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人脐带非酶解法培养MSCs的方法建立
被引量:
1
1
作者
李素萍
王震
+5 位作者
王超
王永珍
周学勇
吴学忠
杨宏友
吕蓉
《中国输血杂志》
北大核心
2017年第8期885-889,共5页
目的建立从人脐带Wharton's jelly组织中直接培养间充质干细胞(MSCs)的方法。方法将人脐带切成5 cm左右的片段,纵向剖开,剔除血管,把富含Wharton's jelly组织的脐带面置于10 cm2塑料培养皿的培养面上,加入含20%FBS的LG-DMEM培...
目的建立从人脐带Wharton's jelly组织中直接培养间充质干细胞(MSCs)的方法。方法将人脐带切成5 cm左右的片段,纵向剖开,剔除血管,把富含Wharton's jelly组织的脐带面置于10 cm2塑料培养皿的培养面上,加入含20%FBS的LG-DMEM培养基连续培养10 d;移去脐带组织后,培养皿中的细胞继续培养至80%-90%融合。传代和扩增3代(次)后,以倒置光学显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞免疫表型及细胞周期,用含有成骨细胞诱导剂、脂肪细胞诱导剂对传代培养至第3代的细胞分别定向诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞,并对诱导后细胞用碱性磷酸酶检测试剂、Von-Kossa染色检测试剂和茜苏红染色试剂作细胞生物学检测。结果脐带组织在贴壁培养5 d,组织周围可见有少量细胞贴壁生长,主要呈"成纤维样",形状不规则,移去脐带组织后继续培养至14-15 d时,细胞达到80%-90%汇合;细胞表面表达CD73、CD105、CD90、CD44、CD29、CD71及CD13,不表达CD34、CD14、CD133、CD45、HLA-DR;培养至第4代时约72.724%的细胞处在G1期,S期细胞占18.069%,第6代时,G1期细胞约为83.875%、S期细胞仅为9.606%左右。细胞经成骨细胞诱导分化后,碱性磷酸酶染色显示呈强阳性,茜苏红染色和Von-Kossa染色显示细胞有钙盐沉积并形成钙结节;细胞经成脂细胞诱导分化后,油红O染色呈红色,显示胞浆内有大量甘油三酯的聚集。结论采用非酶解法从人脐带Wharton's jelly中分离及培养扩增的细胞具备MSCs的基本特性,具有分化为成骨细胞和脂肪细胞的能力。
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关键词
间充质干细胞
人脐带
Wharton’
s
JELLY
成骨细胞
脂肪细胞
非酶解法
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职称材料
人骨膜源性成骨细胞的体外培养
被引量:
2
2
作者
王福生
王立德
+1 位作者
张羽飞
祝恩豹
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
2000年第7期3-4,共2页
探索成骨细胞的体外培养方法 ,建立人骨膜源性成骨细胞体外实验模型。方法 :以人髂骨骨膜为材料 ,通过植块培养法进行细胞培养 ,通过形态学观察 ;细胞的碱性磷酸酶 (ALP)染色 ;培养液中骨钙素 (BGP)的放免分析等进行细胞学鉴定。结果 :...
探索成骨细胞的体外培养方法 ,建立人骨膜源性成骨细胞体外实验模型。方法 :以人髂骨骨膜为材料 ,通过植块培养法进行细胞培养 ,通过形态学观察 ;细胞的碱性磷酸酶 (ALP)染色 ;培养液中骨钙素 (BGP)的放免分析等进行细胞学鉴定。结果 :成骨细胞为成纤维细胞型 ,贴壁生长 ,形态多样化 ,HE染色细胞轮廓清晰 ,核内可见 2 -3个核仁 ;细胞的ALP染色为阳性 ;培养液中可检测出较高浓度的BGP。结论 :可以利用人骨膜为材料进行成骨细胞的体外培养 ,本培养方法 ,简便易行 ,可靠。
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关键词
人骨膜源性成骨细胞
细胞培养
碱性磷酸酶
BGP
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职称材料
题名
人脐带非酶解法培养MSCs的方法建立
被引量:
1
1
作者
李素萍
王震
王超
王永珍
周学勇
吴学忠
杨宏友
吕蓉
机构
安徽省血液中心
解放军第
Global Cryoscientific Vancouver
出处
《中国输血杂志》
北大核心
2017年第8期885-889,共5页
基金
合肥市卫生计生委2016年应用医学研究项目(hwk2016zc020)
文摘
目的建立从人脐带Wharton's jelly组织中直接培养间充质干细胞(MSCs)的方法。方法将人脐带切成5 cm左右的片段,纵向剖开,剔除血管,把富含Wharton's jelly组织的脐带面置于10 cm2塑料培养皿的培养面上,加入含20%FBS的LG-DMEM培养基连续培养10 d;移去脐带组织后,培养皿中的细胞继续培养至80%-90%融合。传代和扩增3代(次)后,以倒置光学显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞免疫表型及细胞周期,用含有成骨细胞诱导剂、脂肪细胞诱导剂对传代培养至第3代的细胞分别定向诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞,并对诱导后细胞用碱性磷酸酶检测试剂、Von-Kossa染色检测试剂和茜苏红染色试剂作细胞生物学检测。结果脐带组织在贴壁培养5 d,组织周围可见有少量细胞贴壁生长,主要呈"成纤维样",形状不规则,移去脐带组织后继续培养至14-15 d时,细胞达到80%-90%汇合;细胞表面表达CD73、CD105、CD90、CD44、CD29、CD71及CD13,不表达CD34、CD14、CD133、CD45、HLA-DR;培养至第4代时约72.724%的细胞处在G1期,S期细胞占18.069%,第6代时,G1期细胞约为83.875%、S期细胞仅为9.606%左右。细胞经成骨细胞诱导分化后,碱性磷酸酶染色显示呈强阳性,茜苏红染色和Von-Kossa染色显示细胞有钙盐沉积并形成钙结节;细胞经成脂细胞诱导分化后,油红O染色呈红色,显示胞浆内有大量甘油三酯的聚集。结论采用非酶解法从人脐带Wharton's jelly中分离及培养扩增的细胞具备MSCs的基本特性,具有分化为成骨细胞和脂肪细胞的能力。
关键词
间充质干细胞
人脐带
Wharton’
s
JELLY
成骨细胞
脂肪细胞
非酶解法
Keywords
me
s
enchymal
s
tem cell
s
human
umbilicalcord
from Wharton'
s
jelly
osteoblast
s
adipocyte
s
nonenzymatic treatment
分类号
R457.2 [医药卫生—治疗学]
R332.27 [医药卫生—人体生理学]
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职称材料
题名
人骨膜源性成骨细胞的体外培养
被引量:
2
2
作者
王福生
王立德
张羽飞
祝恩豹
机构
大连医科大学附属第一医院
瓦房店市中医院骨科
出处
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
2000年第7期3-4,共2页
文摘
探索成骨细胞的体外培养方法 ,建立人骨膜源性成骨细胞体外实验模型。方法 :以人髂骨骨膜为材料 ,通过植块培养法进行细胞培养 ,通过形态学观察 ;细胞的碱性磷酸酶 (ALP)染色 ;培养液中骨钙素 (BGP)的放免分析等进行细胞学鉴定。结果 :成骨细胞为成纤维细胞型 ,贴壁生长 ,形态多样化 ,HE染色细胞轮廓清晰 ,核内可见 2 -3个核仁 ;细胞的ALP染色为阳性 ;培养液中可检测出较高浓度的BGP。结论 :可以利用人骨膜为材料进行成骨细胞的体外培养 ,本培养方法 ,简便易行 ,可靠。
关键词
人骨膜源性成骨细胞
细胞培养
碱性磷酸酶
BGP
Keywords
s
:
human
periosteal-derived
osteoblast
Cell culture
Alkaline Pho
s
phata
s
e (AKP)
Bone Gla Protein or O
s
teocalcin (BGP)
分类号
R329-33 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人脐带非酶解法培养MSCs的方法建立
李素萍
王震
王超
王永珍
周学勇
吴学忠
杨宏友
吕蓉
《中国输血杂志》
北大核心
2017
1
下载PDF
职称材料
2
人骨膜源性成骨细胞的体外培养
王福生
王立德
张羽飞
祝恩豹
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
2000
2
下载PDF
职称材料
已选择
0
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