ntPCR-RFLP检测HBV阿德福韦耐药变异-rtA181V变异

目的:建立一种简便、快速、实用的乙型肝炎病毒(HBV)阿德福韦(ADV)耐药变异- rtA181V变异的快速检测方法．方法:根据GenBank收录的HBV基因全序设计巢式PCR引物,使野生株(rt181 A)PCR产物中含有Blp Ⅰ酶切位点(5’GCTNAGC3’),而变异株(rt181V)无此限制性酶切位点．选取4份应用ADV治疗1 a以上出现HBV DNA反跳的临床耐药慢性乙型肝炎患者血清,经PCR扩增、Blp Ⅰ酶切、30 g／L琼脂糖凝胶电泳,进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析．并选择经该方法鉴定的野生株及变异株各一例进行 HBV RT区基因序列分析及对照质粒的构建．结果:自4份血清标本中检测到2例rtA181V变异．所建立的ntPCR—RFLP方法灵敏度高,可以检测到103 copies／L的HBV DNA;特异性强,其 RFLP分析结果与DNA测序结果一致．结论:应用ntPCR-RFLP方法检测rtA181V 变异具有灵敏、特异、简便的优点,适用于 ADV耐药变异的临床监测工作．

替诺福韦对比恩替卡韦联合阿德福韦酯治疗rtA181V/T变异慢性乙型肝炎患者临床观察

目的评价替诺福韦(Tenofovir,TDF)和恩替卡韦(Entecavir,ETV)联合阿德福韦酯(Adefovir,ADV)治疗rtA181V/T单位点变异慢性乙型肝炎患者的疗效对比。方法32例rtA181V/T单位点变异慢性乙型肝炎患者分为TDF组(17例,300 mg,1次/d)和治疗后48周HBV DNA载量、ETV+ADV组(15例ETV:0.5 mg 1次/d,ADV:10 mg,1次/d),监测抗病毒ALT值及HBeAg定性指标。结果发现两者挽救治疗后无论在降低HBV-DNA载量幅度、改善ALT水平、提高HBeAg转阴率及HBeAg血清学转换率方面均无显著差异。结论TDF及ETV+ADV在挽救治疗rtA181V/T单位点变异慢性乙型肝炎患者疗效相当。

阿德福韦酯耐药的慢性乙型肝炎患者临床特征分析

研究慢性乙型肝炎(hepatitis B virus,HBV)病人对阿德福韦酯(ADV)耐药后发生不同位点变异后临床特征的改变。方法 对出现HBV rtA181T/V和rtN236T变异的慢性乙型肝炎患者的年龄、性别等基线资料和出现变异时患者血清中HBsAg、HBV DNA和ALT、HBeAg水平等进行统计学分析。同时调查所有患者的核苷类药品诊疗史。结果 单一rtA181T/V/N236T位点突变者49例(55.7%),rtA181T/V+rtN236T联合突变患者39例(44.3%),两组患者的临床基线资料没有显著差异,在发生变异时rtA181变异并不会引起HBsAg和HBV DNA水平的下降(P>0.05),也不会引起ALT水平升高(P>0.05),两组在HBeAg状态、合并其他位点变异等方面没有显著差异(P>0.05)。结论 单一rtA181T/V/N236T突变及rtA181T/V+rtN236T联合突变虽然潜在的分子机制不同,但两组患者的临床相关指标表达并无明显差异。