ntPCR-RFLP检测HBV阿德福韦耐药变异-rtA181V变异

目的:建立一种简便、快速、实用的乙型肝炎病毒(HBV)阿德福韦(ADV)耐药变异- rtA181V变异的快速检测方法．方法:根据GenBank收录的HBV基因全序设计巢式PCR引物,使野生株(rt181 A)PCR产物中含有Blp Ⅰ酶切位点(5’GCTNAGC3’),而变异株(rt181V)无此限制性酶切位点．选取4份应用ADV治疗1 a以上出现HBV DNA反跳的临床耐药慢性乙型肝炎患者血清,经PCR扩增、Blp Ⅰ酶切、30 g／L琼脂糖凝胶电泳,进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析．并选择经该方法鉴定的野生株及变异株各一例进行 HBV RT区基因序列分析及对照质粒的构建．结果:自4份血清标本中检测到2例rtA181V变异．所建立的ntPCR—RFLP方法灵敏度高,可以检测到103 copies／L的HBV DNA;特异性强,其 RFLP分析结果与DNA测序结果一致．结论:应用ntPCR-RFLP方法检测rtA181V 变异具有灵敏、特异、简便的优点,适用于 ADV耐药变异的临床监测工作．

替诺福韦对比恩替卡韦联合阿德福韦酯治疗rtA181V/T变异慢性乙型肝炎患者临床观察

目的评价替诺福韦(Tenofovir,TDF)和恩替卡韦(Entecavir,ETV)联合阿德福韦酯(Adefovir,ADV)治疗rtA181V/T单位点变异慢性乙型肝炎患者的疗效对比。方法32例rtA181V/T单位点变异慢性乙型肝炎患者分为TDF组(17例,300 mg,1次/d)和治疗后48周HBV DNA载量、ETV+ADV组(15例ETV:0.5 mg 1次/d,ADV:10 mg,1次/d),监测抗病毒ALT值及HBeAg定性指标。结果发现两者挽救治疗后无论在降低HBV-DNA载量幅度、改善ALT水平、提高HBeAg转阴率及HBeAg血清学转换率方面均无显著差异。结论TDF及ETV+ADV在挽救治疗rtA181V/T单位点变异慢性乙型肝炎患者疗效相当。

阿德福韦酯分别联合恩替卡韦或替诺福韦治疗rtA181V/T单位点突变的慢性乙型肝炎患者疗效初步研究

目的研究应用阿德福韦酯(ADV)分别联合替诺福韦(TDF)或恩替卡韦(ETV)治疗rtA181V/T单位点突变的慢性乙型肝炎(CHB)患者的疗效。方法2017年1月~2020年1月我院感染病科收治的50例rtA181V/T单位点突变的CHB患者被随机分为ADV联合TDF治疗25例和ADV联合ETV治疗25例,治疗观察48 w。采用实时荧光定量PCR法检测血清HBV DNA载量,使用全自动生化分析仪检测血生化指标,包括β2-微球蛋白(β2-MG)和视黄醇结合蛋白(RBP),并计算估算的肾小球滤过率(eGFR)和内生肌酐清除率(Crcl),采用ELISA法检测血清HBsAg和HBeAg,使用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群。结果在治疗24 w和48 w,ADV联合TDF治疗组血清HBV DNA转阴率分别为100.0%和100.0%,与ADV联合ETV治疗组(分别为96.0%和96.0%)比,无显著性差异(P>0.05);血清AST水平分别为(49.2±5.5)U/L和(30.4±4.0)U/L,显著低于ADV联合ETV治疗组【分别为(55.3±7.0)U/L和(43.2±6.8)U/L,P<0.05】,血清ALT水平分别为(40.3±6.1)U/L和(39.1±4.3)U/L,显著低于ADV联合ETV治疗组【分别为(65.1±7.5)U/L和(45.3±6.1)U/L,P<0.05】,血清HBV DNA水平分别为(0.8±0.2)lg IU/mL和(2.0±0.4)lg IU/mL,显著低于ADV联合ETV治疗组【分别为(2.9±0.3)lg IU/mL和(1.2±0.2)lg IU/mL,P<0.05】;外周血CD4^(+)细胞百分比分别为(45.2±3.6)%和(48.3±4.2)%,CD4^(+)/CD8^(+)细胞比值分别为(1.4±0.2)和(1.8±0.1),显著高于ADV联合ETV治疗组【分别为(42.4±3.1)%和(45.0±3.2)%,和(1.2±0.1)和(1.5±0.1),P<0.05】;在观察期内,两组肾功能指标无显著性变化。结论应用ADV联合TDF治疗rtA181V/T单位点突变的CHB患者近期效果较好,能够快速抑制病毒复制,稳定肝功能,对肾功能影响较小。

阿德福韦酯耐药的慢性乙型肝炎患者临床特征分析

研究慢性乙型肝炎(hepatitis B virus,HBV)病人对阿德福韦酯(ADV)耐药后发生不同位点变异后临床特征的改变。方法 对出现HBV rtA181T/V和rtN236T变异的慢性乙型肝炎患者的年龄、性别等基线资料和出现变异时患者血清中HBsAg、HBV DNA和ALT、HBeAg水平等进行统计学分析。同时调查所有患者的核苷类药品诊疗史。结果 单一rtA181T/V/N236T位点突变者49例(55.7%),rtA181T/V+rtN236T联合突变患者39例(44.3%),两组患者的临床基线资料没有显著差异,在发生变异时rtA181变异并不会引起HBsAg和HBV DNA水平的下降(P>0.05),也不会引起ALT水平升高(P>0.05),两组在HBeAg状态、合并其他位点变异等方面没有显著差异(P>0.05)。结论 单一rtA181T/V/N236T突变及rtA181T/V+rtN236T联合突变虽然潜在的分子机制不同,但两组患者的临床相关指标表达并无明显差异。