人血清去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H2亚基(sH2a)酶联免疫检测法的建立及临床应用

目的探讨肝损伤患者血清中去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)的H2亚基(sH2a)水平和肝损伤进程的相关性。方法纳入苏州九龙医院210例血清样本,其中70例肝损伤组患者,包括肝硬化、病毒性肝炎、脂肪肝,同时纳入140例对照组样本,包括高脂、溶血、黄疸、自身免疫性疾病、健康人。检测上述人群血清sH2a蛋白水平,对ELISA结果和临床诊断结果进行统计学分析。结果①140例对照组和70例肝损伤组的血清样本sH2a蛋白水平分别为105.92±53.41 ng/ml和69.25±27.45 ng/ml,差异有统计学显著性意义(F=14.375,t=5.397,P=0.000)。②sH2a蛋白水平诊断肝损伤的敏感度为68.57%(95%CI:56.37%～79.15%),特异度为82.86%(95%CI:75.58%～88.70%),总符合率为78.10%(95%CI:71.88%～83.49%),KAPPA系数:0.510 6(95%CI:0.387 7～0.633 6)。结论血清sH2a ELISA检测试剂盒的符合率达到临床预期要求,可以作为新的血清标志物达到辅助诊断肝损伤相关疾病的效果。

外周血可溶性sH2a在早期诊断肝纤维化程度中的价值

目的 研究血清肝纤维化标志物sH2a用于诊断慢性肝病患者早期肝纤维化的临床诊断价值及意义.方法 收集67例行肝穿刺活检的慢性乙型肝炎、脂肪性肝病或两者合并患者作为研究对象,通过sH2a试剂盒检测外周血中可溶性sH2a的含量,与实验室指标及肝组织病理纤维化程度进行比较,并绘制特征曲线（ROC）,计算曲线下面积（AUC）,分析其敏感性和特异性以评估该血清标志物对早期肝纤维化的诊断价值.结果 患者血清sH2a水平与肝脏纤维化程度呈负相关,且无纤维化（S0期）、早期纤维化（S1-S2期）和中晚期纤维化（S3-S4期）3组之间的差异有统计学意义（P＜0.05）.预测有无纤维化发生时,最佳诊断阈值为0.79,敏感性和特异性分别为63％、80％,AUC为0.772;评估有无明显纤维化发生时,当sH2a为0.77时,AUC为0.806,诊断灵敏度为85.7％,特异性为72.7％.结论 运用sH2a评估患者肝脏纤维化程度,可有效诊断患者肝脏早期纤维化,在区分有无明显纤维化上诊断价值更高,为临床诊断及治疗提供可靠依据.

血清可溶性sH2a联合sICAM-1对非酒精性脂肪性肝病肝纤维化的诊断价值分析

[目的]探讨血清可溶性sH2a联合sICAM-1对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)肝纤维化的诊断价值。[方法]本院收治NAFLD患者98例,根据肝穿刺活检术病理检查结果分为S0组、S1-S2组、S3-S4组。测定3组患者ALT、AST、GGT、ALB、总胆固醇、sH2a、sICAM-1水平,绘制特征曲线(ROC),计算曲线下面积(AUC),分析其敏感性和特异性以评估sH2a联合sICAM-1对NAFLD肝纤维化的诊断价值。[结果]S1-S2组sH2a低于S0组,S3-S4组sH2a低于S0、S1-S2组,差异有统计学意义(t=23.56、19.56、22.19,P<0.05),S1-S2组sICAM-1高于S0组,S3-S4组sICAM-1高于S0、S1-S2组,差异有统计学意义(t=24.78、26.33、21.48,P<0.05)。各组ALT、AST、GGT、ALB、总胆固醇组间比较差异无统计学意义。sH2a与肝脏病理纤维化分期负相关关系明显,sICAM-1与肝脏病理纤维化分期正相关关系明显,差异有统计学意义(r=-0.42、0.56,P<0.05)。ALT、AST、GGT、ALB、总胆固醇与肝脏病理纤维化分期相关关系不明显,差异无统计学意义。sH2a、sICAM-1、sH2a+sICAM-1诊断肝纤维化的AUC曲线下面积分别为0.773、0.762、0.811,sH2a+sICAM-1诊断方法的灵敏度略高于sH2a、sICAM-1单独诊断,特异度略低于sH2a、sICAM-1单独诊断,但差异均无统计学意义。[结论]血清可溶性sH2a联合sICAM-1诊断NAFLD肝纤维化具有较高的灵敏度和特异性,值得在临床上推广应用。

SHP2表达变化对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝组织中Akt表达的影响

目的 探讨含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)过表达及低表达对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠肝组织中蛋白激酶B(Akt)的影响。方法选取160只健康雄性SD大鼠,随机分为对照组、模型组、AdGFP组、Ad-SHP2组和Ad-shRNA/SHP2组,每组32只。采用腹腔注射CCl4法构建大鼠肝纤维化模型,经大鼠尾静脉分别将表达绿色荧光蛋白(GFP)的空病毒Ad-GFP、表达野生型SHP2及GFP的腺病毒Ad-SHP2、表达GFP并携带靶向SHP2的短发夹RNA(shRNA)的腺病毒Ad-shRNA/SHP2注入大鼠体内。各组分别于造模第2、4、6、8周随机选取8只大鼠,留取肝组织标本。采用实时荧光定量PCR法检测各组大鼠肝组织中SHP2、Akt的mRNA表达水平,采用蛋白质印迹法检测各组大鼠肝组织中SHP2、Akt及磷酸化Akt(p-Akt)的蛋白表达水平,采用H-E染色法观察各组大鼠肝组织的病理变化,采用Masson三色染色法观察各组大鼠肝组织的胶原沉积情况。结果 靶向SHP2的shRNA及外源性野生型SHP2基因成功导入肝纤维化大鼠体内,并使大鼠肝组织中SHP2呈低表达或过表达。与模型组及Ad-GFP组比较,Ad-SHP2组大鼠的肝纤维化程度加重,而Ad-shRNA/SHP2组大鼠的肝纤维化程度则减轻。在同一造模时间点(第2、4、6、8周)对各组大鼠肝组织中Akt的m RNA和蛋白表达水平,以及p-Akt蛋白表达水平进行比较,结果显示Ad-GFP组、Ad-SHP2组、Ad-shRNA/SHP2组及模型组均显著高于对照组(P均<0.05),而各时间点的Ad-GFP组、Ad-SHP2组、Ad-shRNA/SHP2组及模型组的Akt表达水平差异均无统计学意义(P均>0.05);与模型组及Ad-GFP组大鼠肝组织中p-Akt表达水平相比较,AdshRNA/SHP2组在各时间点均显著降低(P均<0.05),Ad-SHP2组在各时间点均显著升高(P均<0.05),模型组与Ad-GFP组的p-Akt表达水平差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 在CCl4诱导的大鼠肝纤维化病程中,肝组织中SHP2过表达可通过促进Akt磷酸化增强Akt的活性,而肝组织中SHP2低表达则可通过抑制Akt磷酸化减弱Akt的活性。

miR-484通过SORBS2/MEK-ERK通路调控乳腺癌细胞增殖、转移和自噬

为了分析miR-484在乳腺癌组织和细胞中的表达情况,研究miR-484在乳腺癌细胞增殖、转移和自噬过程中的作用机制,首先,采用GEO数据库分析乳腺癌组织中差异表达miRNA谱,并用实时荧光定量PCR在临床乳腺癌组织及其配对的癌旁组织中检测miR-484的表达情况;其次,利用miR-484模拟物、抑制剂检测miR-484对MCF-7乳腺癌细胞增殖、转移和自噬能力的影响;再次,预测miR-484的调控基因并进行验证,同时构建Sorbin和SH3结构域包含蛋白2(Sorbin and SH3 domain-containing protein 2,SORBS2)过表达载体,检测SORBS2对乳腺癌细胞增殖、转移和自噬能力的影响;最后,用Western-blot分析miR-484调控下MCF-7细胞中丝裂原活化的胞外信号调节激酶(mitogen-activated extracellular signal-regulated kinase,MEK)/p-MEK和胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)/p-ERK的蛋白质含量变化。结果显示,miR-484在乳腺癌组织及细胞中高表达,具有提高乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力以及降低乳腺癌细胞自噬能力的作用;而且,miR-484可通过下调SORBS2并激活MEK/ERK通路参与乳腺癌的发生发展。

SH2B1与EMT相关蛋白在NSCLC中的表达及相关性分析

研究接头蛋白SH2B1在非小细胞肺癌(NSCLC)癌组织中的表达及其与上皮细胞间充质转化(EMT)之间的关系,探讨SH2B1是否参与了NSCLC的EMT过程及可能的作用机制,以期为NSCLC的诊疗提供新的分子生物靶点。方法 分别采用免疫组化法(ABC三步法)检测63例NSCLC癌组织和相应的正常肺组织中SH2B1及EMT相关蛋白β-catenin、N-cadherin、E-cadherin、Vimentin的表达情况,分析SH2B1、β-catenin、N-cadherin、E-cadherin、Vimentin与NSCLC临床病理特征之间,以及SH2B1与EMT相关蛋白之间的关系。结果 免疫组织化学检测结果显示: SH2B1,N-cadherin,Vimentin在NSCLC癌组织中表达高于正常组织(P<0.05)。β-catenin在癌组织中主要表达于胞核,在正常组织中表达于包膜及胞浆。E-cadherin主要表达于包膜,在正常组织中高于癌组织(P<0.05)。SH2B1、β-catenin、N-cadherin、E-cadherin、Vimentin的表达与淋巴结转移,TNM分期有关,与年龄、性别、分化类型均无关。SH2B1与EMT相关蛋白的表达在NSCLC中成正相关。结论 SH2B1的表达与NSCLC的EMT相关蛋白的表达具有相关性,提示SH2B1的表达可能参与了NSCLC的EMT过程。 。

非小细胞肺癌组织中TP酶激活蛋白SH3功能结合蛋白2的表达及临床意义

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织和细胞中TP酶激活蛋白SH3功能结合蛋白2(G3BP2)的表达情况,分析G3BP2对NSCLC细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法收集NSCLC患者120例,腺癌47例,鳞状细胞癌73例。免疫组织化学检测腺癌、鳞状细胞癌组织中G3BP2的表达情况,分析G3BP2表达与患者临床病理特征的关系。蛋白免疫印迹实验和qRT-PCR检测SPC-A-1、16HBE细胞中G3BP2的表达。对NCI-H226、SPC-A-1细胞转染si-NC、si-G3BP2质粒,检测敲低G3BP2对细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。结果腺癌组织和鳞状细胞癌组织中G3BP2的阳性表达率无统计学差异(P>0.05),G3BP2阳性与TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。NCI-H226和SPC-A-1细胞中G3BP2蛋白及mRNA的表达高于16HBE细胞。敲低G3BP2可明显抑制NCI-H226、SPC-A-1细胞的增殖和侵袭并增强细胞凋亡。结论G3BP2在NSCLC组织中的阳性表达与TNM分期、淋巴结转移有关,敲低G3BP2的表达可显著抑制NSCLC的进展。

结合基因关联和转录组分析鉴定小麦成株期抗条锈病位点YrZ501-2BL的候选基因

【目的】小麦条锈病是小麦的主要病害之一,每年都会对小麦产量安全造成严重危害,挖掘小麦抗条锈病基因,为小麦抗条锈病种质创新和揭示小麦抗条锈病遗传机制奠定基础。【方法】利用多组学手段结合全基因关联分析(GWAS)开展对小麦成株期抗条锈病性状的解析。首先对411份来自CIMMYT和ICARDA的春小麦进行全基因组关联分析,在小麦2BL染色体上定位到一个主效的成株期抗条锈病位点,并利用含有该位点的抗病材料Z501及感病亲本晋麦79的双亲群体进行连锁作图,成功验证了该位点抗性的稳定性,暂命名为YrZ501-2BL。在此基础上,通过基因注释、比较基因组分析、转录组分析和候选基因的关联分析对目标区间筛选候选基因。【结果】综合GWAS和连锁作图结果,将YrZ501-2BL锁定在小麦2B染色体0.26 Mb(575.706—576.587 Mb)范围内,根据中国春参考基因组注释信息分析,该区间含有12个基因,其中,高可信基因6个;利用在线网站,将目标区间所在的中国春参考基因组与其他已公布的不同倍性小麦基因组进行比较,发现该区间的6个高可信小麦基因基本都能在其他小麦材料中找到同源基因,且基因排列顺序相同,说明该区间可能不存在较大片段的插入、缺失、倒位等现象,可以利用参考基因组信息进行候选基因预测;结合抗病亲本Z501和感病亲本晋麦79的成株期接种条锈菌后的转录组数据,发现只有TraesCS2B02G406400、TraesCS2B02G406500和TraesCS2B02G406600受诱导表达,且抗感病亲本存在表达差异。根据中国春基因组注释,三者分别编码GATA转录因子、SH3P2蛋白和锌指蛋白。通过进一步的候选基因关联分析,发现只有SH3P2蛋白中存在与条锈病表型显著性差异的SNP位点(G/A),虽然该位点(G1369A)在2个可变剪切的转录本中均未引起氨基酸编码变化(TCG和TCA均编码丝氨酸),但可能与可变剪切有关,同时该位点(G1369A)的不同单倍型表型之间也存在极显著差异,进一步分析发现,在G1369A位点下游还有2个引起氨基酸改变的变异位点G1377A和G1431A,分别引起缬氨酸(GTT)到异亮氨酸(ATT)和缬氨酸(GTG)到甲硫氨酸(ATG)的改变,但这两个位点在455份重测序材料中所占比例只有0.87%,属于稀有变异,因此,未进行显著性检验。综上,推测TraesCS2B02G406500为YrZ501的重要抗病候选基因;此外,针对YrZ501候选区间的差异SNP开发了相应的AQP标记,可用于辅助选择,为下一步小麦抗锈病分子育种应用提供了标记资源。【结论】利用多组学整合关联分析的方法,成功在小麦2B染色体上挖掘到1个抗条锈病候选基因TraesCS2B02G406500。

非小细胞肺癌患者癌组织和血清中SKA3、G3BP2、PROX1表达与临床治疗的关系

目的探讨非小细胞肺癌患者癌组织和血清中癌基因纺锤体与着丝粒相关蛋白(SKA)3、TP酶激活蛋白SH3结合蛋白(G3BP)2和Prospero相关同源异形盒蛋白(PROX)1的表达与术后治疗的临床关系。方法选择内蒙古民族大学附属医院微创手术的非小细胞肺癌患者102例为研究对象。采用酶联免疫吸附试验检测非小细胞肺癌患者手术前后血清中SKA3、G3BP2、PROX1蛋白含量;采用免疫组织化学染色法检测非小细胞肺癌患者癌组织、癌旁组织中SKA3、G3BP2、PROX1的蛋白阳性表达强度,分析癌组织中各指标与肿瘤临床病理特征的关系。结果与术前比较,术后非小细胞肺癌患者血清中SKA3、G3BP2、PROX1的蛋白含量均明显降低(P<0.05);非小细胞肺癌患者癌组织中SKA3、G3BP2、PROX1的蛋白阳性表达强度明显高于癌旁组织(P<0.05);不同组织学分型的非小细胞肺癌患者SKA3、G3BP2、PROX1的表达差异无统计学意义(P>0.05);不同病理分型、临床分期、有无淋巴结转移的非小细胞肺癌患者SKA3、G3BP2、PROX1的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论非小细胞肺癌患者血清中SKA3、G3BP2、PROX1与患者临床病理特征密切相关,提示其可能成为非小细胞肺癌治疗的靶点及预测预后和复发的指标。

阿司匹林通过抑制SH2B1/β-catenin增强顺铂对食管鳞癌细胞的化疗敏感性

目的探讨阿司匹林(ASA)是否增强顺铂(DDP)对食管鳞癌(ESCC)的治疗作用及其相关机制。方法培养ESCC细胞,实验分为空白组(DMSO组)、实验组(ASA组,DDP组,ASA+DDP组)。CCK8检测ASA和DDP单用或联用对ESCC细胞(Eca-109、Kyse30、TE-10)活性的影响,Annexin-V-FITC/PI检测ASA和DDP单用或联用对ESCC细胞凋亡的影响;转染PHY-LVOE1.6-SH2B1上调Eca-109细胞SH2B1的表达水平,CCK8及细胞划痕实验检测过表达SH2B1对Eca-109细胞活性及迁移的影响,免疫荧光及Western blot检测Eca-109细胞内SH2B1、β-catenin及其相关通路关键分子(GSK-3β、CyclinD1、TCF-4)蛋白变化。结果给予5mmol/L ASA处理后,与空白组相比Eca-109、Kyse30、TE-10细胞活性及凋亡率均无明显差异(Ps>0.05);与DDP5组相比,ASA5+DDP5组3株细胞活性最低(t=3.49,P<0.05;t=2.80,P<0.05;t=3.10,P<0.05)、凋亡率最高(t=11.44,P<0.05;t=11.68,P<0.05;t=12.24,P<0.05),差异具有统计学差异。DDP(5μmol/L)联合梯度ASA(0、5、10mmol/L)处理Eca-109细胞,SH2B1的表达量随ASA浓度上升而下降(F=54.0,P<0.05)。与SH2B1组相比,ASA(10mmol/L)和DDP(5μmol/L)联合处理后,Eca-109细胞SH2B1(t=2.62,P<0.05)、GSK-3β(t=0.96,P<0.05)、CyclinD1(t=1.25,P<0.05)、TCF-4(t=1.98,P<0.05)蛋白表达下降;与Vector组相比,过表达SH2B1,Eca-109细胞活性及迁移能力增强(Ps<0.05),β-catenin表达量及入核增加(t=2.52,P<0.05),GSK-3β(t=2.50,P<0.05)、CyclinD1(t=1.49,P<0.05)、TCF-4(t=2.62,P<0.05)表达增加;可部分逆转ASA和DDP联用处理所带来的上述蛋白抑制作用。结论ASA通过抑制SH2B1/β-catenin信号通路在一定程度上增强ESCC细胞对DDP的化疗敏感性,协同DDP可以抑制细胞活性及促进细胞凋亡。

SHIP2、EGFL7表达与肺癌患者临床病理参数及预后的关系

目的探讨肺癌组织含SH2结构域的Ⅱ型肌醇5’-磷酸酶(SHIP2)、类表皮生长因子域7(EGFL7)表达与肺癌患者临床病理参数及预后的关系。方法回顾性收集湖州市第一人民医院2019年1-12月收治的76例肺癌患者,均以免疫组织化学SP法检测组织中SHIP2、EGFL7蛋白的表达情况,采用Kaplan-Meier法和多变量Cox回归分析SHIP2、EGFL7与肺癌患者预后的关系。结果肺癌组织中SHIP2、EGFL7蛋白高表达率均高于癌旁组织(均P<0.05);SHIP2、EGFL7高表达与低表达组TNM分期、淋巴结转移差异均有统计学意义(均P<0.05);SHIP2、EGFL7高表达组3年生存率均低于低表达组(均P<0.05);TNM分期、淋巴结转移、SHIP2及EGFL7高表达均为影响肺癌患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论肺癌患者癌组织中SHIP2、EGFL7均为高表达,并与TNM分期及淋巴结转移有关,是影响预后的独立危险因素。

肺癌患者癌组织中SHIP2、PLEK2蛋白表达水平及其临床预后意义

目的分析肺癌患者癌组织中含SH2结构域的Ⅱ型5’肌醇磷酸酶2(SHIP2)、Pleckstrin2(PLEK2)蛋白表达水平及其临床预后意义。方法收集97例肺癌患者的癌组织标本及其癌旁组织(距肿瘤边缘4 cm处)标本。应用免疫组织化学染色法检测所有标本组织中SHIP2、PLEK2蛋白表达水平。采用χ^(2)检验分析肺癌患者癌组织中SHIP2、PLEK2蛋白表达与临床病理特征的关系,多因素Cox回归分析影响肺癌患者预后的相关因素。结果癌组织中SHIP2、PLEK2蛋白高表达率均明显高于癌旁组织(61.86%vs 30.93%,63.92%vs 32.99%;P<0.05)。SHIP2、PLEK2蛋白表达与肺癌患者的TNM分期、淋巴结转移存在显著关系(P<0.05)。SHIP2高表达、低表达组患者3年生存率分别为31.67%(19/60)、59.46%(22/37),PLEK2高表达、低表达组患者3年生存率分别为33.87%(21/62)、57.14%(20/35),SHIP2、PLEK2高表达、低表达组3年生存率比较均存在差异(P<0.05)。单因素分析结果显示:TNMⅢ期、淋巴结转移、SHIP2高表达、PLEK2高表达肺癌患者3年生存时间均明显缩短(P<0.05)。多因素Cox分析结果显示,TNMⅢ期、淋巴结转移、SHIP2高表达、PLEK2高表达均为影响肺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论肺癌患者癌组织中SHIP2、PLEK2蛋白表达均为高表达,并与肺癌TNM分期、淋巴结转移有关,SHIP2高表达、PLEK2高表达的肺癌患者预后较差,二者有望作为评价肺癌患者预后的生物标志物。

腓骨肌萎缩症4C型1例

报告1例腓骨肌萎缩症4C型病例。患者47岁女性,渐进性双下肢无力伴行走不稳7年。神经系统查体:弓形足,宽基步态。双眼诱发水平及垂直眼震。臀部以下肌萎缩,鹤腿征,双下肢远端肌力Ⅳ+级,四肢腱反射减弱。闭目难立征睁眼及闭眼(+),卧立试验(+),轮替试验(+),反跳试验(+)。肌电图(运动神经)示双侧正中神经中重度脱髓鞘,尺神经轻度-重度混合型病损(脱髓鞘为主),双侧腓总神经和胫神经中重度混合型病损。基因检测结果显示SH3TC2基因C.3143T>C变异。诊断为腓骨肌萎缩症4C型。予康复治疗后,患者行走平衡较前好转。报告本病例旨在增强对该病认识,提高临床医生对该病早期识别和诊断。

含SH2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2表达变化对肝纤维化大鼠肝组织中细胞外信号调节激酶1/2活性的影响

目的:探讨含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)表达变化对肝纤维化大鼠肝组织中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)活性的影响。方法:健康雄性SD大鼠160只被随机分为五组(对照组、模型组、Ad-GFP组、Ad-SHP2组及Ad-shRNA/SHP组),每组32只。除对照组(腹腔注射0.9%氯化钠溶液)外,其余四组构建四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型,并将表达绿色荧光蛋白(GFP)的空病毒Ad-GFP、表达野生型SHP2及GFP的腺病毒Ad-SHP2、表达GFP及靶向SHP2的短发夹RNA(shRNA)的腺病毒Ad-shRNA/SHP自大鼠尾静脉分别注射入Ad-GFP组、Ad-SHP2组及Ad-shRNA/SHP2组大鼠,各组分别于造模第2、4、6、8周选取8只大鼠留取肝组织标本。采用HE染色观察大鼠肝组织病理学变化;采用Masson三色染色检测大鼠肝组织胶原沉积;采用实时荧光定量PCR检测大鼠肝组织SHP2、ERK1 mRNA表达;采用免疫组织化学染色检测SHP2蛋白表达;采用Western blot检测ERK1和p-ERK1蛋白表达。结果:大鼠肝纤维化模型成功构建,在各造模时间点,与模型组及Ad-GFP组大鼠肝组织胶原沉积比较,Ad-SHP2组均加重,而Ad-shRNA/SHP2组均减轻。导入野生型SHP2基因后大鼠肝组织的SHP2 mRNA及蛋白表达明显升高(均P<0.05),而导入靶向SHP2的shRNA后大鼠肝组织的SHP2 mRNA及蛋白表达明显降低(均P<0.05)。在各造模时间点(第2、4、6、8周),模型组、Ad-GFP组、Ad-SHP2组及Ad-shRNA/SHP2组大鼠肝组织ERK1 mRNA及蛋白表达以及p-ERK1蛋白表达高于对照组(均P<0.05),但上述四组大鼠肝组织的ERK1 mRNA及蛋白表达差异无统计学意义(均P>0.05);而在各时间点与模型组及Ad-GFP组大鼠肝组织p-ERK1蛋白表达比较,Ad-SHP2组升高(均P<0.05),Ad-shRNA/SHP2组降低(均P<0.05),模型组与Ad-GFP组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:大鼠纤维化肝组织中SHP2过表达可通过促进ERK1/2磷酸化增强ERK1/2活性,而SHP2低表达则可通过抑制ERK1/2磷酸化降低ERK1/2活性。

玉米籽粒突变体crk4的基因克隆与等位性分析

籽粒突变体是克隆籽粒发育关键基因并解析其遗传调控机制的重要材料。crk4(crumpled kernel 4)是育种选系过程中发现的籽粒突变体,与野生型相比,其籽粒灌浆差、粒重和发芽率显著降低。遗传分析表明该突变由单个隐性核基因控制,图位克隆将该基因定位于玉米5号染色体614 kb的物理区间内,该区间包含11个在籽粒中表达的蛋白编码基因。序列分析表明,Zm00001d017427基因的第2个外显子上存在一个由C碱基缺失造成的crk4特异的终止突变。Zm00001d017427编码金属-烟酰胺转运蛋白(Metal-nicotianamine transporter,Sh4-shrunken4/YSL2),是已报道的籽粒突变体ysl2的等位基因。等位性测验结果表明,crk4是sh4/ysl2的一个新的等位突变体。crk4的鉴定为阐明Sh4基因调控玉米籽粒发育的分子机制提供了新的种质资源。

四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化肝组织中SHP2表达与在体肝星状细胞活化及增殖的关系

目的探讨四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化肝组织及在体肝星状细胞(HSC)的含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)表达变化与在体HSC活化及增殖的关系。方法随机将50只健康雄性SD大鼠分为对照组(10只)、模型组(40只),采用腹腔注射四氯化碳法构建大鼠肝纤维化模型,Masson三色及HE染色检测大鼠肝组织的病理组织学变化,免疫组织化学染色检测大鼠肝组织的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及SHP2表达,SHP2与α-SMA免疫荧光双标记检测大鼠肝组织中活化HSC的SHP2表达。结果与对照组大鼠肝组织的α-SMA阳性表达积分光密度值(IOD)(0.09±0.01)相比,造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的α-SMA阳性表达IOD(0.13±0.01、0.18±0.01、0.24±0.02、0.28±0.02)显著增加(P<0.05),并随着造模时间延长逐渐升高(P<0.05),即在体HSC的活化及增殖逐渐加快(α-SMA是HSC的活化标志)。造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的SHP2阳性表达IOD(0.23±0.01、0.27±0.01、0.30±0.01、0.33±0.01)较对照组(0.19±0.01)显著增加(P<0.05),且逐渐升高(P<0.05)。SHP2与α-SMA免疫荧光双标记检测显示,造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织中表达SHP2的活化HSC占总的活化HSC的百分比(54%±3%、62%±2%、73%±4%、86%±3%)逐渐升高(P<0.05)。结论在四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型中,肝组织及在体HSC的SHP2表达与在体HSC的活化及增殖呈显著正相关。

SH3TC2促进结直肠癌的发生与进展——基于生信分析

目的:基于TCGA和GTEx样本数据信息挖掘在结直肠癌中异常表达且与预后相关的基因,以期提高其诊疗效果和改善预后生存。方法:利用GEPIA 2.0可视化分析平台对公共数据库中癌及癌旁1034个组织标本数据进行差异表达和预后生存相关mRNA筛选,使用FunRich软件通过韦恩图筛选共同差异基因并进行GO和KEGG富集分析,再通过GEPIA2.0和UALCAN数据库进行关键差异基因的表达和预后验证;接着通过TIMER2.0数据库探索关键基因的表达水平与免疫细胞浸润的相关性;最后通过STRING数据库在线进一步分析关键基因的蛋白相互作用网络。结果:共筛选到11106个差异表达基因(结肠癌5337个,直肠癌5769个),与二者预后OS及DFS相关的500个基因取交集,筛选出BGLAP、COQ2、CRLF1、PREX2、SH3TC2、PTPRM、ZNF154、HOXA4等8个表达差异基因且与预后生存DFS相关。验证后发现BGLAP、COQ2、CRLF1、PREX2、PTPRM、ZNF154、HOXA4可能在癌症的不同阶段发挥促癌、抑癌的双重功能;仅SH3TC2在结直肠癌中高表达(P<0.01),而预后生存分析表明高表达患者预后DFS显著更短(P<0.01),与预后OS无统计学差异(P>0.05);其表达水平与肿瘤免疫浸润评估显示结肠癌与CD4+T细胞浸润相关性,最高仅0.124(P=0.013),直肠癌中与免疫细胞浸润相关性无统计学意义(P>0.05);STRING数据库分析提示SH3TC2与SBF2、LITAF、MTMR2、MTMR2、GDAP1等蛋白相互作用可能性较大。结论:SH3TC2在结直肠癌中高表达,且高表达患者预后DFS更短,有可能是结直肠癌新的潜在诊断和预后DFS判断的标志物;SH3TC2表达水平在结直肠癌中与免疫细胞浸润相关性较弱。

SH_2A抑制IGFⅡ诱导的抗凋亡作用

为研究SH2A的生物学特性,构建野生型和缺陷型SH2A表达载体,通过流式细胞术和蛋白激酶C(PKC)活性检测,研究其对细胞凋亡的影响.研究结果显示SH2结构域是SH2A的主要功能域;SH2A可以诱导细胞快速进入凋亡晚期而促进细胞凋亡;同时发现SH2A抑制胰岛素样生长因子Ⅱ(Insulin-like growth factorⅡ,IGFⅡ)的抗凋亡作用,并阻滞IGFⅡ诱导的Ca2+释放和PKC激活.因此,SH2A可能通过抑制PKC信号通路而促进细胞凋亡.

阴沟肠杆菌B8发酵液对植物的促生作用和IAA分析

以甜玉米 Sh2和番茄为试验材料 ,研究阴沟肠杆菌 B8发酵液对植物的促生作用 ,并对其所含的主要生理活性物质进行了分析 .结果表明 :以适当浓度的发酵液喷施植株幼苗期的叶面 ,两周后 ,发现其株高与对照相比明显增加 ,根系也较对照发达 . HPL C证实该发酵液中含有植物生长激素吲哚乙酸( IAA) .在最适条件下 ,培养基中添加 0 .2 %色氨酸时 ,发酵液中 IAA含量可达 90 4 .38mg/ L.试验还发现 ,喷施发酵液后的植株内源

哮喘小鼠肺内及内脏感觉传入系统SH2-Bβ的表达

目的研究SH2-Bβ在哮喘小鼠肺及内脏感觉传入系统（C7～T5脊神经节及对应的脊髓后角）的表达,探讨SH2-Bβ在哮喘发病中的作用.方法 BALB/c小鼠30只,按随机数字表法分为正常对照组、哮喘组,每组15只.利用免疫组织化学方法测定两组小鼠肺、C7～T5脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ的免疫反应变化;用免疫印迹法（Western blotting）检测肺及C7～T5节段脊髓SH2-Bβ及神经生长因子（NGF）的免疫反应变化;Metamoph图像分析系统对结果进行分析.结果免疫组织化学结果显示哮喘小鼠肺、C7～T5节段脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ免疫阳性产物平均光密度值分别为0.806±0.023、0.766±0.018、0.547±0.014,明显高于对照组（0.243±0.018、0.131±0.011、0.215±0.029）（P＜0.01）.Western blotting显示SH2-Bβ及NGF在哮喘小鼠的C7～T5节段脊髓及肺内表达明显强于对照组;正常对照组脊髓及肺内的平均相对光密度值分别为0.346±0.017和0.512±0.018,哮喘组为0.738±0.021和1.526±0.022.NGF在正常对照组脊髓及肺内的平均相对光密度值分别为0.357±0.021和0.734±0.013,哮喘组为1.445±0.015和1.265±0.018;且SH2-Bβ与NGF光密度值呈正相关（r=0.651,P＜0.01）.结论结果提示,SH2-Bβ在哮喘小鼠肺、C7～T5节段脊神经节及对应的脊髓后角过表达,可能是NGF参与哮喘发病的重要信号分子.