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维氏气单胞菌rpoN基因缺失株的构建及部分生物学特性分析
被引量:
1
1
作者
蔡金双
王冬雪
+3 位作者
单晓枫
康元环
张冬星
田佳鑫
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期753-762,共10页
为了研究rpoN基因对维氏气单胞菌致病性的影响,采用同源重组的方法构建该基因缺失株。以该菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增rpoN基因的上、下游同源臂;以上、下游同源臂胶回收产物为模板,P1-1/P2-2为引物进行重叠PCR扩增相应目的片段,从...
为了研究rpoN基因对维氏气单胞菌致病性的影响,采用同源重组的方法构建该基因缺失株。以该菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增rpoN基因的上、下游同源臂;以上、下游同源臂胶回收产物为模板,P1-1/P2-2为引物进行重叠PCR扩增相应目的片段,从而获得rpoN上下游同源臂连接片段;将获取的连接片段连接pRE112,将连接产物转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取重组质粒pRE112-rpoN,经同源重组和抗生素筛选获得维氏气单胞菌rpoN基因缺失株ΔrpoN。同时,依然利用重叠PCR将目的基因片段与启动子相连接,而后与质粒p BBR-MCS相连接,最后将重组质粒pBBR-MCS-rpoN转化至缺失株ΔrpoN中,构建互补株C-rpoN。PCR鉴定和测序结果显示,成功构建出维氏气单胞菌rpoN基因缺失株ΔrpoN和互补株C-rpoN。生物学特性分析试验结果表明rpoN的缺失导致维氏气单胞菌TH0426菌落形态改变、生物被膜形成能力下降、动物致病性减弱,鞭毛断裂,运动性丧失。本研究中成功构建了维氏气单胞菌TH0426株rpoN基因的缺失株ΔrpoN,为进一步研究维氏气单胞菌减毒疫苗和rpoN基因的功能奠定了基础。
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关键词
维氏气单胞菌
rpo
n
基因
基因敲除
生物学特性
原文传递
题名
维氏气单胞菌rpoN基因缺失株的构建及部分生物学特性分析
被引量:
1
1
作者
蔡金双
王冬雪
单晓枫
康元环
张冬星
田佳鑫
机构
吉林农业大学动物科学技术学院
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期753-762,共10页
基金
国家自然科学基金项目(31201927)
吉林省教育厅“十三五”科学技术项目(JJKH20180694KJ,JJKH20190910KJ)
+1 种基金
吉林省科技厅自然科学基金学科布局项目(20170101016JC)
吉林农业大学博士启动基金项目(201801)。
文摘
为了研究rpoN基因对维氏气单胞菌致病性的影响,采用同源重组的方法构建该基因缺失株。以该菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增rpoN基因的上、下游同源臂;以上、下游同源臂胶回收产物为模板,P1-1/P2-2为引物进行重叠PCR扩增相应目的片段,从而获得rpoN上下游同源臂连接片段;将获取的连接片段连接pRE112,将连接产物转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取重组质粒pRE112-rpoN,经同源重组和抗生素筛选获得维氏气单胞菌rpoN基因缺失株ΔrpoN。同时,依然利用重叠PCR将目的基因片段与启动子相连接,而后与质粒p BBR-MCS相连接,最后将重组质粒pBBR-MCS-rpoN转化至缺失株ΔrpoN中,构建互补株C-rpoN。PCR鉴定和测序结果显示,成功构建出维氏气单胞菌rpoN基因缺失株ΔrpoN和互补株C-rpoN。生物学特性分析试验结果表明rpoN的缺失导致维氏气单胞菌TH0426菌落形态改变、生物被膜形成能力下降、动物致病性减弱,鞭毛断裂,运动性丧失。本研究中成功构建了维氏气单胞菌TH0426株rpoN基因的缺失株ΔrpoN,为进一步研究维氏气单胞菌减毒疫苗和rpoN基因的功能奠定了基础。
关键词
维氏气单胞菌
rpo
n
基因
基因敲除
生物学特性
Keywords
Aeromo
n
as vero
n
ii
rpo n gene
gene
k
n
ock-out
biological characteristics
分类号
S852.615 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
维氏气单胞菌rpoN基因缺失株的构建及部分生物学特性分析
蔡金双
王冬雪
单晓枫
康元环
张冬星
田佳鑫
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2020
1
原文传递
已选择
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参考文献
引证文献
统计分析
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