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橡胶树硫氧还蛋白基因HbTRXo2克隆、表达及功能分析
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作者 杨娜 吴双 +5 位作者 逯锐琳 何其光 胡义钰 朱春梅 王真辉 刘辉 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第10期1999-2009,共11页
硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)作为氧化还原调节蛋白在植物抵御非生物逆境胁迫中发挥重要作用。本研究采用RT-PCR从橡胶树(Heveabrasiliensis)中克隆了硫氧还蛋白基因HbTRXo2,该基因编码区长594bp,编码197个氨基酸。预测HbTRXo2蛋白的分... 硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)作为氧化还原调节蛋白在植物抵御非生物逆境胁迫中发挥重要作用。本研究采用RT-PCR从橡胶树(Heveabrasiliensis)中克隆了硫氧还蛋白基因HbTRXo2,该基因编码区长594bp,编码197个氨基酸。预测HbTRXo2蛋白的分子量为21.90 kDa,理论等电点为7.59。蛋白保守结构域和系统进化分析结果显示,HbTRXo2含有TRX保守结构域,与其他植物o型硫氧还蛋白聚在一起,表明该蛋白属于o型硫氧还蛋白。实时荧光定量PCR分析表明,HbTRXo2基因在橡胶树根、树皮、胶乳、成熟叶、衰老叶、新梢、雌花和雄花组织中均表达,其中在胶乳中的表达量显著高于其他组织。同健康橡胶树相比,割面干涸橡胶树树皮和胶乳中HbTRXo2的表达量显著降低。在低温、聚乙二醇(PEG)诱导的干旱以及过氧化氢(H_(2)O_(2))和甲基紫精(MV)诱导的氧化胁迫处理下,HbTRXo2基因的表达显著上调,表明该基因参与了橡胶树对非生物胁迫的应答。为了研究HbTRXo2在抗逆中的功能,本研究构建其酵母表达载体,并转入酿酒酵母INVSc1菌株中,获得重组酵母INVSc1(pYES2-HbTRXo2)。比较重组酵母INVSc1(pYES2-HbTRXo2)和转空载体对照酵母INVSc1(pYES2)在H_(2)O_(2)、PEG和低温胁迫处理后的存活差异。结果显示,重组酵母INVSc1(pYES2-HbTRXo2)在PEG和H_(2)O_(2)处理后的存活率明显高于对照酵母,而在低温胁迫处理后的存活率明显低于对照酵母,表明转HbTRXo2基因提高了重组酵母对干旱和氧化胁迫的抗性,但降低了对低温胁迫的抗性。以上研究结果证明,HbTRXo2在橡胶树产排胶和抗逆过程中起着重要作用。本研究为进一步解析HbTRXo2在橡胶树中的生物学功能提供重要的参考依据。 展开更多
关键词 硫氧还蛋白 橡胶树 基因表达 酵母表达 抗氧化性 非生物逆境胁迫
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牡丹PsMADS5基因的克隆、表达及载体构建 被引量:12
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作者 任磊 王雁 +1 位作者 周琳 彭镇华 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期939-944,共6页
以牡丹品种赵粉(Paeonia suffruticosa L.cv.Zhao Fen)为试材,采用RT-PCR和RACE法从花瓣中获得了1个牡丹SEPALLATA基因cDNA,命名为PsMADS5,GenBank登录号为HQ449569。其cDNA全长1222bp,包含190bp的5'非编码区、302bp的3'非编码... 以牡丹品种赵粉(Paeonia suffruticosa L.cv.Zhao Fen)为试材,采用RT-PCR和RACE法从花瓣中获得了1个牡丹SEPALLATA基因cDNA,命名为PsMADS5,GenBank登录号为HQ449569。其cDNA全长1222bp,包含190bp的5'非编码区、302bp的3'非编码区和1个长度为732bp编码243个氨基酸的开放阅读框。序列比对和系统进化分析表明,PsMADS5与葡萄的亲缘关系最近,相似性达83%以上,属于MADS家族SEP亚家族。相对荧光定量PCR分析表明,PsMADS5在花瓣中的表达量最高,其次是心皮,再次是萼片,在雄蕊中表达量最低。成功构建正义和反义表达载体,为牡丹花型改良和品种创新提供基础。 展开更多
关键词 牡丹 基因克隆 表达 载体构建
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牡丹PsAP2基因的克隆及表达 被引量:6
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作者 任磊 王雁 +1 位作者 周琳 彭镇华 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第9期50-56,共7页
以牡丹品种‘赵粉’为试材,采用RT-PCR和RACE方法从花瓣中获得1个牡丹APETALA2基因cDNA全长,命名为PsAP2,GenBank登录号为HM167511。序列分析结果表明:PsAP2全长2138bp,包含47bp的5'非编码区、557bp的3'非编码区和1个长度为153... 以牡丹品种‘赵粉’为试材,采用RT-PCR和RACE方法从花瓣中获得1个牡丹APETALA2基因cDNA全长,命名为PsAP2,GenBank登录号为HM167511。序列分析结果表明:PsAP2全长2138bp,包含47bp的5'非编码区、557bp的3'非编码区和1个长度为1533bp编码510个氨基酸的开放阅读框。氨基酸序列分析显示该基因属于AP2家族。序列比对和系统进化分析表明,PsAP2与葡萄的亲缘关系最近,相似性达70%以上。相对荧光定量PCR分析表明,PsAP2在根、茎、叶和四轮花器官中均有表达。花瓣中的表达量最高,叶片中表达量最低。 展开更多
关键词 牡丹 APETALA2 基因克隆 表达分析
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牡丹开花相关基因PsAP1的克隆与表达 被引量:6
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作者 任磊 王雁 +1 位作者 周琳 彭镇华 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1719-1725,共7页
APETALA1基因对花器官的形成具有重要作用,并且能够调节花期.以牡丹品种赵粉(Paeoniasuffru-ticosaL.cv.Zhaofen)为试材,采用RT-PCR和RACE方法从花瓣中获得了1个牡丹APETALA1基因cDNA全长,命名为PsAP1,GenBank登录号为HM143943.其cDNA全... APETALA1基因对花器官的形成具有重要作用,并且能够调节花期.以牡丹品种赵粉(Paeoniasuffru-ticosaL.cv.Zhaofen)为试材,采用RT-PCR和RACE方法从花瓣中获得了1个牡丹APETALA1基因cDNA全长,命名为PsAP1,GenBank登录号为HM143943.其cDNA全长1103 bp,包含130 bp的5′非编码区、244 bp的3′非编码区和1个长度为729 bp编码242个氨基酸的开放阅读框.序列比对和系统进化分析表明,PsAP1与葡萄的亲缘关系最近,相似性达80%以上,属于MADS家族AP1/SQUA亚家族.相对荧光定量PCR分析表明,PsAP1在花瓣中的表达量最高,在雄蕊中表达量最低. 展开更多
关键词 牡丹 基因克隆 表达
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杉木纤维素合成酶基因CesA的克隆及表达分析 被引量:8
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作者 庞景 童再康 +2 位作者 黄华宏 林二培 刘琼瑶 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期40-46,共7页
通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)结合c DNA末端快速扩增(RACE)技术,从杉木Cunninghamia lanceolata中克隆到2个全长为3 235 bp和3 876 bp的纤维素合成酶基因c DNA序列,被分别命名为Cl Ces A1和Cl Ces A2,Gen Bank登录号分别为JQ84... 通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)结合c DNA末端快速扩增(RACE)技术,从杉木Cunninghamia lanceolata中克隆到2个全长为3 235 bp和3 876 bp的纤维素合成酶基因c DNA序列,被分别命名为Cl Ces A1和Cl Ces A2,Gen Bank登录号分别为JQ844574和JQ844575。相应编码蛋白分别包含992和1 092个氨基酸残基,推测分子量为111 845.3 D和123 105.7 D,等电点为6.04和6.65。氨基酸序列分析发现,它们具有植物纤维素合成酶基因相应的结构特征——锌指结构,2个易变区CSRI和CSRII,2个保守区CRI和CRII,纤维素合成酶底物结合结构域"D,D,D,QVLRW",以及8个跨膜区。荧光定量PCR分析表明:Cl Ces A1和Cl Ces A2基因在茎中表达丰度均为最高,且成熟木质部中表达量均高于皮层中的相应数值;2个基因在根和针叶中的表达量相对较低。以具特殊材质性状的矮生杉木和正常杉木木质部为材料的进一步表达分析发现:Cl Ces A1和Cl Ces A2在正常杉木木质部中的表达量大约是矮生杉木表达量的2~12倍。2个杉木Ces A基因可能在杉木木材形成过程中具有重要作用。 展开更多
关键词 林木育种学 杉木 CesA基因 基因克隆 序列分析 表达分析
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牛樟芝萜烯合成酶基因的克隆与鉴定 被引量:5
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作者 原晓龙 赵能 +4 位作者 陈剑 陈中华 王娟 杨宇明 王毅 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2398-2404,共7页
为了研究牛樟芝(Antrodia camphorata)倍半萜的生物合成,通过对牛樟芝基因组分析获得倍半萜类合成酶基因(AcTPS2),利用RT-PCR克隆获得其全长cDNA,对其进行生物信息学分析和表达谱分析。结果显示:AcTPS2基因cDNA全长1 068bp,Blast比对发... 为了研究牛樟芝(Antrodia camphorata)倍半萜的生物合成,通过对牛樟芝基因组分析获得倍半萜类合成酶基因(AcTPS2),利用RT-PCR克隆获得其全长cDNA,对其进行生物信息学分析和表达谱分析。结果显示:AcTPS2基因cDNA全长1 068bp,Blast比对发现,AcTPS2含倍半萜类合成酶所独具的富含天冬氨酸序列DXXXD及萜类合成酶特有的RRDTSG-LDL保守序列;系统进化分析显示,AcTPS2基因与其他真菌的倍半萜聚为一类;表达谱分析显示,以甘露糖作为碳源、以酪蛋白胨作为氮源能够有效促进AcTPS2基因的诱导表达。研究结果可为以后牛樟芝倍半萜类生物合成提供一定的参考依据。 展开更多
关键词 牛樟芝 倍半萜类合成酶 基因克隆 系统进化 诱导表达
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橡胶树皮乳管组织茉莉酸诱导相关因子AP2/EREBP基因的克隆与表达分析 被引量:4
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作者 吴华玲 于波 +4 位作者 程芹芹 曾日中 段翠芳 聂智毅 黎瑜 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第5期287-293,共7页
茉莉酸(jasmonic acid,JA)可诱导橡胶树(Hevea brasiliensis Muell.Arg.)乳管分化,是乳管分化的关键信号分子。目前,对JA诱导橡胶树乳管分化的分子机理仍然不清楚。在前期研究中通过筛选JA刺激乳管分化时期的橡胶树树皮组织cDNA差减文库... 茉莉酸(jasmonic acid,JA)可诱导橡胶树(Hevea brasiliensis Muell.Arg.)乳管分化,是乳管分化的关键信号分子。目前,对JA诱导橡胶树乳管分化的分子机理仍然不清楚。在前期研究中通过筛选JA刺激乳管分化时期的橡胶树树皮组织cDNA差减文库,获得了4条与茉莉酸诱导乳管分化相关的AP2/EREBP家族转录因子基因的EST。该研究在此基础上,采用RACE法完整地克隆了这4个AP2/EREBP转录因子基因的开放阅读框,蛋白氨基酸序列分析表明其中3个属于ERF亚类,1个属于RAV亚类;表达分析发现,这4个基因在乳管分化时期的橡胶树树皮组织的表达受JA诱导,随JA处理时间的延长,其表达量先增强后减弱,推测它们可能在JA诱导橡胶树乳管分化过程中起着重要的调控作用。 展开更多
关键词 巴西橡胶树 AP2/EREBP转录因子 基因克隆 基因表达 茉莉酸 乳管分化
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桑树橡胶延伸因子基因的克隆与表达分析 被引量:3
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作者 潘刚 韩舒睿 +5 位作者 沈智超 邸柄荣 孙银苹 赵卫国 楼程富 潘一乐 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期718-721,共4页
桑树乳汁在桑树的生长和防御过程中起重要作用,乳汁中的糖苷酶抑制剂还是治疗糖尿病的有效成分。通过桑树cDNA文库中的序列比对,发现一段与乳汁合成相关的基因片段,采用RACE方法获得该基因的全长序列,基因cDNA全长1 145 bp,编码区759 bp... 桑树乳汁在桑树的生长和防御过程中起重要作用,乳汁中的糖苷酶抑制剂还是治疗糖尿病的有效成分。通过桑树cDNA文库中的序列比对,发现一段与乳汁合成相关的基因片段,采用RACE方法获得该基因的全长序列,基因cDNA全长1 145 bp,编码区759 bp,编码252个氨基酸残基,将该基因命名为桑树橡胶延伸因子基因(GenBank登录号:GQ466080)。为探究该基因的功能,通过RT-PCR的方法分析该基因在桑树不同组织器官的表达,结果表明该基因在桑树幼叶中的表达量最高,其次是茎和芽,在根中的表达量最低。对桑树叶片进行细胞分裂素处理,发现细胞分裂素处理后该基因表达量有减少的趋势,在细胞分裂素处理的叶片中,正在伸展的幼叶中该基因的表达量要高于刚出现的幼叶和成熟叶。与桑树中已知的其它功能基因相比,桑树橡胶延伸因子在桑树正常生长中的表达量远高于桑树Na+/H+逆向转运蛋白基因MaNHX和桑树抗冻蛋白基因WAP27的表达量。从以上结果初步推测桑树橡胶延伸因子基因在桑树的生长发育中起重要作用。 展开更多
关键词 桑树 橡胶延伸因子 基因克隆 基因表达
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橡胶树炭疽病菌Cap20基因的克隆和序列分析 被引量:4
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作者 林春花 李超萍 +2 位作者 李博勋 周维 黄贵修 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2012年第11期1991-1995,共5页
根据鳄梨胶孢炭疽菌Cap20基因序列设计引物,利用同源基因克隆法获得橡胶树胶孢炭疽菌和尖孢炭疽菌Cap20基因,同时进行核苷酸序列、氨基酸序列及聚类分析。结果表明:2种橡胶树炭疽菌的Cap20基因均含2个外显子和1个内含子,编码183个氨基酸... 根据鳄梨胶孢炭疽菌Cap20基因序列设计引物,利用同源基因克隆法获得橡胶树胶孢炭疽菌和尖孢炭疽菌Cap20基因,同时进行核苷酸序列、氨基酸序列及聚类分析。结果表明:2种橡胶树炭疽菌的Cap20基因均含2个外显子和1个内含子,编码183个氨基酸;橡胶树胶孢炭疽菌与鳄梨胶孢炭疽菌同源性最高,其核苷酸序列同源性达90.3%,氨基酸序列同源性达98.9%;来自橡胶树的2种炭疽菌Cap20基因序列存在较大差异,其核苷酸水平同源性仅为73.8%,氨基酸水平同源性为79.8%;炭疽菌CAP20和绿僵菌MPL1蛋白结构具有42%的同源性,所含蛋白结构域相似,推测炭疽菌Cap20基因可能与绿僵菌Mpl1基因功能具有相似性。 展开更多
关键词 橡胶树 尖孢炭疽菌 胶孢炭疽菌 Cap20 基因克隆
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光皮桦BlFTL基因的克隆和表达模式 被引量:2
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作者 黄程前 宋丽青 +1 位作者 童再康 程龙军 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期343-349,共7页
通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)结合如cDNA末端快速克隆(RACE)技术从光皮桦Betula luminifera中克隆到1个FT类似基因,命名为BlFTL。该基因cDNA全长为924 bp(GenBank登录号:JQ951966),包含1个525bp的开放阅读框(116~640 bp)... 通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)结合如cDNA末端快速克隆(RACE)技术从光皮桦Betula luminifera中克隆到1个FT类似基因,命名为BlFTL。该基因cDNA全长为924 bp(GenBank登录号:JQ951966),包含1个525bp的开放阅读框(116~640 bp),编码1个含174个氨基酸的蛋白,且具有FT蛋白典型的磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)结构域。与已有部分植物中FT蛋白同源比对结果显示,BlFTL与无花果Ficus carica中FcFT序列相似性最高,达到了94%。4月为光皮桦开花期,雌花中BlFTL基因的表达量最高,茎和叶片中表达量很低。比较正常开花和不开花无性系植株嫩茎和叶片在不同时间BlFTL基因的表达情况,结果表明:BlFTL在不开花无性系植株中基本不表达,而正常开花植株中,BlFTL主要在雌花序和混合芽形成的8月以后表达。 展开更多
关键词 林木育种学 光皮桦 BlFTL 基因克隆 基因表达
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巴西橡胶树的分子生物学研究进展 被引量:5
11
作者 彭世清 陈守才 《生物技术通讯》 CAS 2001年第4期314-317,共4页
巴西橡胶树是一种重要的热带经济作物 ,由于橡胶树体内橡胶含量多 ,且容易采收 ,所以橡胶树一直是天然橡胶的商业来源。相比于模式植物和粮食等经济作物来说 ,分子生物学研究显著滞后。而且橡胶树是多年生乔木 ,经济性状多集中于胶乳 ,... 巴西橡胶树是一种重要的热带经济作物 ,由于橡胶树体内橡胶含量多 ,且容易采收 ,所以橡胶树一直是天然橡胶的商业来源。相比于模式植物和粮食等经济作物来说 ,分子生物学研究显著滞后。而且橡胶树是多年生乔木 ,经济性状多集中于胶乳 ,因此研究难度大 ,研究者也不多。本文就巴西橡胶的分子生物学方面的研究进行综述。 展开更多
关键词 巴西橡胶树 基因克隆 表达 分子生物学 综述
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橡胶树硫氧还蛋白基因HbCXXS1的克隆及表达分析 被引量:1
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作者 王帅 袁坤 +5 位作者 何其光 胡义钰 冯成天 王真辉 刘进平 刘辉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期214-222,共9页
硫氧还蛋白通过调控细胞内的氧化还原状态在植物生长发育及非生物胁迫应答等过程中发挥重要作用。研究硫氧还蛋白基因HbCXXS1在橡胶树各组织以及激素和非生物胁迫处理下的表达,为解析其生物学功能奠定基础。采用RT-PCR克隆HbCXXS1,对其... 硫氧还蛋白通过调控细胞内的氧化还原状态在植物生长发育及非生物胁迫应答等过程中发挥重要作用。研究硫氧还蛋白基因HbCXXS1在橡胶树各组织以及激素和非生物胁迫处理下的表达,为解析其生物学功能奠定基础。采用RT-PCR克隆HbCXXS1,对其进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR分析该基因在橡胶树不同组织及不同激素和非生物胁迫条件下的表达模式。结果表明,HbCXXS1开放阅读框为372 bp,编码123个氨基酸。HbCXXS1蛋白为亲水性蛋白,具有硫氧还蛋白保守结构域,活性中心为CXXS,属于h型硫氧还蛋白的第III组。HbCXXS1在橡胶树胶乳中的表达显著高于其他组织,且在死皮植株胶乳中的表达显著低于健康植株。脱落酸、茉莉酸甲酯、干旱和盐胁迫处理抑制了HbCXXS1的表达,乙烯利和低温处理上调了HbCXXS1的表达,而水杨酸和过氧化氢处理的不同时间点,HbCXXS1的表达既有上调也有下调。HbCXXS1可能在橡胶树产排胶和非生物胁迫应答中发挥重要调控作用。 展开更多
关键词 硫氧还蛋白 橡胶树 克隆 表达分析 非生物胁迫
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巴马猪BECN2基因的克隆及其mRNA组织表达分析
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作者 王玥 郭晓晨 +2 位作者 姜超前 牟彦双 刘忠华 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第1期60-65,70,134,135,共9页
为了探究巴马猪BECN2基因编码蛋白的生物学特性及其mRNA在巴马猪不同组织中表达水平,试验采用PCR方法扩增并克隆巴马猪BECN2基因CDS全长序列;通过生物信息学方法对其编码蛋白进行分析并构建系统进化树;应用实时荧光定量PCR方法检测巴马... 为了探究巴马猪BECN2基因编码蛋白的生物学特性及其mRNA在巴马猪不同组织中表达水平,试验采用PCR方法扩增并克隆巴马猪BECN2基因CDS全长序列;通过生物信息学方法对其编码蛋白进行分析并构建系统进化树;应用实时荧光定量PCR方法检测巴马猪BECN2基因mRNA在不同组织中表达情况。结果表明:经PCR扩增巴马猪BECN2基因CDS全长序列大小为1302 bp;巴马猪BECN2蛋白是一种结构较不稳定的亲水性蛋白,由433个氨基酸组成,亮氨酸含量最高,占比为13.2%。巴马猪BECN2蛋白二级结构主要由α-螺旋、无规则卷曲、β-折叠和β-转角构成,占比分别为50.04%、34.41%、10.16%、1.39%,其氨基酸主要存在于细胞膜外;亚细胞主要定位在细胞核和线粒体中,占比为56.5%和21.7%;存在16个磷酸化位点,分别为10个丝氨酸、5个苏氨酸、1个酪氨酸位点,在第1~20个编码氨基酸位点可能存在信号肽结构。巴马猪BECN2基因核苷酸序列与江豚、海豚的同源性较高,为84.3%。巴马猪BECN2蛋白氨基酸序列与牛和羊的遗传距离较近。BECN2基因mRNA在巴马猪不同组织中均有表达,且在卵巢、肺脏、心脏、睾丸、空肠、大脑、小脑、胃、皮肤、骨骼肌组织中表达量较高。说明巴马猪BECN2基因在细胞中发挥关键作用。 展开更多
关键词 BECN2基因 巴马猪 克隆 组织表达 基因编码区 进化树
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橡胶树半胱氨酸脱硫酶基因的克隆及其在低磷胁迫下的表达分析
14
作者 覃怀德 高乐 +3 位作者 高伟 何鹏 王大鹏 韦家少 《湖南农业科学》 2013年第12期1-3,9,共4页
橡胶树是天然橡胶的主要来源,是我国海南、云南等热带地区的重要经济作物。磷是植物所需的三大重要营养元素之一,磷对橡胶树生长发育,产排胶具有重要的作用。研究利用低磷胁迫差减文库获得的EST,克隆了一个橡胶树应答低磷胁迫基因半胱... 橡胶树是天然橡胶的主要来源,是我国海南、云南等热带地区的重要经济作物。磷是植物所需的三大重要营养元素之一,磷对橡胶树生长发育,产排胶具有重要的作用。研究利用低磷胁迫差减文库获得的EST,克隆了一个橡胶树应答低磷胁迫基因半胱氨酸脱硫酶(Cysteine Desulfurase,HbNfs),并利用实时荧光定量PCR技术进行表达分析。结果表明:HbNfs全长1 481 bp,包含一个1 182 bp的完整读码框(ORF),编码395个氨基酸。实时荧光定量分析表明HbNfs在橡胶树根中受低磷诱导上调表达,表明该基因可能在应答低磷胁迫中起重要作用。 展开更多
关键词 橡胶树 半胱氨酸脱硫酶 基因克隆 基因表达
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牡丹PsAGL6基因克隆与表达分析 被引量:6
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作者 唐文龙 赵鹏飞 +2 位作者 李永华 贺丹 逯久幸 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期439-444,共6页
该研究在转录组数据分析基础上,通过RT-PCR方法从牡丹(Paeonia suffruticosa.L)品种‘洛阳红’中克隆AGL6基因,并分析了其在不同组织和花型中的表达模式。结果显示:(1)AGL6开放阅读框长度732bp,编码244个氨基酸;结构域分析显示,该基因... 该研究在转录组数据分析基础上,通过RT-PCR方法从牡丹(Paeonia suffruticosa.L)品种‘洛阳红’中克隆AGL6基因,并分析了其在不同组织和花型中的表达模式。结果显示:(1)AGL6开放阅读框长度732bp,编码244个氨基酸;结构域分析显示,该基因具有高度保守的MADS MEF2区、K区、AGL6I与AGL6II基序,归类于MADS-box基因家族,命名为PsAGL6,GenBank登录号为MF563611。(2)同源比对分析显示,牡丹PsAGL6与葡萄VvAGL6氨基酸序列相似度最高,达79%。(3)qRT-PCR分析结果显示,PsAGL6在牡丹各器官中均有表达,但营养器官中表达量较低,花器官中表达量较高,其中以萼片最高,花瓣与雌蕊次之;对4种牡丹花型花瓣的表达分析显示,PsAGL6基因在不同花型花瓣中的表达量差异明显,且蔷薇型牡丹花瓣相对表达量最高。研究表明,AGL6基因参与牡丹花器官的形成,为深入研究花器官发育的分子机制提供了帮助。 展开更多
关键词 牡丹 PsAGL6 克隆 表达分析
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大刺鳅生长激素基因克隆与表达分析 被引量:4
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作者 钟东明 黄小琪 +3 位作者 何佩莹 周惠强 张明清 舒琥 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期194-201,共8页
【目的】揭示生长激素(GH)是否能以旁分泌或自分泌方式对大刺鳅(Mastacembelus armatus)的生长和发育起作用,为其生长调节研究积累基础数据。【方法】采用RACE克隆大刺鳅GH基因cDNA序列,并通过实时荧光定量PCR对大刺鳅不同组织及胚胎不... 【目的】揭示生长激素(GH)是否能以旁分泌或自分泌方式对大刺鳅(Mastacembelus armatus)的生长和发育起作用,为其生长调节研究积累基础数据。【方法】采用RACE克隆大刺鳅GH基因cDNA序列,并通过实时荧光定量PCR对大刺鳅不同组织及胚胎不同发育时期GH基因的表达情况进行分析。【结果】大刺鳅GH基因c DNA序列全长815 bp,其中,5’端非编码区长33 bp,3’端非编码区长167 bp,开放阅读框(ORF)615 bp,共编码204个氨基酸,GenBank登录号MH885947;大刺鳅GH氨基酸序列的前17个氨基酸残基组成信号肽,也存在4个保守的半胱氨酸残基(69Cys、177Cys、194Cys和202Cys)。大刺鳅GH蛋白分子量为23007.33 Da,理论等电点(pI)为6.90,其氨基酸组成中以亮氨酸(Leu)的含量最高(15.7%),丝氨酸(Ser)次之(14.2%),色氨酸(Trp)含量最低(0.5%)。大刺鳅GH氨基酸序列与斑鳜(Siniperca scherzeri)、花鲈(Lateolabrax maculatus)和黄鳝(Monopterus albus)的同源性较高,对应的同源性分别为95.59%、95.07%和92.16%;在基于GH氨基酸序列同源性构建的系统发育进化树中,大刺鳅与同属于合鳃目的黄鳝聚为一支,亲缘关系最近。GH基因在大刺鳅不同组织中均有表达,其中以脑组织中的相对表达量最高,而肠道中的相对表达量最低;GH基因在大刺鳅胚胎各发育时期也均有表达,其中以囊胚期的相对表达量最高,而出膜期的相对表达量最低。【结论】大刺鳅GH基因具有高度的保守区域,在各组织中广泛表达,尤其在脑组织中高表达,说明GH是以自分泌或旁分泌方式对大刺鳅生长发挥重要作用,且在胚胎发育过程中对细胞分化具有促进作用。 展开更多
关键词 大刺鳅 生长激素(GH) 基因克隆 保守区域 系统发育进化树 表达分析
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橡胶树炭疽菌CsHog1基因的克隆和原核表达分析 被引量:2
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作者 廖小淼 何其光 +6 位作者 刘耀 徐良向 周晓韵 刘文波 张宇 林春花 缪卫国 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2019年第5期932-938,共7页
HOG MAPK途径在植物病原真菌生长发育、致病过程和对杀菌剂敏感性等方面发挥重要功能,但在不同的病原真菌中具有一定差异。为研究Hog1蛋白在橡胶树炭疽菌(Colletotrichum siamense)中的功能和调控机制,本研究利用同源克隆法克隆获得橡... HOG MAPK途径在植物病原真菌生长发育、致病过程和对杀菌剂敏感性等方面发挥重要功能,但在不同的病原真菌中具有一定差异。为研究Hog1蛋白在橡胶树炭疽菌(Colletotrichum siamense)中的功能和调控机制,本研究利用同源克隆法克隆获得橡胶树炭疽菌(C. siamense)的CsHog1基因,构建GST-CsHog1融合表达载体,利用SDS-PAGE和WesternBlot检测蛋白表达情况。结果表明:橡胶树炭疽菌(C.siamense)的CsHog1基因大小1383 nt,编码459个氨基酸,包含5个内含子,具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域;聚类分析显示橡胶树炭疽菌的CsHog1基因编码的氨基酸序列与黄瓜炭疽菌的ClOsc1(Hog1同源基因)同源性最高。所构建的蛋白融合表达载体在供试条件下(IPTG0.3、0.5、0.8、1.0 mmol/L;温度16、25、28℃)均可较好诱导表达,GST-CsHog1融合蛋白大小约为70 ku。用GST亲和层析柱纯化获得蛋白,经Western Blot检测显示该蛋白可与GST单克隆抗体特异性结合。 展开更多
关键词 橡胶树 橡胶树炭疽菌 Hog1基因 蛋白纯化 原核表达
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3个白桦BpBEE基因的克隆与表达分析 被引量:2
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作者 武丹阳 杨洋 李慧玉 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期137-144,共8页
根据已有的白桦Betula platyphylla茎尖、叶片及木质部等45个转录组信息,获得3条白桦BEE基因的全长c DNA序列,分别命名为BpBEE1,BpBEE2和BpBEE3。对3个BpBEE基因进行了生物信息学分析和实时定量聚合酶链式反应分析,结果表明:3个基因具... 根据已有的白桦Betula platyphylla茎尖、叶片及木质部等45个转录组信息,获得3条白桦BEE基因的全长c DNA序列,分别命名为BpBEE1,BpBEE2和BpBEE3。对3个BpBEE基因进行了生物信息学分析和实时定量聚合酶链式反应分析,结果表明:3个基因具有典型的结合DNA及特异识别序列E-box和N-box,属于b HLH类转录因子。这3个基因与拟南芥Arabidopsis thaliana中At BEE基因亲缘关系较近,属于b HLH超家族第25亚类。在白桦生长季内,BpBEE1,BpBEE2和BpBEE3在不同组织中均有表达,叶中BpBEE基因表达量明显高于其他部位。在生长旺盛时期,茎、叶和顶芽中BpBEE基因均呈现上调表达,表明BpBEE基因可能参与到白桦的生长过程。油菜素内酯(BR)激素处理之后,BpBEE1在早期(2 h和4 h)的芽和木质部中呈显著上调(>2倍);BpBEE2在早期(2 h)的木质部和芽显著上调外,其他处理时间也呈现不同程度的上调。表明3个白桦BpBEE基因参与BR激素应答,且BpBEE1和BpBEE2呈现早期应答响应。 展开更多
关键词 林木育种学 白桦 bHLH转录因子 基因克隆 基因表达分析
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毛竹阿拉伯糖-5-磷酸异构酶的基因克隆、原核表达及纯化 被引量:1
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作者 屈亚平 张智俊 +2 位作者 王超莉 王蕾 吴林军 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期928-934,共7页
毛竹Phyllostachys edulis阿拉伯糖-5-磷酸异构酶(Pe Kds D)是2-酮-3-脱氧辛糖酸(KDO)生物合成途径的第1个关键酶。采用逆转录实时聚合酶链式反应(q RT-PCR)克隆得到毛竹Kds D基因。该基因c DNA全长1 038 bp,编码346个氨基酸;对不同物... 毛竹Phyllostachys edulis阿拉伯糖-5-磷酸异构酶(Pe Kds D)是2-酮-3-脱氧辛糖酸(KDO)生物合成途径的第1个关键酶。采用逆转录实时聚合酶链式反应(q RT-PCR)克隆得到毛竹Kds D基因。该基因c DNA全长1 038 bp,编码346个氨基酸;对不同物种来源的Kds D氨基酸序列进行比对和系统进化树分析。结果表明:毛竹的Kds D与玉米Zea mays等植物来源的Kds D有很高的序列一致性,而与微生物来源的Kds D序列一致性较低。毛竹不同组织实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)结果表明:Pe Kds D基因在叶中表达量远远高于其他组织。在大肠埃希菌Escherichia coli原核表达系统中获得了Kds D的可溶性高表达蛋白,将大量表达的重组蛋白经过Ni-NTA亲和层析和分子筛层析(SEC)进行纯化,发现Kds D在溶液(30 mmol·L^(-1)三羟甲基氨基甲烷pH 8.0,200 mmol·L^(-1)氯化钠)中以多种聚体的形式存在;酶学性质测定的结果表明:毛竹Kds D酶最适pH值为pH 8.5,最适作用温度为37℃。此结果为后期研究植物Kds D蛋白的结构与功能奠定了基础。 展开更多
关键词 林木育种学 毛竹 阿拉伯糖-5-磷酸异构酶 基因克隆 原核表达 蛋白纯化
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棘腹蛙剪接因子SRSF2基因克隆及序列分析 被引量:1
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作者 付丽娜 姜玉松 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第5期23-26,共4页
为了解剪接因子在棘腹蛙发育过程中的功能,首先基于棘腹蛙转录组数据库的组装结果设计特异性引物,利用RT-PCR方法克隆到棘腹蛙体内编码丝氨酸/精氨酸富集剪接因子2(Serine/Arginine-rich splicing factor 2,SRSF2)的完整开放读码框(ORF)... 为了解剪接因子在棘腹蛙发育过程中的功能,首先基于棘腹蛙转录组数据库的组装结果设计特异性引物,利用RT-PCR方法克隆到棘腹蛙体内编码丝氨酸/精氨酸富集剪接因子2(Serine/Arginine-rich splicing factor 2,SRSF2)的完整开放读码框(ORF),其ORF长度为642 bp,编码213个氨基酸残基,利用数字表达谱和半定量RT-PCR的方法验证了SRSF2在不同温度下的表达图谱,对克隆到的SRSF2基因进行了内含子分析。结果表明:SRSF2在不同生长温度(15,21,27,30℃)下的表达量存在显著差异,在21℃环境下的表达量最高,而在15,27,30℃生长环境下的表达量都较低。说明棘腹蛙来源的SRSF2基因ORF序列内包含个1内含子和2个外显子。 展开更多
关键词 SRSF2 基因克隆 差异表达 系统进化树 内含子
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