高效液相色谱法检测人血浆中氟西汀及其代谢产物的浓度

目的 :建立一种快速测定人血浆中氟西汀及其代谢产物去甲氟西汀的反相高效液相色谱法。方法 :用正己烷 -乙腈(98∶2 )提取血浆样品中氟西汀、去甲氟西汀及氯丙帕明 (内标 ) ,在EclipseXDB -C8柱上 ,以 0 0 5mol·L-1磷酸二氢钾 -乙腈 -甲醇 (5 5∶40∶5 )为流动相进行分离 ,流速 1 2mL·min-1,于 2 2 6nm检测。结果 :线性范围为 10～ 5 0 0ng·mL-1,氟西汀和去甲氟西汀相对回收率分别为 99 1%～ 10 4 2 %和 98 2 %～ 10 0 3 % ,日内RSD分别为 4 1%～ 4 8%和 4 5 %～5 8% ,日间RSD分别为 3 5 %～ 5 9%和 4 9%～ 6 8%。结论 :本法简便、精密度高、重现性好 ,结果准确可靠。

中国健康志愿者S－美芬妥英和苯妥英4’－羟化代谢的相关性研究

１６名汉族健康志愿者进行Ｓ－美芬妥英４’－羟化代谢分型，１３名为强代谢者（ＥＭｓ），３名为弱代谢者（ＰＭｓ）。口服苯妥英１００ｍｇ，应用ＨＰＬＣ法测定服药后２４ｈ尿中苯妥英和４’－羟苯妥英（４’－ＯＨ－ＰＨＴ）的排泄量。１３名Ｓ－美芬妥英强代谢者Ｌｇ苯妥英／４’－羟苯妥英比值为－２．１７±０．２６；３名弱代谢者为－２．２７±０．１０，两组无显著性差异Ｐ＞０．０５）。１６名受试者Ｓ－美芬妥英和苯妥英的羟化代谢比值无相关性（ｒ＝－０．１０８，Ｐ＞０．００５）。本文结果表明，Ｓ－美芬妥英和苯妥英虽同为乙内酰脲类抗癫痫药，化学结构和羟化反应均相似，但在人体内不属同一羟化途径代谢，无交叉代谢障碍。

中国人S－美芬妥英／奥美拉唑羟化代谢多态性的分子机制探讨

为探讨中国人Ｓ－美芬妥英／奥美拉唑氧化代谢多态性的分子机制，本文用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）方法扩增出ＣＹＰ２Ｃ１９ｉｎｔｒｏｎ４／ｅｘｏｎ５特异的ＤＮＡ片段，并用限制性内切酶ＳｍａＩ进行酶切分析。研究结果表明，１６位健康志愿者（９名Ｓ－ＭＰＥＭｓ，７名Ｓ－ＭＰＰＭｓ）的ＣＹＰ２Ｃ１９存在ＳｍａＩ酶切位点的多态性，且与Ｓ－ＭＰ羟化代谢表型有相关性。在９名ＥＭｓ中，有３名为ＣＹＰ２Ｃ１９ｗｔ／ｗｔ的纯合子，而在７名ＰＭｓ中，有４名为ＣＹＰ２Ｃ１９ｍ／ｍ的纯合子，余下９位均为杂合子（ＣＹＰ２Ｃ１９ｗｔ／ｍ）。因此中国人导致Ｓ－ＭＰ弱代谢表型主要由于ＣＹＰ２Ｃ１９基因外显子５的ＳｍａＩ酶切位点的突变。但这种突变只能解释Ｓ－ＭＰＰＭｓ的８０％等位基因突变（ＣＹＰ２Ｃ１９ｍ）或６０％的中国受试者弱代谢表型。对中国人ＣＹＰ２Ｃ１９基因ｉｎｔｒｏｎ４／ｅｘｏｎ５ＤＮＡ序列进行测定的结果表明，在ＥＭｓ的基因序列中有一个ＳｍａＩ酶位切点，而在ＰＭｓ中，由于Ｇ→Ａ突变，使ＳｍａＩ酶位切点消失。

我国正常志愿者S-美芬妥英(Mephenytoin)羟化代谢缺陷频发率及其与异喹胍羟化代谢表型的相关性研究

应用气相色谱法测定我国137名正常志愿者一次口服美芬妥英(100mg)和异喹胍(10mg)尿样中S/R美芬妥英比值和异喹胍/4-羟异喹胍比值。研究结果表明,137名志愿者中有20名为S-美芬妥英羟化代谢的弱代谢者(PMs),其缺陷频发率为14.6%,说明我国人群的S-美芬妥英羟化代谢缺陷频发率与日本人相近,但明显高于白种人。研究结果尚发现,137名志愿者有2例为异喹胍羟化代谢弱代谢者,其缺陷频发率为1.46%,并与S-美芬妥英羟化代谢表型不相关。这说明两药虽在体内均进行4-羟化代谢,但却被不同的细胞色素P_(450)羟化酶所催化和受不同酶基因所调控。

气相色谱法检测人尿中R,S-美芬妥英浓度

建立了人尿中Ｒ，Ｓ－美芬妥英的气相色谱（ＧＣ）手性分离与检测方法。在选定的色谱条件下能很好地分离Ｒ，Ｓ－美芬妥英，尿中其它物质无干扰。用外标法定量，线性范围为１２．５～２５００μｇ／Ｌ尿，最小检出浓度为６μｇ／Ｌ尿。方法具有样本制备简便、分析时间短、线性范围宽、干扰少、灵敏和准确等优点，已广泛用于人体内美芬妥英代谢的研究和肝药酶ＣＹＰ２Ｃ１９酶活性的检测。

氯米帕明在体外人肝微粒体中的氮位去甲基代谢(英文)

采用人肝微粒体应用酶促动力学分析，观察特异性细胞色素Ｐ４５０（ＣＹＰ４５０）抑制剂对氯米帕明（ＣＩＭ） Ｎ－去甲基代谢的作用以及ＣＩＭ 去甲基代谢与Ｓ－美芬妥英４′－羟化代谢的相关性，以阐明参与ＣＩＭ Ｎ－去甲基代谢的ＣＹＰ４５０ 的种类， 性质及其在代谢中的作用． 酶促动力学分析结果表明有高亲和力酶及具有底物别构激活特性的低亲和力酶参与了ＣＩＭ 的Ｎ－去甲基代谢． 抑制实验结果表明ＣＹＰ１Ａ２ 特异性抑制剂呋拉茶碱（Ｆｕｒ）主要抑制低浓度ＣＩＭ 的去甲基代谢，ＣＹＰ３Ａ４ 特异性抑制剂醋竹桃霉素（ＴＡＯ）主要抑制高浓度ＣＩＭ 去甲基代谢． 相关实验发现３ μｍ ｏｌ·Ｌ－ １ ＣＩＭ 代谢生成Ｎ－去甲基ＣＩＭ 的速率与２００ μｍ ｏｌ·Ｌ－ １ Ｓ－美芬妥英生成４′－羟基美芬妥英的速率无显著相关性， 提示ＣＹＰ２Ｃ１９ 对于催化人肝微粒体中ＣＩＭ 的去甲基代谢仅起较为次要或很小的作用． 结果表明，ＣＹＰ１Ａ２ 主要参与低浓度ＣＩＭ 在体外人肝微粒体Ｎ－去甲基代谢，ＣＹＰ３Ａ４ 因其底物激活特性主要在高浓度ＣＩＭ的去甲基代谢中起作用，ＣＹＰ２Ｃ１９ 则作用很小．

S－美芬妥英羟化代谢多态性的分子机制研究进展

人群中存在着Ｓ－美芬妥英羟化代谢多态性。从人肝微粒体已分离出Ｓ－美芬妥英羟化酶。在基因克隆研究中已分离出与该羟化酶活性有关的Ｐ４５０ｃＤＮＡ，属Ｐ４５０２Ｃ１９。最近报道，人肝中Ｐ４５０２Ｃ１９的含量和催活Ｓ－美芬妥英羟化活性密切相关，其弱代谢者主要由于ＣＹＰ２Ｃ１９的外显子５单碱基对（Ｇ→Ａ）的变异，使核苷酸序列错位而产生无功能的Ｐ４５０蛋白的结果。

高效液相色谱法测定人血浆中花椒毒酚的浓度

目的 建立用高效液相色谱法测定人血浆中花椒毒酚浓度的方法。方法 本试验血浆样品用乙酸乙酯进行液液萃取,S-美芬妥英为内标,色谱柱为Hypersil BDS C18,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速1 m L/min,检测波长为300nm。结果 内标物质和花椒毒酚分离度良好,人血浆中的内源性物质不干扰测定。在0.01~2μg/m L浓度范围内花椒毒酚和内标物的色谱峰面积比值线性关系良好（r=0.999 2）;花椒毒酚的最低定量限为0.01μg/m L,样品日内日间精密度的RSD均小于6%,提取回收率为84.5%~92.1%,方法回收率99.5%~102.5%。结论 本实验建立的HPLC方法操作简便宜行,重现性好、灵敏度高,可用于人血浆花椒毒酚浓度测定及药代动力学的进一步研究。

中国人S－美芬妥英羟化酶的两种突变基因型

为了查明Ｓ－美芬妥英羟化酶（ＣＹＰ２Ｃ１９）在中国人群中的突变基因型，采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）结合限制性内切酶技术分析了１９例Ｓ－美芬妥英弱代谢者（ＰＭ）和５５例强代谢者（ＥＭ）的基因型。结果显示，表型ＰＭ的基因型是ｍ１／ｍ１（７９％）和ｍ１／ｍ２（２１％），ＥＭ中杂合子（ｍ１／ｗｔ和ｍ２／ｗｔ）占５４．５％。表明在中国人中ＣＹＰ２Ｃ１９等位基因至少存在有两种突变基因型（ｍ１和ｍ２）。

中国汉族人S-美芬妥英4′-羟化代谢的遗传多态性(英文)

目的:研究我国汉族人S-美芬妥英(S-Mep)4′-羟化代谢的遗传多态性。方法:148名互无血缘关系的汉族健康志愿者和5个家族21名成员,口服美芬妥英100mg后,用HPLC法测定0-12h尿中S-Mep 4′-羟化代谢的代谢比值(lg MR)和羟化指数(lg HI)。结果:lg MR和lg HI均呈两态性分布,分型点(antimode)分别为-1.00和1.50,羟化代谢缺陷的频发率为13.5％(20/148)。系谱分析表明S-Mep 4′-羟化代谢缺陷为常染色体隐性遗传。结论:S-Mep 4′-羟化代谢缺陷频发率东方人高于高加索人,遗传方式均为常染色体隐性遗传。