RP-HPLC法同时测定藏药肋柱花中三种成分的含量

建立了同时测定藏中当药黄素、当药醇苷、苦龙苷含量的方法。采用反相高效液相色谱法（RPHPLC）,以Kromasil-C18（250 mm×4.6 mm,5μm）为色谱柱,以甲醇（A）-0.04%磷酸溶液（B）为流动相,梯度洗脱,40%A（0 min）-63%A（20 min）;流速为0.8 m L/min;柱温为30℃,检测波长为254 nm。结果表明,在20 min内完成对3种成分的分析,各成分之间均达到基线分离。当药黄素、当药醇苷、苦龙苷的线性范围分别为：0.675 0~4.050 0μg（R2=0.999 5）、0.005 5~0.330 0μg（R2=0.999 5）、0.027 5~0.165 0μg（R2=0.999 5）,线性关系良好。平均加样回收率（n=9）分别为99.90%、99.15%、99.88%。建立的HPLC分析方法简单、准确,能快速测定藏药肋柱花中有效成分的含量。

地衣芽孢杆菌L-天冬酰胺酶Ⅰ 型的克隆表达及其在降低薯条中丙烯酰胺的应用

将L-天冬酰胺酶Ⅰ型酶基因克隆并实现其在大肠杆菌中表达。重组酶活力为(63.64±3.18)IU/mL,比活力为945.79 IU/mg,最适催化反应条件为45℃、pH 10.0。45℃处理12 h后,重组酶的相对酶活力仍大于90%。该酶无谷氨酰胺催化能力,具有23.38%的D-天冬酰胺活性,其对L-天冬酰胺的Km值为12.19 mmol/L,最大反应速率Vmax为2.69 IU/mL。此外,将L-天冬酰胺酶Ⅰ型应用于油炸薯条中,处理后的样品中丙烯酰胺含量降低58.39%。研究表明,地衣芽孢杆菌L-天冬酰胺酶Ⅰ型具有应用于食品加工工业的潜力。

L-半胱氨酸对油炸薯片中有害醛、晚期糖基化终产物的抑制作用及其品质的改善效果

采用不同质量浓度(1、3、5 mg/mL)的L-半胱氨酸(Cys)溶液浸泡鲜切马铃薯片后油炸,结果表明,添加Cys后可显著降低油炸薯片中乙二醛、丙酮醛、3-脱氧葡糖醛酮和5-羟甲基糠醛的含量,由二羰基化合物产生的晚期糖基化终产物也显著降低。同时发现,添加Cys后,油炸薯片中油脂的酸值、过氧化物值和羰基价也呈下降趋势。Cys还会影响油炸薯片的风味,其中挥发性醛类和醇类风味物质含量增加,但吡嗪类风味物质含量减少。由12名小组成员对不同Cys处理组的油炸薯片进行感官评定表明Cys溶液浸泡处理的油炸薯片的接受度高于非浸泡对照组。

蒙药肋柱花化学成分的分离与鉴定(2)

目的研究肋柱花[Lomatogonium rotatum(L.)Fries ex Nym]的化学成分。方法用硅胶、Seph-adex LH-20柱色谱等方法进行分离纯化,根据理化性质及光谱数据确定化合物的结构。结果分离得到8个化合物,分别鉴定为2α-羟基齐墩果酸(2α-hydroxyoleanolic acid,1)、乌苏酸3β-羟基-乌索-11,12-烯-28,13β内酯(11,12-dehydroursolic acid lactone,2)、阿魏酸(ferulic acid,3)、山奈酚(kaempferol,4)、木犀草素-7-O-葡萄糖苷(luteolin-7-O-glucoside,5)、芹菜素-7-O-葡萄糖苷(apige-nin-7-O-glucoside,6)、胡萝卜苷(daucosterol,7)、獐牙菜苦苷(swertiamarin,8)。结论化合物1-4、7为首次从肋柱花属中分离得到。

蒙药肋柱花化学成分的分离与鉴定

目的研究肋柱花(Lomatogonium rotatum(L.)Fries ex Nym.)的化学成分。方法用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱等方法进行分离纯化,根据理化性质及光谱数据确定化合物的结构。结果分离得到10个化合物,分别鉴定为1,8-二羟基-3,4,5-三甲氧基呫吨酮(1,8-dihydroxy-3,4,5-trimethoxyxanthone,1)、1-羟基-3,7,8-三甲氧基呫吨酮(1-hydroxy-3,7,8-trimethoxyxanthone,2)、8-羟基-1,3,5-三甲氧基呫吨酮(8-hydroxy-1,3,5-trimethoxyxanthone,3)、1-羟基-3,5,8-三甲氧基呫吨酮(1-hydroxy-3,5,8-trimethoxyxanthone,4)、红白金内酯(erythrocentaurin,5)、木犀草素(luteolin,6)、芹菜素(apigenin,7)、5,7,3′,4′,5′-五羟基黄酮(5,7,3′,4′,5′-pentahydroxyflaveone,8)、槲皮素(quercetin,9)、齐墩果酸(oleanolic acid,10)。结论化合物1～4、8、9为首次从肋柱花属中分离得到。

蒙药肋柱花总黄酮提取工艺研究

目的优化蒙药肋柱花中总黄酮提取工艺。方法首先单因素试验法考察肋柱花中总黄酮提取的主要影响因素,然后采用正交试验法,以肋柱花总黄酮含量为指标,优化肋柱花总黄酮最佳提取工艺。结果肋柱花总黄酮提取的最佳工艺为乙醇浓度60%,溶剂量150ml,提取时间8h。结论该方法工艺合理,稳定可行,为该药进一步研究奠定基础。

补骨脂不同炮制饮片炮制前后化学成分定性定量分析

为探讨补骨脂不同炮制方法下炮制前后化学成分的变化,采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UHPLC-Q-TOF-MS/MS),对补骨脂生品、清炒品及盐炙品进行化学成分分析,运用超高效液相色谱(UHPLC)对补骨脂中9个成分进行含量测定,结合统计学方法分析炮制前后含量变化。在定性分析中,共鉴定指认38个化合物,建立了补骨脂MS数据库,发现了5个成分存在于生品与清炒饮片,而盐炙品中未发现;在定量分析中,发现补骨脂生品与炮制品(盐炙和清炒)化学成分有显著性差异,并筛选出4个差异标志物(补骨脂酚、补骨脂素、补骨脂宁和新补骨脂异黄酮)。从整体来看,补骨脂生品与炮制品(盐炙和清炒)在化学成分轮廓上存在一定差异。由含量变化推测,在补骨脂的炮制过程中,补骨脂酚和补骨脂素、补骨脂宁和新补骨脂异黄酮可能存在转化。本实验结果与建立的补骨脂MS数据库可为补骨脂炮制机理进一步研究提供数据支撑。

牛繁缕的化学成分研究

目的研究牛繁缕Malachium aquaticum(L.)Fries的化学成分。方法采用硅胶柱、SephadexLH-20柱、RP-C18反相柱色谱分离纯化,通过理化常数测定和光谱分析鉴定化合物的结构。结果从牛繁缕中分得5个化合物。根据波谱分析和理化数据,鉴定这5个化合物分别为β-谷甾醇(-βsitosterol,MA1)、芹菜素(apigenin,MA2)、胡萝卜苷(daucosterol,MA3)、牡荆苷(vitexin,MA4)和6-C-β-D-葡萄糖-8-C-β-D-半乳糖芹菜素(6-C--βD-glu-8-C--βD-gal-apigenin,MA5)。结论化合物MA5为首次从该植物中分离得到。

四种地格达类蒙药材的鉴别研究

目的：比较四种地格达类蒙药材的品种质量差异.方法：以甲醇、乙醚、石油醚为系统溶剂,用超声提取制备供试液,对它们进行薄层色谱和紫外光谱分析,并对药材粉末进行红外光谱分析.结果：薄层色谱图中既有Rf值相同的斑点,又有Rf值不相同的斑点;紫外光吸收带形基本不一致,而且相对吸收度不同;红外光谱由于在4 000-2 000 cm^-1区域的噪音比较大,故取2 000-500 cm-1区域进行比较.结果,红外光谱吸收度和吸收峰位差别明显.结论：可以根据薄层色谱、紫外光谱和红外光谱的分析结果,对四种地格达类蒙药材能准确地进行鉴别.

不同炮制方法对黄药子抗胃癌作用及其肝毒性的影响

目的评价不同炮制方法对黄药子抗胃癌作用及其肝毒性的影响。方法80只小鼠随机分为空白对照(Ct)组、黄药子生品(RD)组、清炒黄药子(FD)组、酒炙黄药子(WD)组、当归煎汤炙黄药子(2∶1)(ASR2∶1DB)组、黄芪煎汤炙黄药子(1∶2)(AR1∶2DB)组、黄芪煎汤炙黄药子(1∶1)(AR1∶1DB)组、黄芪煎汤炙黄药子(2∶1)(AR2∶1DB)组,每组各10只,各组均以1.7g·kg^(-1)剂量灌胃给予对应炮制药物,连续14d,Ct组给予等量生理盐水。观察和比较各组肝脏病理形态学变化。体外培养人胃癌细胞MKN-45,以各组含药血清处理,CCK-8法检测细胞增殖情况。结果病理形态学变化表明各炮制组均造成了不同程度的肝脏损伤,各给药组肝脏病变损害程度按由轻到重依次为AR2∶1DB、ASR2∶1DB、AR1∶1DB、AR1∶2DB、FD、WD、RD组,以RD组损害最为严重;CCK-8实验结果表明AR1∶1DB、AR2∶1DB、ASR2∶1DB组可不同程度抑制人胃癌细胞MKN-45增殖(P<0.05),以AR2∶1DB组作用最强(P<0.001)。FD、WD、AR1∶2DB组间人胃癌细胞MKN-45增殖抑制作用无统计学差异;结论黄芪煎汤炙黄药子炮制法可增强黄药子体外抗胃癌活性并减少其对肝脏的损害,药效有剂量依赖性,随着黄芪在药对中所占的比重增大而增强,以2∶1组效果最佳,其机制可能与增强抗氧化及清除自由基作用有关。

蒙药肋柱花氯仿提取物的化学成分研究

目的:研究肋柱花[Lomatogonium rotatum(L.)Fries exNym]氯仿提取物的化学成分。方法:利用硅胶柱色谱、Seph-adex LH-20柱色谱和HPLC等方法进行分离纯化,根据理化性质及光谱数据确定化合物的结构。结果:分离得到4个化合物,分别鉴定为1erythrocentaurin;21-羟基-3,7,8-三甲氧基口山酮;38-羟基-1,3,5-三甲基口山酮;41-羟基-3,5,8-三甲氧基口山酮。

Box-Behnken响应面法优选枳壳饮片炮制工艺研究

目的:优选枳壳饮片的最佳炮制工艺。方法:以黄酮类成分芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量及总评"归一值"(OD值)为评价指标,采用Box-Behnken响应面法对润透温度、润透时间、干燥温度、干燥时间进行考察,建立枳壳饮片炮制工艺流程标准。结果:最佳炮制工艺为润透温度56℃,润透时间20min,干燥温度49℃,干燥时间4h,筛去瓤核及碎屑。结论:优选的炮制工艺切实可行。

三种保健野菜的营养成分测定

以牛繁缕、苣荬菜、猪毛菜为试材,测定了3种野菜中的Ca、Mg、Cu、Zn、Fe、Mn 6种微量元素和氨基酸含量。结果表明:3种野菜中含有丰富的人体必需微量元素和至少17种氨基酸,除色氨酸外,必需氨基种类齐全,是药食兼用的"绿色保健食品"。

蜜煎菖蒲方中挥发油成分分析

目的采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)的方法检测分析,对比蜜煎菖蒲方与未炮制品中所含挥发油成分的异同。方法采用特色炮制方法对石菖蒲、红花进行炮制后,用水蒸气蒸馏法分别提取炮制后和未炮制生品中挥发油成分,用气相色谱-质谱联用(GC-MS)的方法,分别测定蜜煎菖蒲方和未炮制品挥发油成分。结果未炮制品以萜类成分多见,尤其是单萜类,尚含有小分子脂肪族化合物和小分子芳香族化合物;蜜煎菖蒲方中挥发油成分仍以萜类成分多见,小分子脂肪族化合物数量增多,出现少部分甾体类化合物。结论蜜煎菖蒲方与未炮制品中所含挥发油成分,为进一步研究蜜煎菖蒲方的药效物质基础提供依据。

不同基原紫苏子及炮制品的化学成分差异性研究

目的建立紫苏子UPLC特征图谱,分析紫苏子、白苏子及炒紫苏子化学成分的差异性。方法采用Agilent SB C18(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱;以乙腈为流动相A,0.1%甲酸溶液为流动相B,梯度洗脱;流速为0.3 mL/min;检测波长为330 nm;柱温为30℃;进样量为2μL。结果运用所建立的方法对紫苏子、白苏子及炒紫苏子12个特征峰的相对峰面积进行对比分析,采用单因素方差分析,得出特征图谱中差异性显著的8个特征峰。结论紫苏子、炒紫苏子及白苏子3者之间的特征图谱存在显著差异,为不同基原紫苏子及炮制品的鉴别提供依据。

基于高光谱图像技术的油炸薯片中羧甲基赖氨酸含量检测

为探究羧甲基赖氨酸[N^(ε)-(1-carboxymethyl)-L-lysine,CML]含量的快速无损检测方法,该文采用高光谱图像技术对8种自制油炸薯片进行检测研究,提取每个高光谱图像的平均光谱值作为特征参量,同时结合液相色谱-质谱法测定CML含量,探寻预测其含量最适宜的光谱预处理和建模方法。首先将高光谱图像进行黑白校正,再选用标准正态变量变换光谱预处理方法,以消除固体颗粒、散射以及光程变化对光谱的影响。然后筛选出第200个到1 000个波段图像的平均光谱反射值,建立主成分回归、偏最小二乘回归和BP神经网络3种预测模型。对比结果表明:BP神经网络可以预测油炸薯片中CML含量,预测正确率为99.67%,决定系数为0.99,均方根误差为0.22。同时,为验证模型的稳健性,随机选取5组训练集和预测集代入相同参数的模型进行预测。结果显示:预测正确率平均值为96.23%,决定系数平均值为0.99,均方根误差平均值为0.22。这说明高光谱图像技术结合BP神经网络快速预测油炸薯片中CML含量具有可行性。

白果仁及炒白果仁内源性有害成分分析

以白果仁、炒白果仁为试验材料,采用HPLC法测定总银杏酸,色谱柱为YMC-Triart C18(4.6mm×150mm,5μm),流动相为0.1%三氟乙酸的乙腈溶液-0.1%三氟乙酸的水溶液,检测波长为310nm,流速为1.0mL/min;采用HPLC法测定4′-O-甲基吡哆醇(MPN)和4′-O-甲氧基吡哆醇-5′-葡萄糖苷(MPNG),色谱柱为YMC-Triart C18(4.6mm×150mm,5μm),流动相为甲醇-去离子水,检测波长为328nm,流速为1.0mL/min。采用顶空气相色谱(HS-GC)法对氢氰酸进行限度检查。结果表明,总银杏酸的平均回收率为101.17%、RSD为4.57%(n=6)、定量限为12.18ng、检测限为4.87ng;MPN平均回收率为103.14%、RSD为4.80%(n=6)、定量限为5.94ng、检测限为2.38ng;MPNG平均回收率为103.54%、RSD为3.05%(n=6)、定量限为11.20ng、检测限为4.48ng;氢氰酸定量限为10ng、检测限为3.5ng。建立的方法专属性强、重复性好,灵敏度高,可用于白果仁、炒白果仁中内源性有害成分的检测。

HPLC双波长法同时测定2种枳术丸中8种有效成分的含量

目的:建立HPLC双波长法同时测定酸橙枳术丸和甜橙枳术丸中多成分的含量,为质量评价提供依据。方法:采用Agilent XDB-C(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以0.01%磷酸二氢钠水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0~5 min,5%B;5~7 min,5%B→10%B;7~10 min,10%B→16%B;10~25 min,16%B→18%B;25~42 min,18%B→35%B;42~55 min,35%B→58%B;55~65 min,58%B;65~75 min,58%B→100%B;75~85 min,100%B),流速1mL·min^(-1),柱温30℃,检测波长283nm测定芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和白术内酯Ⅰ含量,220 nm测定白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ和苍术酮含量。结果:苍术酮不稳定,制备的供试品溶液应避光放置,并在制备后6h内完成检测;各成分在一定范围内线性关系良好;平均回收率介于99.14%~102.6%,RSD均小于3%。酸橙枳术丸中检测到8种待测成分,而甜橙枳术丸中没有检测到柚皮苷与新橙皮苷。结论:经方法学验证,本方法可为枳术丸质量控制提供依据。

蒙药肋柱花HPLC指纹图谱的研究

目的采用HPLC对15批不同采集地的蒙药肋柱花药材进行指纹图谱研究,并采用相似度评价蒙药肋柱花药材的质量。方法采用HPLC进行测定,色谱柱为YMC C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.4%磷酸水-甲醇,梯度洗脱,体积流量0.8 m L/min,检测波长254 nm,柱温30℃。运用色谱软件对指纹图谱进行相似度评价。结果建立了蒙药肋柱花药材的HPLC指纹图谱,确定了15个共有峰,指认了5个共有峰,15批次肋柱花药材与生成对照指纹图谱的相似度在0.881~0.997。结论首次建立肋柱花药材的HPLC特征指纹图谱,所建立的指纹图谱测定方法精密度、稳定性和重复性良好。

炮制增强黄药子止咳功效并降低其毒性的研究

目的考察炮制对黄药子止咳功效及其肝毒性的影响。方法黄药子生品(RD)及其炮制品清炒黄药子(FD)、酒炙黄药子(WD)、甘草煎汤炙黄药子(LD)、当归煎汤炙黄药子(AD)均以1.7 g·kg^-1剂量连续灌服小鼠7 d后,通过浓氨水致咳试验观测分析评价炮制对黄药子止咳功效的影响,进一步通过对氨水致咳小鼠血清生化指标、以及肝脏脂质过氧化和抗氧化相关指标的检测分析,评价炮制对黄药子的减毒作用及其初步作用机制。结果与RD组比较,LD、AD使浓氨水致咳小鼠有更长的咳嗽潜伏期(P<0.05或P<0.01)和更少的咳嗽次数(P<0.05或P<0.01),血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),肝组织丙二醛(MDA)水平显著降低、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽-S转移酶(GST)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)水平均显著被逆转(P<0.05或P<0.01),而血清和肝组织各项指标此两组之间互相比较均无明显差异(P>0.05)。与AD组比较,LD组有更多的咳嗽次数(P<0.05),FD、WD使浓氨水致咳小鼠有更短的咳嗽潜伏期(P<0.05或P<0.01)和更多的咳嗽次数(P<0.05或P<0.01),对血清AST和ALT、肝组织MDA、T-SOD、CAT、GSH、GPx均无显著逆转作用(P>0.05),而WD干预后仅对肝过低的GST水平有显著逆转作用(P<0.05或P<0.01),FD干预后对肝过低的GST水平没有显著逆转作用(P>0.05)。结论当归煎汤炙和甘草煎汤炙这2种炮制均增强了黄药子的止咳功效并降低了其肝毒性,其减毒机制可能与抑制肝脂质过氧化并增强抗氧化水平有关;而清炒和酒炙这两种炮制对黄药子的止咳功效仅有存效作用,但无增效也无增毒还无减毒作用。