酸化甘油-超声辅助提取杨梅花青素工艺优化及其抗氧化活性研究

目的 通过响应面实验确定酸化甘油-超声辅助提取杨梅花青素最佳提取参数,并探究其体外抗氧化活性。方法 研究了酸化甘油浓度、提取时间、超声功率和提取温度4个单因素对杨梅花青素得率的影响,并优化花青素提取工艺参数。此外,考察了最佳提取工艺下杨梅花青素对3种氧化自由基的清除率和还原力等指标,评估了其抗氧化活性。结果 优化后的酸化甘油-超声辅助提取杨梅花青素的工艺条件为:酸化甘油浓度16%、提取时间42 min、超声功率204 W、提取温度46℃,此条件下杨梅花青素的得率为(6.915±0.027) mg CGE/g DW,接近预测值(6.961 mg CGE/g DW)。提取的杨梅花青素质量浓度为100μg/mL时,对超氧阴离子自由基、羟基自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率分别为59.35%、46.77%和61.65%。该浓度下,杨梅花青素的还原力为维生素C的39.84%。结论 本研究成功地应用响应面法优化了酸化甘油-超声辅助提取杨梅花青素的提取参数,并且提取物展现出良好的抗氧化活性。

基于GEO数据库联合网络药理学研究川芎-赤芍药对治疗动脉粥样硬化的药理过程及分子机制

目的:探讨活血化瘀中药药对川芎-赤芍拮抗动脉粥样硬化的潜在分子机制及药理过程。方法:使用R语言Limma包分析GEO数据库GSE43292数据集,对有表达差异的动脉粥样硬化基因进行筛选和提取。川芎-赤芍药对所含的化学活性组分及靶点通过中药系统药理学数据库与分析平台检索。合并差异基因和药物作用靶点以获得共同的靶点。利用在线分析工具STRING和Cytoscape构建药物和靶点的调控网络以及靶点间的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络。然后利用R语言注释靶点基因的基因本体(GO)功能,分析京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路,再进行基因集富集分析(GSEA)以验证KEGG的通路和富集的情况,确定靶点基因的调控功能和参与基因调控功能的信号转导通道。结果:共筛选出动脉粥样硬化差异基因1244个,川芎-赤芍药对含36个生物活性成分,其中靶点为环加氧酶1、肾上腺素受体、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ、激酶插入域受体、孕激素受体、基质金属蛋白酶9、CXC趋化因子配体8、蛋白激酶Cβ、白细胞介素6、CD14、二肽基肽酶-4、PIK3CG、肾上腺素受体α1B、微管相关蛋白2、尿激酶纤溶酶原激活剂和单胺氧化酶B。靶点在GO中主要富集在合成DNA过程的调控、DNA生物合成的过程、含胶原的细胞外基质、细胞外基质、蛋白酶结合、细胞迁移、血管形成过程、膜筏结构、转录的调节等与动脉粥样硬化炎症、脂肪代谢及血管生成相关的生物学注释。脂质与动脉粥样硬化通路和核因子κB信号通路与动脉粥样硬化关系最为密切,并且在KEGG信号通路和GSEA均显示出富集。结论:川芎-赤芍药对通过潜在的13个活性成分作用于可能的16个靶点调控相关信号转导通路,通过抗炎、调脂和保护血管等方式产生抗动脉粥样硬化的作用。

基于营卫理论探讨桂枝-赤芍配伍重塑肿瘤血管微环境的网络药理学机制

目的:采用网络药理学方法预测桂枝-赤芍配伍影响肿瘤血管生成的潜在靶点和通路,从分子网络药理学水平探索该配伍重塑肿瘤血管微环境的网络药理学机制。方法:采用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)检索桂枝、赤芍的化学成分和潜在靶点,选择口服生物利用度≥30%和类药性≥0.18作为化学成分筛选条件;在GeneCards数据库中检索血管生成的靶点;利用Cytoscape 3.6.0软件绘制桂枝-赤芍配伍-化合物-靶点-血管生成网络;使用STRING 11.0在线软件构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络并挖掘核心靶点;采用David Bioinformatics Resources数据库对该复方活性成分潜在的靶点网络中的蛋白进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果:桂枝-赤芍配伍的33种有效成分作用于血管生成过程的77个靶点,PPI网络的核心靶点包括蛋白激酶B(Akt)1、JUN、白细胞介素6、基质金属蛋白酶、血管内皮生长因子A、一氧化氮合酶2和缺氧诱导因子-1α等多个蛋白。GO功能富集分析提示,该配伍的关键蛋白主要参与了DNA结合转录激活剂活性、血红素结合、抗氧化活性、核受体活性和转录因子活性等生物过程。KEGG通路富集分析显示,该配伍参与了缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路、肿瘤蛋白53信号通路、细胞凋亡信号通路、表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药信号通路、血管内皮生长因子(VEGF)信号通路和磷脂酰肌醇3激酶-Akt信号通路等,提示桂枝-赤芍配伍与肿瘤血管生成的关系最为密切。结论:桂枝-赤芍配伍中的黄芩素、谷甾醇和鞣花酸等成分可能通过HIF-1信号通路、VEGF信号通路影响肿瘤血管生成,干预肿瘤的生物学行为。

基施黄腐酸钾对大棚杨梅营养生长及果实品质的影响

以18年生盛果期大棚东魁杨梅为材料,设置秋季基施矿物源黄腐酸钾500 g/株处理和对照(清水),测定植株营养生长和果实性状指标,分析黄腐酸钾对大棚杨梅的影响。结果表明,与对照(清水)相比,黄腐酸钾处理的春梢长度、叶片长度、10片叶厚和叶绿素SPAD值分别增加36.16%、13.06%、26.23%和0.77%,春梢长度、叶长、10片叶厚与对照(清水)差异显著;单果质量、可溶性固形物、总糖、维生素C、总黄酮和花青素含量分别增加6.03%、3.73%、5.74%、5.32%、2.11%和6.90%,总酸含量降低9.42%,除总黄酮含量外,其他果实品质指标均差异显著。说明基施黄腐酸钾能有效促进大棚东魁杨梅营养生长,明显改善果实品质,具有良好的推广应用价值。

赤芍多糖延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用及机制研究

目的基于模式生物秀丽隐杆线虫(简称线虫)探究赤芍多糖延缓衰老的作用。方法将线虫随机分为空白组和不同质量浓度的赤芍多糖组(100、200、400μg/mL),观察赤芍多糖对线虫寿命、运动能力和应激能力的影响,测定线虫体内脂褐素、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量以及相关抗氧化酶的活力,分析赤芍多糖对线虫体内抗氧化能力的影响;运用实时荧光定量酶链式反应技术检测赤芍多糖对线虫衰老相关基因mRNA表达的影响。结果与空白组相比,赤芍多糖高剂量组(400μg/mL)能够显著延长线虫寿命,增强线虫运动能力和应激能力,明显降低线虫体内脂褐素、MDA、ROS的含量,显著提高过氧化氢酶(catalase,CAT)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力;同时,赤芍多糖能够显著上调daf-16、skn-1、sod-3 mRNA的表达,下调daf-2、age-1 mRNA的表达。结论赤芍多糖能够通过提高线虫应激能力、增强抗氧化酶活力以及调控胰岛素/类胰岛素生长因子信号通路(IIS)相关基因的表达从而延缓线虫衰老。

红卡壁骨架化学成分分析与结构表征

通过发酵酶解制备了红卡壁骨架(N-CWS),采用化学鉴别、比色法、高效液相色谱法(HPLC)对其化学成分进行了分析,并通过扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)、傅立叶变换红外光谱(FTIR)、差示扫描量热法(DSC)、热重-差热分析(TG-DTA)等对其微观结构和热分解性能进行了表征。结果表明,N-CWS主要含有多糖、类脂化合物、氨基酸等成分,其中多糖主要由阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖醛酸等单糖组成;N-CWS粉末易聚集、黏连,单个骨架尺寸为500 nm×300 nm;N-CWS为无定形粉末,其TG曲线只有1个失重台阶,热分解温度在285℃附近,具有较好的热稳定性。

红色诺卡氏菌高产菌的ARTP诱变选育与发酵条件优化

以红色诺卡氏菌(Nocardia rubra)FIM-PO8为出发菌株,采用常压室温等离子体(ARTP)技术进行诱变,经筛选获得遗传较稳定的Nocardia rubra高产菌株FIM-PO8-16,并通过单因素实验和正交实验优化了菌株FIM-PO8-16的发酵工艺。确定最佳发酵培养基组分为:酵母粉2.5%、葡萄糖2.5%、蛋白胨0.5%、糊精1.0%;最佳发酵条件为:种子液菌龄30 h、初始pH值7.2、接种量2.0%、装料量100 mL/500 mL、转速230 r·min^(-1)、发酵温度32℃。在此条件下,FIM-PO8-16菌体细胞浓度大幅提高,达到8.31%。

类胡萝卜素产生菌深红酵母(Rhodotorula rubra)的培养条件的优化研究

本文研究深红酵母及其产生的类胡萝卜素的培养优化条件，并对其进行了小型发酵试验，结果表明pH值对深红酵母和类胡萝卜素有影响，初始pH值越低，色素的积累量越高，发酵过程中控制pH值能有效地增加色素积累的速度和初始色素积累量，但随着发酵时间的延长，色素积累量逐渐下降。

不同碳氮比杨梅枝条堆肥的养分含量和细菌群落变化

为了研究不同碳氮比对杨梅枝条堆肥发酵过程中养分、腐殖质组分及细菌群落结构的影响,设置碳氮比分别为30∶1、60∶1,90∶1进行杨梅枝条堆肥发酵试验,测定各处理养分和腐殖质组分,对细菌群落采用细菌16S rRNA Illumina Miseq高通量测序,比较细菌相对丰度,分析细菌群落Alpha和Beta多样性,及堆肥养分因子与细菌群落相关性。结果表明,杨梅枝条堆料处理的全氮、全磷、全钾含量随碳氮比增加而减少,有机质和胡敏素含量随碳氮比增加而增加;全氮、全钾、胡敏酸和富里酸含量随发酵时间延长显著增加,有机质和胡敏素含量则显著减少(p<0.05);碳氮比与有机质、全氮和胡敏素呈极显著相关。3个处理的厚壁菌门和放线菌门细菌的相对丰度随碳氮比增加而增加,变形菌门和拟杆菌门细菌的相对丰度随碳氮比增加而减少;在高温阶段厚壁菌门和放线菌门细菌的相对丰度明显高于其他阶段。不同碳氮比处理的细菌群落丰富度和多样性存在明显差异。碳氮比对枝条堆体细菌群落结构起决定性作用,全氮、有机质和温度也对枝条堆体细菌群落结构有一定的影响。堆体细菌群落结构与碳氮比、全氮和有机质之间存在显著相关性。说明碳氮比对杨梅枝条堆肥养分含量和细菌群落分布具有关键性作用。

毛发红糠疹合并前纵隔神经鞘瘤一例

毛发红糠疹是一种少见的鳞屑性角化性皮肤病,其发病可能与肿瘤等因素相关。现报道一例曾误诊为银屑病的毛发红糠疹患者,后发展致红皮病,诊疗中发现前纵隔占位肿物、癌胚抗原指标升高,予口服阿维A及肿物切除等治疗后,皮疹消退。术后病理及免疫组化诊断为神经鞘瘤。

外用红色诺卡氏菌细胞壁骨架治疗子宫颈锥切术后高危型HPV持续感染的临床疗效分析

目的:探讨外用红色诺卡氏菌细胞壁骨架(Nr-CWS)治疗子宫颈锥切术后高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)持续感染的临床疗效。方法:选择2019年1月至2021年1月因HR-HPV感染引起子宫颈高级别上皮内病变(HSIL),于青岛大学附属青岛妇女儿童医院行子宫颈冷刀锥切术,术后6个月复查HR-HPV持续感染的69例患者为研究对象,并随机分为治疗组(Nr-CWS治疗1个疗程,36例)和对照组(仅观察,33例)。统计患者治疗有效率、阴道微生态变化及副反应发生的情况。结果:①69例患者中,治疗组治疗有效率(80.56%)明显高于对照组(39.39%),差异有统计学意义(P<0.05)。②治疗组乳杆菌患者的比率较对照组增加明显(77.78%vs.45.45%,P<0.05);治疗组pH值≥4.6、白细胞酯酶(LE)阳性患者的比率较对照组及治疗前均有明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。③治疗组36例患者中发热5例,下腹坠胀感5例,腹泻1例,皮疹1例。结论:Nr-CWS治疗子宫颈锥切术后持续HR-HPV感染疗效较好,阴道微生态环境指标(乳杆菌、LE、pH值≥4.6)改善明显,且无严重副反应发生,但仍需从卫生经济学角度出发,根据患者情况综合考虑。

赤芍配方颗粒与饮片对急性血瘀大鼠抗凝功能药理等效性研究

目的 探讨赤芍配方颗粒与赤芍饮片对急性血瘀大鼠抗凝功能的药理等效性。方法 大鼠灌胃给药不同剂量赤芍配方颗粒及同批次饮片煎液,复制急性血瘀模型后检测APTT、PT、TT,计算其抑制率并进行主成分分析。根据抑制率主成分建立曲线回归模型,确定合适的量效回归方程。比较两药等效应剂量及等剂量效应,分析两药的药理等效性。结果 模型组大鼠APTT、PT及TT均较空白组显著下降(P<0.01或P<0.05)。赤芍配方颗粒各剂量组APTT均较模型组显著升高(P<0.01或P<0.05);赤芍饮片2~8倍剂量组APTT较模型组显著升高(P<0.01或P<0.05)。赤芍配方颗粒及饮片8倍剂量组PT较模型组显著升高(P<0.05)。赤芍配方颗粒8倍剂量组TT较模型组显著升高(P<0.01)。根据剂量-效应进行曲线拟合后选择最合适的量效曲线方程,根据方程计算等效应剂量及等剂量效应,回归方程分别为:赤芍配方颗粒(g生药·kg^(-1))=0.382 1×DEE赤芍饮片(g生药·kg^(-1))+0.160 1及EED赤芍配方颗粒(%)=-0.029 8×EED赤芍饮片2(%)+3.894 5×EED赤芍饮片(%)-52.38。结论 在对应的效应范围内,1 g生药·kg^(-1)赤芍饮片对急性血瘀大鼠抗凝主成分抑制率效价约相当于0.382 1 g生药·kg^(-1)的赤芍配方颗粒,同剂量赤芍配方颗粒对急性血瘀大鼠抗凝主成分抑制率大于赤芍饮片。

多元PCR在黑鲍(Haliotis rubra)微卫星遗传研究中的应用

根据D03等11个微卫星引物单位点PCR扩增时优化的扩增条件(退火温度、MgCl2等)和11个微卫星引物所带有的荧光颜色、等位基因大小变异范围及反应的灵敏度,可将11个微卫星引物分成A组(D03、G04、B04和H08)、B组(A09、H11、A08和G01)和C组(CmrHr1.24、CmrHr2.30和CmrHr2.23)进行多元PCR扩增,结果显示各组内位点之间的分离清晰,这表明多元PCR可以大大提高微卫星检测仪器的使用效率和提高实验效果,在微卫星研究中是一种快速便捷的方法。

鸡蛋花不同极性部位总酚、总黄酮含量及生物活性

为研究鸡蛋花95%乙醇提取物的不同极性溶剂萃取物中总酚、总黄酮含量,并对其体外抗菌、抗氧化、抗肿瘤活性进行评价,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取鸡蛋花醇提取物得到包括水层在内的4个部位萃取物,测定各部位总酚、总黄酮含量;采用微量肉汤稀释法测定各部位对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);测试各部位对DPPH·、ABTS^(+)·和·OH的清除能力;采用细胞计数试剂盒法检测各部位对人肝癌细胞(SMMC-7721,HepG2)、人乳腺癌细胞(MDA-MB-231,MCF-7)、人结肠癌细胞(HCT-116)、人结直肠腺癌上皮细胞(DLD-1)、人恶性黑色素瘤细胞(A375)、人神经胶质瘤细胞(U251)共8种肿瘤细胞活力的影响。结果表明,各部位中乙酸乙酯萃取物总酚和总黄酮含量最高,分别为(57.73±0.09)mg GAE/g和(558.88±0.99)mg RE/g,且各部位均有抗菌、抗氧化、抑制肿瘤细胞活力的能力,且均呈明显量效关系。其中,乙酸乙酯部位的抗菌、抗氧化能力最强,对5种细菌的MIC为0.5~1.0 mg/mL,清除DPPH·、ABTS^(+)·和·OH的IC_(50)值分别为14.94、15.43、74.61μg/mL;氯仿部位对8种肿瘤细胞的抑制能力最强,其IC_(50)值为9.12~40.14μg/mL。综上,鸡蛋花各部位均具有较强的抗菌、抗氧化以及抑制肿瘤细胞活性的作用,为鸡蛋花开发利用成食品、保健品或者药品提供参考。

豆粕菌剂与土壤调理剂混用改善衰弱杨梅营养生长和果实品质

衰弱病严重危害杨梅(Myrica rubra)产业健康发展,为开发有效防控手段,在冬季对设施栽培荸荠种杨梅开展混合肥试验,每棵树滴水线沟施发酵豆粕菌剂20 kg+土壤调理剂4 kg+改土活化剂0.5 kg,以常规施肥为对照(CK),测定成熟季杨梅树叶片和果实指标。结果表明,混合肥能够显著改善衰弱病树的树势和果实品质。相较于对照组,该施肥方法能显著促进病树树梢伸长和提高叶绿素含量,分别增加64.97%和8.27%;同时,能够显著增加病树杨梅果实总糖和总黄酮含量,分别提高12.30%和24.11%。该施肥方法还减少了果实总酸含量,降幅为34.84%,增加了果实甜度。因此,生物有机肥与土壤调节剂混施能够促进衰弱杨梅果树复壮,提高果实品质,缓解杨梅衰弱病的病情。

植物源氨基酸水溶肥对杨梅果实品质及营养生长的影响

研究植物源氨基酸对杨梅果实品质的影响,为丽维双保在杨梅上的应用提供理论依据。以东魁杨梅为研究对象,选择植物源氨基酸水溶肥(L,丽维双保)为试验材料,动物源氨基酸(Y)作为参比肥料,分别以1 000倍和500倍两个稀释浓度在杨梅的萌芽期、幼果期、硬核期喷施3次。试验结果表明,氨基酸肥料能够提高杨梅产量,增加果实可溶性固形物(TSS)、蔗糖等的含量,其中丽维双保低浓度L10和参比肥料高浓度Y5增幅明显,蔗糖含量分别增加29.2%和31.2%。氨基酸肥料促进植物对各种营养元素的吸收,丽维双保处理提高了叶片中氮、磷、钾、钙、镁、锰、锌、铜等8种元素含量,并增加叶面积,相较于参比肥料,低浓度下表现更为明显,说明丽维双保表现更为高效。由此初步判断氨基酸水溶肥料叶面喷施均能够增加杨梅产量,改善品质,提高作物的营养生长,提高收益。

范冠杰以活血化瘀药串治疗肥胖经验

范冠杰教授基于“动-定序贯八法”理论,认为肥胖除气虚、痰湿之外,还同时存在血瘀的病理因素;治疗肥胖时配伍活血化瘀药物为顺应疾病发展之需要。临证时可运用活血化瘀之山楂药串,该药串以山楂为君,配伍丹参-红花药对及牡丹皮-赤芍药对。山楂药串气血并治,以祛瘀为核心,辅以养血、行气血、健脾胃,散收兼施,动静相宜,适用于血脉瘀阻之肥胖患者。

Rhodotorula rubra对锡石和石英砂选择性吸附的研究

通过吸附率的测定,研究了菌悬浮液浓度、作用时间、作用温度、菌液初始pH值对Rhodotorula rubra（R.rubra）吸附锡石和石英砂的影响,并通过表面电位和红外图普分析探究选择性吸附的机理。研究结果表明：R.rubra能有效选择性地吸附锡石,菌液初始p H值对吸附起主要作用,当pH在4~5之间时R.rubra对锡石的吸附率80%以上,最大吸附率为83.97%;而对石英砂的吸附率在10%以下,最低仅为4.87%,有利于选择性吸附的进行;表面电位和红外普分析发现,R.rubra对锡石和石英砂的吸附是静电力和化学键共同作用的结果,R.rubra表面的官能团与锡石中的Sn位点发生了化学作用。

牡丹皮-赤芍药对治疗川崎病作用机制的网络药理学研究

目的:基于网络药理学的方法探讨了治疗川崎病的常用药对牡丹皮-赤芍发挥作用的潜在机理。方法:用TCMSP数据库对牡丹皮-赤芍药对的有效成分和相关靶点进行检索筛选,基于GeneCards和OMIM数据库搜索川崎病有关靶点,通过Venny工具分析牡丹皮-赤芍药对治疗川崎病的交集靶点。共有靶点经STRING数据库与Cytoscape3.7.2软件构建PPI网络图,使用R语言分析GO功能和KEGG富集情况,经分子对接技术评价关键靶点与主要成分的结合力。结果:筛出牡丹皮-赤芍药对36个活性成分,243个潜在靶点,川崎病相关靶点1619个,活性成分-疾病共同靶点100个。PPI网络中核心靶点主要涉及MYC、HIF1A、AKT1、JUN等。GO功能分析获取GOBP条目1883条,GOCC条目40条,GOMF条目147条;KEGG富集得到168条信号通路,靶点集中在AGE-RAGE信号通路、IL-17信号通路和TNF信号通路等。分子对接结果中,槲皮素、山柰酚与JUN、AKT1、CASP3具有较好的结合能力。结论:牡丹皮-赤芍药对通过细胞氧化应激反应和血管内皮生长因子等生物过程,经多成分、多靶标、多通路作用于川崎病进行治疗。

除草剂(硝·烟·莠去津)诱发毛发红糠疹样皮疹

患者女,51岁。因全身红斑、脱屑伴瘙痒2个月就诊。患者接触除草剂(硝·烟·莠去津)后头面部出现肿胀性红斑,逐渐向下发展累及躯干和四肢,表现为弥漫性红斑,表面覆有细小鳞屑,局部可见正常皮岛,伴有掌跖部皮肤角化和毛发脱落,自觉全身瘙痒、燥热。头皮组织病理检查:表皮角化过度和角化不全呈“棋盘样”交替出现,棘层增厚,皮突增宽延长。真皮浅层血管周围见较多淋巴细胞为主的炎症浸润,可见部分浆细胞。诊断:毛发红糠疹样皮疹。治疗:予口服阿维A(30 mg/d),头皮外用卡泊三醇搽剂治疗,治疗1个月后皮损完全消退。