人肠系膜动脉平滑肌sGCα和sGCβ基因表达水平检测方法的建立

目的:建立实时荧光定量PCR检测人肠系膜动脉平滑肌sGCα和sGCβ基因表达水平的检测方法,并构建相应质粒标准品,为进一步研究基因功能奠定基础。方法:提取人肠系膜动脉组织总RNA,采用RT-PCR方法获取sGCα、sGCβ、GAPDH基因片段,与pMD-18T vector连接,并转化到大肠杆菌DH5α细胞,通过PCR和测序鉴定重组质粒。提取含目的基因的质粒作为标准品,采用SYBR GreenⅠ法检测人肠系膜动脉平滑肌sGCα和sGCβ基因表达和构建标准曲线。结果:人肠系膜动脉平滑肌存在sGCα和sGCβ基因表达,质粒标准品经过PCR鉴定并测序,与数据库公布的序列完全一致,标准曲线线性关系好,相关系数R2>0.99。结论:建立了稳定的定量检测方法,并成功用于检测人肠系膜动脉平滑肌sGCα和sGCβ基因表达,构建质粒标准品能用于后续实验。

芒柄花黄素对人胃癌细胞系SGC7901生长、增殖及侵袭影响

目的:探讨芒柄花黄素(Form)对人胃癌细胞株SGC7901的作用及机制。方法:用不同浓度(0、20、40、80μmol/L)Form处理SGC7901后,采用Hoechst、MTT、流式细胞术等检测细胞抑制率、细胞周期、细胞核形态及凋亡。采用蛋白质印迹检测β-Catenin、p-β-Catenin、Cyclin D1、CDK4及p-AKT、AKT、BCL-2、BAX、Caspase3等蛋白的表达,RT-PCR检测BCL-2、CDK4、CDK6、AKT、Cyclin D1及BAX、Caspase3等m RNA表达。结果:Form抑制SGC7901细胞的增殖,呈浓度和时间依赖性。Hoechst结果表明,相比于对照组(0μmol/L),实验组Form(20、40、80μmol/L)作用48 h后,细胞核固缩、溶解,破裂后呈颗粒状聚集。流式细胞术结果显示,不同浓度Form处理48 h,细胞凋亡率分别为17.0%、21.5%、32.5%,呈浓度依赖性。RT-PCR结果显示,SGC7901中Caspase3、BAX m RNA表达量随Form浓度增加而上升(P<0.01);BCL-2、CDK4、CDK6、AKT、Cyclin D1的m RNA表达量逐渐降低(P<0.01)。WB结果表明,SGC7901细胞中β-Catenin、p-β-Catenin、Cyclin D1、CDK4以及p-AKT、AKT、BCL-2等蛋白的相对表达量随Form浓度增加而降低(P<0.01);Caspase3、BAX等蛋白表达逐渐上升(P<0.01)。结论:Form具有促进SGC7901细胞凋亡的作用;其机制可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号,活化Caspase家族实现的。

黄芪对SGC7901胃癌细胞COX-1、COX-2、VEGF和PGE_2表达的影响

目的:观察黄芪对人胃癌SGC7901细胞中COX-1、COX-2、VEGF和PGE_2表达的影响。方法:采用MTT试验观察黄芪对胃癌细胞的抑制作用,用RT-PCR以及Western blot方法研究加药后人胃癌细胞COX-1、COX-2基因及其蛋白表达的变化。用ELISA方法检测培养基中VEGF、PGE_2的表达情况。结果:黄芪能抑制人胃癌细胞生长,呈一定的量效特征;并能抑制人胃癌细胞COX-2、VEGF和PGE_2的表达。结论:黄芪抗肿瘤的机制可能是通过抑制COX-2,进而抑制其下游产物PEG_2的表达及使VEGF表达下调,从而抑制肿瘤的生长。

三氧化二砷(As_2O_3)诱导人胃腺癌SGC7901细胞程序化死亡并降低c-myc基因的表达

目的：探讨Ａｓ２Ｏ３对胃腺癌ＳＧＣ７９０１细胞系的生物学效应及机制。方法：通过ＭＴＴ还原法检测Ａｓ２Ｏ３对该细胞系存活率的影响，从光学显微镜形态观察，流式细胞仪分析，ＤＮＡ凝胶电泳，细胞凋亡原位检测（ＴＵＮＥＬ）进行细胞凋亡的检测。半定量ＲＴＰＣＲ检测基因表达。结果：Ａｓ２Ｏ３处理ＳＧＣ７９０１细胞后，细胞的存活率明显降低，光学显微镜下可见到明显的凋亡细胞，流式细胞仪测定细胞周期的Ｇ１期前有亚２倍体的凋亡峰，ＤＮＡ凝胶电泳显示出典型的凋亡特征：ＤＮＡ有规律断裂形成的梯状图谱，细胞凋亡原位检测发现ＤＮＡ的断裂，并降低细胞ｃｍｙｃ基因的表达。结论：Ａｓ２Ｏ３能诱导人胃腺癌ＳＧＣ７９０１细胞程序化死亡并可能通过降低ｃｍｙｃ基因的表达。

熊果酸抑制胃癌细胞SGC7901增殖和诱导细胞凋亡的机制

背景与目的:研究表明熊果酸(ursolicacid,UA)可抑制多种肿瘤细胞的增殖并诱导凋亡,但目前有关UA作用于胃癌细胞的报道较为少见。环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在多种癌前病变及癌组织中高表达。本研究旨在探讨熊果酸抑制人胃癌细胞SGC7901增殖和诱导凋亡的机制。方法:MTT法检测0、10、20、30、40!mol/LUA作用不同时间对SGC7901细胞增殖的影响;荧光染料Hoechst33258染色观察不同浓度UA作用24h细胞凋亡情况;流式细胞仪检测细胞周期变化及凋亡率;Westernblot法检测COX-2蛋白以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达。放射免疫分析法测定COX-2催化产物前列腺素E2(prostaglandinE2,PGE2)。结果:20～40!mol/LUA可抑制SGC7901细胞的增殖,并呈浓度和时间依赖性,作用12、24、36、48h的半数抑制浓度(IC50)分别为(57.50±1.18)!mol/L、(34.28±2.05)!mol/L、(27.54±1.11)!mol/L、(24.83±1.02)!mol/L;20～40!mol/LUA作用24h后,SGC7901细胞被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率分别为(9.10±2.39)%、(26.30±1.25)%、(35.20±2.26)%;同时COX-2蛋白表达及其催化生成产物PGE2浓度下降,凋亡相关蛋白Bcl-2表达减少,Bax无明显变化。结论:熊果酸对SGC7901细胞具有增殖抑制及诱导凋亡作用,其机制可能与阻滞细胞周期、抑制COX-2表达进而减少PGE2生成以及下调凋亡相关蛋白Bcl-2表达有关。

芍药苷对人胃癌SGC7901/VCR细胞增殖抑制作用及其机制研究

目的:探索芍药苷(paeoniflorin)对人胃癌SGC7901/VCR细胞增殖抑制及凋亡的影响,并研究其可能的分子机制。方法:应用不同浓度芍药苷作用SGC7901/VCR细胞48h后,采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;免疫蛋白印迹技术(Western blot)分析Bcl-2、Bax及细胞核内NF-κBp65蛋白的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)进一步确定核内NF-κB的转录活性。结果:芍药苷对SGC7901/VCR细胞生长有明显的抑制作用并促进其凋亡,这种作用呈现剂量依赖性;Westernblot和ELISA均证实芍药苷对NF-κB有明确抑制作用;随着芍药苷浓度增加NF-κB和Bcl-2表达水平逐渐下调(P<0.01),但对Bax没有明显影响。结论:芍药苷可明显抑制SGC7901/VCR细胞的增殖,诱导其凋亡;其机制部分可能与阻断NF-κB通路所介导的Bcl-2分子上调有关。

熊果酸体外抗胃癌细胞SGC7901机制的研究

目的 探讨熊果酸（ursolic acid,UA）体外抑制胃癌细胞SGC7901生长的作用机制.方法 体外培养人胃癌细胞株SGC7901,MTT法观察不同浓度UA作用不同时间对细胞生长的影响;不同浓度UA（0～40 μmol/L）处理SGC7901细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态变化;荧光染料Hoechst 33258染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western Blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果 20～40 μmol/L UA可抑制SGC7901的生长,并呈浓度和时间依赖性,其作用12、24、36、48 h的IC50分别为（57.50±1.18）、（34.28±2.05）、（27.54±1.11）、（24.83±1.02）μmol/L.20～40 μmol/L UA作用24 h后,SGC7901细胞变圆,出现不同程度的漂浮;同时细胞被阻滞于G0/G1期并发生凋亡,随药物浓度升高,凋亡率增加,凋亡相关蛋白Bcl-2表达减少,Bax无明显变化.结论 熊果酸对SGC7901细胞具有较强的抗肿瘤活性,其机制可能与细胞毒作用、增殖抑制作用以及下调凋亡相关蛋白Bcl-2表达而促进凋亡有关.

土槿皮乙酸诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡及机制

目的研究土槿皮乙酸(pseudolaric acid B,PAB)诱导人胃癌SGC7901细胞株凋亡及其分子机制。方法MTT法检测细胞增殖的抑制作用,电镜观察细胞的形态学变化,An-nexinV/PI双染法检测细胞早期凋亡率,罗丹明染色流式细胞仪检测线粒体膜电位,Western blot检测PAB对caspase-3、caspase-9剪切片断,bcl-2、bax蛋白表达,及对MAPKs通路相关蛋白,包括p-ERK、ERK、p-JNK、JNK、p-p38、p38表达的影响。结果PAB对人胃癌SGC7901细胞株生长具有明显的抑制作用,并呈时间和浓度依赖性。电镜结果显示0.5μmol·L-1PAB作用24 h后,核染色体聚集、边集,72 h凋亡小体形成。用0.5μmol·L-1PAB处理SGC7901细胞12、24、48、72 h,AnnexinV/PI双染检测细胞的早期凋亡,其早期凋亡率分别为10.06%、15.98%,23.12%,29.06%,而对照组的早期凋亡率仅为0.9%(P<0.05)。罗丹明染色检测线粒体膜电位,0.5μmol·L-1浓度的PAB作用于SGC7901细胞12 h后,线粒体膜电位开始下降并随时间延长而逐渐增加,12、24、48、72h线粒体膜电位下降分别为26.36%、33.26%、41.28%、52.13%(P<0.05或0.01)。0.5μmol·L-1浓度的PAB作用于SGC7901细胞24h后,Western blot法检测发现caspase-3、caspase-9 2种蛋白均出现断裂片断,并随着时间的增加断裂更明显。进一步研究发现,PAB处理SGC7901细胞后,bax蛋白表达升高,bcl-2蛋白表达下降,同时JNK、p38的磷酸化水平明显升高,ERK表达水平下降。结论PAB具有明显的细胞毒作用,能诱导SGC7901细胞凋亡,JNK和p38途径激活后通过对bax和bcl-2表达的调控,导致线粒体膜电位的下降,进而激活caspase最终导致细胞死亡,可能是其诱导胃癌细胞凋亡的分子机制之一。

非甾体类抗炎药对胃癌SGC7901细胞增生及环氧合酶活性的影响

目的:探讨非甾体类抗炎药(nonsteroidal anti-inflammatory drugs,NSAID)对体外培养的胃癌细胞SGC7901生长及环氧合酶活性的作用。 方法:用MTF法观察阿司匹林、尼美舒利对胃癌细胞SGC7901生长的影响;免疫细胞化学方法检测Ki-67及COX-2蛋白表达;采用放射免疫分析法测定细胞培养上清PGE2水平。 结果:阿司匹林和尼美舒利呈时间、剂量依赖性方式抑制细胞增生,减少Ki-67蛋白表达。胃癌细胞SGC7901COX-2蛋白表达阳性,并伴有PGE_2释放,尼美舒利可减少PGE_2产生,但对COX-2蛋白表达无影响。 结论:阿司匹林和尼美舒利均可抑制COX-2表达阳性的胃癌细胞SGC7901生长,尼美舒利通过抑制COX-2酶活性而减少PGE_2释放,该研究提示COX-2可能在胃癌细胞SGC7901增生中起重要作用。

MnSOD基因转染对SGC79001胃癌细胞增殖的影响

目的 观察改变胞内MnSOD基因表达水平对SGC7901胃癌细胞增殖的影响。方法 采用电穿孔方法将反义和正义MhSOD cDNA真核表达载体pHβA-SOD(-)/pHβA-SOD(+)转染SGC7901胃癌细胞,400mg/LG418筛选稳定表达克隆并用RT-PCR及Western杂交法鉴定后扩大培养。用pHβA空质粒转染作为对照。放射免疫法检测正义、反义及空载SGC7901胃癌细胞株内的铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD,SOD1)蛋白含量。分别用直接细胞计数法、四唑蓝(MTT)比色法、平皿克隆形成率试验及裸鼠移植瘤模型测定3组细胞在体外、体内的增殖活性。结果 与空载组(Vector—7901)相比,转染正义质粒的MnSOD-7901胃癌细胞呈现抑增殖效应:(1)生长曲线示增殖速度减慢;(2)在平皿上的集落形成能力下降;(3)在裸鼠体内的成瘤性明显受抑制。转染反义质粒的MnSOD-AS7901胃癌细胞则出现促增殖效应:(1)生长曲线示增殖速度加快;(2)在平皿上的集落形成率上升;(3)裸鼠移植瘤生长加速。结论 通过基因转染提高胞内MnSOD的表达可抑制胃癌细胞的增殖,MnSOD可能是胃癌基因治疗的一个新靶点。

姜黄素诱导人胃癌SGC7901细胞自噬性凋亡的研究

目的观察姜黄素体外诱导人胃癌SGC7901细胞自噬性凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制。方法用不同浓度的姜黄素处理SGC7901细胞,MTT法检测细胞增殖;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverin,MDC)荧光染色和Hoechst33342荧光染色观察细胞自噬和凋亡的发生;流式细胞术检测细胞凋亡率;Westernblot检测细胞凋亡相关蛋白NF-κB、自噬相关蛋白Beclin1及LC3Ⅱ的表达。结果姜黄素可呈剂量依赖性明显抑制SGC7901的生长。MDC染色显示,40μmol/L姜黄素在作用12 h后即可诱导SGC7901细胞发生自噬,24 h自噬减少;Hoechst33342荧光染色显示,40μmol/L姜黄素诱导凋亡在24 h最明显;流式细胞术显示,40μmol/L姜黄素作用24 h时SGC7901细胞凋亡率明显增加。Western blot检测显示,姜黄素诱导SGC7901细胞自噬性凋亡过程中,凋亡相关蛋白NF-κB、自噬相关蛋白Beclin1及LC3的表达均上调。结论姜黄素通过诱导自噬性凋亡抑制人胃癌细胞SGC7901的生长,其机制与NF-κB、Beclin1及LC3蛋白的表达上调有关。

藤梨根提取物对人胃癌SGC7901细胞增殖抑制的影响

目的研究藤梨根提取物对胃癌细胞SGC7901的抑制作用及其机制。方法用MTT法检测不同剂量的藤梨根提取物对人胃癌细胞SGC7901的增殖抑制作用,并用流式细胞仪分别检测细胞周期以及凋亡程度。结果在浓度范围25~200μg/ml范围内,不同浓度的藤梨根提取物对胃癌细胞SGC7901均有抑制作用,且有一定的浓度依赖性。且在藤梨根提取物细胞浓度为53、86以及142μg/ml作用48 h后SGC7901在S期比例增多,凋亡率明显增加。结论藤梨根提取物可能通过干预细胞周期和凋亡对胃癌细胞SGC7901增殖起抑制作用,同时与药物浓度有一定的依赖性。

莪术对SGC7901胃癌细胞COX-1,COX-2,VEGF和PGE_2表达的影响

目的:观察莪术对人胃癌SGC7901细胞 COX-1,COX-2,VEGF和PGE2的影响．方法:MTT法观察莪术对胃癌细胞的抑制作用,绘制其抑制率曲线,选取抑制率为25％时的药物浓度作为加药浓度,用RT-PCR以及Western blot方法检测加药后人胃癌细胞 COX-1,COX-2基因及其蛋白表达的变化．用ELISA方法检测加药后培养基中VEGF和 PGE2的表达情况．结果:莪术对胃癌细胞有一定的抑制作用,且随着浓度的增加,其抑制作用加强;将RT-PCR 产物经电泳分析,证实胃癌细胞中有COX-1、 COX-2基因的表达,对各条带进行灰度分析发现:中西药对COX-1和COX-2均有抑制作用,莪术对COX-2的抑制作用大于塞来昔布;Western blot曝光结果可见,COX-1各组在 70 kDa处可见特异性的蛋白条带,COX-2各组在80 kDa处可见特异性的蛋白条带．对各条带进行灰度分析发现:各组中西药对COX-2 均有明显的抑制作用,而对COX-1则无抑制作用,其中,莪术对COX-2的抑制作用要强于celecoxib;西药celecoxib及莪术组可明显降低人胃癌细胞VEGF的表达,与细胞组相比,其差别有统计学意义(91．0±18．2,127．8 ±12．1 ng／L vs162．0±15．1 ng／L,P<0．01);西药celecoxib组PGE2表达低于细胞组,但其差别无统计学意义,莪术可明显降低人胃癌细胞PGE2的表达,与细胞组相比,其差别有统计学意义(67．5±6．9 ng／L vs 78．7±5．6 ng／L, P<0．01)．结论:莪术可能是通过抑制COX-2及其下游 PGE2表达,使VEGF表达下调而抑制肿瘤．

菟丝子醇提物对胃癌SGC7901细胞的生长抑制作用研究

目的探讨菟丝子（CCL）醇提物对人胃癌SGC7901细胞生长的抑制作用。方法以不同浓度（10、50、100 mg/L）的菟丝子作用于人胃癌SGC7901细胞,同时设二甲基亚砜（DMSO）和RPMI1640培养液作为对照组。采用噻唑蓝（MTT）法检测菟丝子对人胃癌SGC7901细胞的生长抑制情况,通过对SGC7901细胞周期测定,探讨菟丝子对细胞增殖作用的影响。结果菟丝子对SGC7901细胞生长有明显抑制作用,且随着剂量的增高（10~100 mg/L）及作用时间的延长,细胞增殖抑制率亦增高（P〈0.01）。100 mg/L的菟丝子作用不同时间（12、24、36 h）,处于G0/G1期、S期的细胞所占百分率比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论菟丝子醇提取物能够抑制人胃癌SGC7901细胞的生长。可能是通过影响人胃癌SGC7901细胞内DNA复制和合成,抑制细胞正常分裂,阻滞细胞进入S期,从而使细胞在G1期堆积,出现G2/M期阻滞,有丝分裂终止,从而抑制细胞增殖。

β-榄香烯对人胃癌细胞SGC7901的抑制作用及部分机制

目的研究β-榄香烯对胃癌细胞SGC7901的增殖、凋亡、迁移及赖氨酰氧化酶（LOX）的影响。方法体外培养人胃癌SGC7901细胞,MTS法及流式细胞术检测不同浓度β-榄香烯对SGC7901细胞增殖与凋亡的影响,划痕实验、Transwell小室迁移实验检测β-榄香烯对细胞迁移的影响,酶标仪法检测β-榄香烯对LOX酶活性的影响,Western blot法检测LOX蛋白表达的变化。结果β-榄香烯（50~800μmol/L）对SGC7901细胞的抑制作用呈时间依赖和浓度依赖性。β-榄香烯（100、200、400、800μmol/L）处理SGC7901细胞24 h后,凋亡率分别为8.1%、8.2%、18.7%、41.9%,与对照组（4.9%）比较,凋亡率明显升高（P〈0.05）。划痕实验、Transwell实验结果显示β-榄香烯对SGC7901细胞的迁移有明显抑制作用（P〈0.05）。β-榄香烯浓度依赖性地降低SGC7901细胞LOX酶活性（P〈0.05）。Western blot结果显示β-榄香烯可下调SGC7901细胞LOX的蛋白表达。结论β-榄香烯对胃癌细胞SGC7901有明显抑制增殖、迁移及促进凋亡作用,抑制LOX酶活性和蛋白表达可能是其发挥作用的机制之一。

As_2O_3对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素耐药性逆转作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素(ADM)耐药性的逆转作用和对Pgp、GSTπ表达的影响。方法以胃癌多药耐药细胞株SGC7901/ADR为靶细胞,用MTT法检测SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性,用流式细胞仪检测细胞内药物浓度及免疫组织化学法检测细胞Pgp、GSTπ表达。结果0.4～0.8μmol/LAs2O3对耐药细胞SGC7901/ADR无明显毒性(P>0.05)。As2O3可下调Pgp、GSTπ表达,提高SGC7901/ADR细胞内ADM浓度,增加SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性。结论As2O3能够抑制SGC7901/ADR细胞Pgp、GSTπ表达,增加细胞内ADM药物浓度而部分逆转其对ADM的耐药性。

苦参碱对胃腺癌细胞SGC7901黏附和移动的影响

目的:探讨不同浓度苦参碱对SGC7901细胞黏附和移动能力的影响。方法:5,50,100,250和500 mg/L苦参碱作用SGC7901细胞24 h后,黏附实验检测细胞黏附率,划痕损伤实验(Wound healing assay)检测迁移速度,在Transwell培养体系中,观察苦参碱对SGC7901细胞的抑制作用,PKA试剂盒检测PKA活性。结果:5,50,100,250和500 mg/L苦参碱处理24 h后,SGC7901细胞黏附率分别为78.56%,44.28%,42.48%,39.75%和31.54%,总体呈下降趋势,50 mg/L组与5 mg/L和500 mg/L组比较差异有显著性(P<0.01);与100 mg/L和250 mg/L组比较差异无显著性(P>0.05)。50 mg/L苦参碱作用24 h后SGC7901细胞迁移速度显著降低(P<0.01),Transwell培养体系中,苦参碱组上层迁移到下层的细胞明显少于不加苦参碱组(P<0.01),且PKA活性明显降低(P<0.01)。结论:苦参碱能抑制SGC7901细胞黏附和运动。

顺铂诱导人胃癌细胞SGC7901和人肝癌细胞HepG2凋亡的细胞形态学变化的比较

目的观察顺铂诱导人胃腺癌细胞SGC7901和人肝癌细胞HepG2细胞凋亡的细胞形态学的异同并探讨其意义。方法用倒置显微镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞经顺铂处理后的形态学改变。采用流式细胞术研究CDDP对两株肿瘤细胞诱导凋亡中DNA含量的影响。结果经顺铂处理后,两株肿瘤细胞均表现出一些共同的凋亡形态学特征,如细胞及细胞核皱缩,微绒毛消失,细胞膜皱缩但完整,细胞内荧光强度增强。细胞超微结构变化如线粒体肿胀,胞质空泡化。但两者在细胞核形态方面表现出较大的差异;SGC7901表现为核染色质呈团块状或环状,聚集于核膜下;而HepG2主要表现为核碎裂、核膜崩解,核染色质呈梅花状散落在细胞中和一些细胞器通过细胞出芽裂解成由细胞膜包绕的凋亡小体并被周围细胞吞噬。在两者的流式细胞DNA的直方图上均检测到了亚二倍体峰。结论顺铂可诱导SGC7901和HepG2产生不同形态的细胞凋亡,其中SGC7901主要表现为核固缩,HepG2表现为核碎裂。这种差异具有重要的生理意义。

siRNA对SGC7901/VCR细胞mdr1基因沉默效果的影响因素分析

目的分析siRNA沉默人胃癌SGC7901/VCR细胞mdr1基因效果的相关因素。方法设计并体外转录合成4条靶向mdr1的siRNA(mdr1si326、mdr1si1513、mdr1si2631和mdr1si3071),转染SGC7901/VCR细胞,用RTPCR和免疫印迹检测mdr1mRNA和Pgp的表达、流式细胞仪检测细胞内阿霉素的蓄积和MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性,综合这4方面结果评价4条siRNA的沉默效果情况;用分子生物学软分析siRNA沉默效果的影响因素。结果沉默效果最好的mdr1si326和较好的mdr1si2631靶序列编码Pgp的跨膜区而且自身无茎和袢;沉默效果较差的mdr1si3071和最差的mdr1si1513靶序列编码Pgp的胞内区,前者自身成茎和成袢。沉默效果最好的mdr1si326和较好的mdr1si2631靶序列在靶位点和靶位点外间有较少的碱基配对和氢键。siRNA的沉默效果与siRNA3’5’端3个碱基中的A/U数量、N1和N19、GC含量间无规律可循。结论siRNA沉默SGC7901/VCR细胞mdr1的效果与靶序列的结构关系密切。

菟丝子醇提物对胃癌SGC7901细胞凋亡的影响

目的探讨菟丝子(CCL)醇提物诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的作用。方法以CCL(10、50、100 mg/L)作用于人胃癌SGC7901细胞,同时设DMSO和培养液作为对照组。采用HE染色法观察细胞形态变化,琼脂糖凝胶电泳法分析SGC7901细胞的DNA片段化。结果 HE染色镜下可见较为典型的凋亡形态学变化:细胞变小,核皱缩,荧光强度增强,核仁消失,新月体样改变,凋亡小体形成等;琼脂糖电泳出现明显的"梯状"条带,并存在剂量依赖性,而对照组未出现梯状条带。结论 CCL能够诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡。