猪RPL36A基因对PK15细胞增殖过程的影响

【目的】探究核糖体蛋白L36A(ribosomal protein L36A,RPL36A)基因对PK15细胞增殖过程的影响,为解析马身猪和大白猪生长速度差异的生理机制奠定基础。【方法】采用脂质体法将RPL 36 A基因干扰和过表达载体转染至PK15细胞中,通过实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测RPL 36 A基因表达效率及细胞增殖标志基因(PCNA、Ki67、Cyclin B、CDK4)的表达变化,并通过划痕试验、CCK-8和EdU法检测细胞增殖情况。【结果】过表达RPL 36 A基因后,PK15细胞中PCNA、Ki 67、CDK 4基因mRNA表达量均极显著升高(P<0.01),Cyclin B基因mRNA表达量显著升高(P<0.05);PCNA蛋白表达量显著升高(P<0.05);PK15细胞在48 h的细胞数量极显著高于空载组(P<0.01),细胞增殖速度升高;阳性细胞数极显著升高(P<0.01)。干扰RPL 36 A基因后,PK15细胞中PCNA、Cyclin B基因mRNA表达量均极显著降低(P<0.01),Ki 67、CDK 4基因mRNA表达量均显著降低(P<0.05);PCNA蛋白表达量显著降低(P<0.05);PK15细胞在48 h的细胞数量显著低于对照组(P<0.05),细胞增殖速度降低;阳性细胞数极显著降低(P<0.01)。【结论】在PK15细胞中过表达和干扰RPL 36 A基因后,细胞增殖关键基因PCNA、Ki 67、Cyclin B、CDK 4的表达量及48 h的细胞数量和阳性细胞数均有显著变化,RPL 36 A基因可影响PK15细胞的增殖过程。

叶绿体基因infA-rpl36区域在小麦族物种中的序列变异分析

利用小麦叶绿体基因组中infA-rpl36区域的序列设计引物,对小麦族(Triticeae)的12个二倍体和多倍体的物种进行了PCR扩增和序列测定,获得了长度为584～603bp的12条DNA序列。序列分析表明,供试物种在infA-rpl36基因间隔区的核苷酸变异明显高于基因编码区。基因编码区核苷酸序列同源性高达97%,表明了目标片段具有高度的保守性。但在5个物种的infA编码区出现了较大的插入、缺失突变,导致推导的氨基酸序列也发生了很大的变化,证实了infA基因是叶绿体基因组中最活跃的基因之一,而rpl36基因的变异较小,说明不同叶绿体基因的进化速度是不同的。基于测定序列建立的种系树分析发现,多倍体物种中间偃麦草(Thinopyrumintermedium)具有多种不同的细胞质起源,与核基因组一样在进化上较为复杂。

基于rpL36-rpS8序列的石蒜属植物亲缘关系研究

采用试剂盒提取总DNA、PCR产物直接测序法测定了石蒜属12种、1变种和外类群水仙属中国水仙的rpL36-rpS8序列。序列分析结果表明:石蒜属rpL36-rpS8长约515 bp,排序且两端切平后为523 bp,当空位始终作为缺失处理时,变异位点7个,其中信息位点4个,占序列总长度的0.78%;种间碱基差异百分率为0.3%,其中转换率为0.2%,颠换率为0.1%;序列的G+C含量为36.1%。利用UPGMA法基于rpL36-rpS8序列构建了石蒜属植物的种间关系发育树,结果,安徽石蒜、长筒石蒜、稻草石蒜、江苏石蒜、乳白石蒜和换锦花首先聚为一支,中国石蒜和玫瑰石蒜聚为第二支,二者组成了第I类,并获得了67%的支持率;第II类由夏水仙和长筒石蒜的变种黄长筒石蒜组成,靴带支持率为54%;第III类由香石蒜和石蒜组成,获得了90%的靴带支持率;忽地笑则自成单系。本研究结果与前人matK、atpB-rbcL和trnL-F的结果基本吻合。同时还证实,rpL36-rpS8是研究石蒜属种间鉴别和亲缘关系较合适的片段。

安康七里香蔷薇rpl36-rps8基因序列分析

研究安康地区七里香蔷薇(Rosa banksiae var.normalis)和蔷薇科其他植物间的亲缘关系,选择安康地区七里香蔷薇,对其叶绿体rpl36-rps8序列进行扩增、测序,与Gen Bank中其他薇科植物的rpl36-rps8序列同源性进行对比分析,利用系统发育分析软件MEGA6,运用邻接法(Neighbor Joining)建构了系统发育树。结果表明,七里香蔷薇与蔷薇属的大花香水月季同源性很高。

核糖体蛋白RPL36A siRNA对U937细胞的促增殖、抑凋亡作用

本研究探讨RPL36A基因在急性髓系白血病(AML)病人的表达情况及可能的作用机制。应用RT-PCR检测急性髓系白血病细胞、正常人单个核细胞、U937细胞中RPL36A基因的表达情况;RPL36A siRNA经脂质体介导转入U937细胞,采用MTT法及DNA倍体分析检测细胞增殖,AO/EB、TUNEL、Annexin V/FITV检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blot检测RPL36A基因及蛋白表达水平的变化。结果表明:RPL36A在初治AML细胞和U937细胞中表达明显增高;MTT法及DNA倍体分析发现,U937细胞增殖受到抑制,细胞周期阻滞;AO/EB染色、TUNEL、Annexin V/FITV检测显示,转染RPL36A siRNA的细胞组凋亡率高于对照组;RPL36A siRNA作用可引起U937细胞的RPL36A的mRNA水平的降低和蛋白表达量的下降,且呈时间依赖性(r分别为0.9813和0.9537)。结论:AML细胞高表达RPL36A基因,RPL36A基因的高表达可能促进AML细胞的过度增殖并抑制其凋亡。

基于lncRNA/mRNA表达谱探讨百事乐胶囊调控慢性应激抑郁症模型大鼠海马损伤的机制

目的基于长链非编码RNA(lncRNA)/信使RNA(mRNA)表达谱探讨百事乐胶囊(贯叶金丝桃、人参、姜黄)调控慢性应激抑郁症模型大鼠海马损伤的可能机制。方法将SD大鼠随机分为空白组、模型组及百事乐胶囊高、低剂量组(2.88、0.72 g·kg^(-1)),每组8只;采用28 d慢性温和不可预测性应激联合孤养的方式构建抑郁症大鼠模型,造模同时灌胃给药,每日1次。采用开野试验和新奇摄食试验评价大鼠模型的抑郁样行为;采用ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的水平;采用高通量芯片测序筛选出组间差异的海马组织lncRNA/mRNA表达谱,预测差异表达的lncRNA靶基因,并取lncRNA、mRNA的差异共集基因;对差异共集基因进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析;采用Western Blot法验证差异性蛋白胰岛素生长因子2(Igf2)、核糖体蛋白L36(Rpl36)的表达情况。结果(1)与空白组比较,模型组大鼠4 min内的水平、垂直活动量均显著降低(P<0.01),摄食潜伏期显著延长(P<0.01),血清TNF-α、IL-6水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,百事乐胶囊高剂量组大鼠的水平、垂直活动量明显增加(P<0.05,P<0.01),摄食潜伏期显著缩短(P<0.01),血清TNF-α、IL-6水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。(2)模型组与空白组比较,差异共集基因有152个,其中上调100个,下调52个;百事乐胶囊高剂量组与模型组比较,差异共集基因有150个,其中上调88个,下调62个;百事乐胶囊低剂量组与模型组比较,差异共集基因有119个,其中上调58个,下调61个。Igf2、Rpl36为百事乐胶囊高剂量组的主要逆向调节基因。百事乐胶囊主要调控与生物学过程(突触化学传递)和细胞组分(细胞连接)密切相关的差异共集基因的表达,可能通过影响MAPK信号转导通路、胰岛素信号改善抑郁症模型大鼠的海马损伤。(3)与空白组比较,模型组大鼠海马组织Igf2、Rpl36蛋白表达显著下调(P<0.01)。与模型组比较,百事乐胶囊高剂量组大鼠海马组织Igf2、Rpl36蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论百事乐胶囊可能通过影响差异共集基因Igf2介导的MAPK信号途径和胰岛素信号途径,调控神经元的存活及突触可塑性,以及可能通过Rpl36减少神经元凋亡,从而发挥抗抑郁作用。

犬钩虫核糖体蛋白L36及S4A全长cDNA克隆与蛋白特性分析

目的克隆犬钩虫Ancylostoma caninum核糖体蛋白L36(AcaRPL36)及S4A(AcaRPS4A)全长cDNA序列,并对编码的蛋白特性进行分析,探讨它们在研究系统发育中的应用。方法运用3′RACE技术并结合RT-PCR技术先后分别从犬钩虫中克隆核糖体蛋白L36及S4A的部分序列,经拼接后获得全长cDNA序列。用BlastP搜索相似性序列及保守结构域,所获序列在GenBank中登记,并用Neighbor-Joining(NJ)法构建基于RPL36及RPS4氨基酸序列的系统发育树。结果AcaRPL36全长cDNA序列(GenBank登录号为EF490128)为390 bp,开放阅读框为315 bp,编码104个氨基酸组成的蛋白;AcaRPS4A全长cDNA序列(GenBank登录号为EF490129)为880 bp,开放阅读框为786bp,编码261个氨基酸组成的蛋白。RPL36及RPS4序列较保守,与Caenorhabditis elegans等的亲缘关系较近的生物,在系统发育树中的遗传距离也较近。结论首次获得犬钩虫RPL36及RPS4A,RPL36和RPS4可能作为分子指标应用于研究生物系统发育。