实验用常见食品污染菌有较强的抑制作用,对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的最低抑菌质量浓度（MIC）为6.25 g·L^-1,对大肠杆菌和汉逊氏酵母菌为12.5 g·L^-1,对青霉和黑曲霉为25 g·L^-1,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑菌活性pH范围均为4-7,对汉逊氏酵母菌、青霉和黑曲霉为4-6。

欧洲迷迭香的研究状况

综述了迷迭香在欧洲特别是英国、法国、德国、西班牙、意大利和瑞士等国的发展状况,内容涉及迷迭香的科研、标准、种植、加工、应用和贸易等方面情况。

迷迭香药材HPLC特征图谱分析研究

目的:建立迷迭香的指纹图谱分析方法,并比较迷迭香不同部位(茎、叶)的指纹图谱,为评价迷迭香药材质量提供参考。方法:采用HPLC法测定,色谱柱为Alltima C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸(梯度洗脱),流速1 m L·min-1,检测波长280 nm,柱温为25℃。采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004 A版),分析迷迭香药材指纹图谱的共有模式及样品的相似度。结果:建立了迷迭香药材HPLC指纹图谱共有模式,标定了9个共有峰。9批6个不同产地迷迭香的HPLC特征谱图相似度均在0.98以上。在不同时间对样品进行测定,各特征峰的保留时间的RSD小于0.02%,相对峰面积的RSD小于0.2%,结果表明供试品溶液在24 h内稳定。对3批迷迭香的茎叶进行特征图谱分析,均以叶的相似度为高,其相似度在0.98以上。结论:本研究发现,迷迭香茎叶所含成分基本相同,但叶中成分的量基本高于茎。所建立的方法经方法学验证,可为迷迭香药材的质量控制提供依据。