假单胞菌GP72 rpeB突变株的构建及其对吩嗪类抗生素合成的调控

【目的】绿针假单胞菌GP72是一株可生产吩嗪类抗生素吩嗪-1-羧酸(PCA)及2-羟基吩嗪(2-OH-PHZ)的生防假单胞菌。Rpe A/Rpe B双元调控系统是其双元调控系统中的一组,本文旨在研究这一系统中的应答调控子(RR)Rpe B对于PCA及2-OH-PHZ的生物合成影响。【方法】通过生物信息学分析获得了rpe A/rpe B双元调控系统的序列,并从GP72中扩增出rpe B基因,通过同源重组技术构建卡那霉素抗性片段插入突变rpe B的突变菌株GP72BN。利用发酵实验、rpe B基因回补实验及荧光定量PCR实验,验证rpe B对于吩嗪类抗生素合成及相关基因表达的调控作用。【结果】在KMB培养基中,rpe B突变株的PCA产量下降为野生型的49.5%,2-OH-PHZ产量下降为野生型的67.3%。rpe B基因的回补可以在一定程度上回复PCA及2-OH-PHZ的产量。荧光定量PCR实验结果表明,rpe B突变株中群体感应系统基因phz I/phz R及吩嗪合成基因簇基因phz E转录水平均显著下调,而PCA转化为2-OH-PHZ的修饰基因phz O转录水平变化不显著。【结论】Rpe B正调控PCA与2-OH-PHZ合成途径的表达。Rpe B很可能是通过调控群体感应基因phz I/phz R和phz基因簇的表达,从而影响PCA的合成,并间接调控其衍生物2-OH-PHZ的合成。