NKG2D^+CD8^+NKT细胞及sMICA在肺癌免疫逃逸中的作用

自然杀伤（NKT）是一类新近发现的免疫细胞,其在获得性免疫与固有性免疫之间起桥梁作用,并在随后的免疫反应中起决定性作用。NKG2D＋CD8＋NKT细胞是其亚群之一,有抗肿瘤免疫调节作用,NKG2D＋CD8＋NKT细胞的功能取决于表面活化性受体NKG2DE．可溶性人类主要组织相容性复合体（MHC）-I类分子链相关基因A蛋白（sMICA）是NKG2D的配体。故探索NKG2D^＋CD8^＋NKT细胞及血清sMICA在肺癌患者体内的表达情况，及两者之间的关系有重要的意义。

NK细胞活化受体NKG2D及sMICA在晚期肺癌免疫监视中的作用

背景与目的NK细胞活化受体NKG2D及sMICA是近来肿瘤研究领域热点之一。本研究旨在观察晚期肺癌患者外周血中NK细胞受体NKG2D及sMICA表达水平的变化,并探讨它们在晚期肺癌免疫监控中的作用及其临床意义。方法采用流式细胞术检测115例肺癌患者外周血NK细胞受体NKG2D、T淋巴细胞亚群及NK细胞百分比,采用酶联免疫吸附反应检测肺癌患者外周血sMICA值,并以50例健康人作为对照。结果晚期肺癌患者外周血sMICA、CD8+T细胞、NK细胞数量较对照组明显升高,而NK细胞受体NKG2D、CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD4+T/CD8+T值较对照组下降。NK细胞受体NKG2D和sMICA呈负相关(r=-0.319,P<0.05)。NK细胞受体NKG2D与CD4+T细胞、CD4+T/CD8+T成正相关(P<0.05),与CD8+T细胞成负相关(P<0.05);sMICA与CD4+T细胞、CD4+T/CD8+T成负相关(P<0.05),与CD8+T细胞成正相关(P<0.05);它们与CD3+T、NK细胞均无相关性(P>0.05)。结论外周血sMICA上调介导NK细胞活化受体NKG2D下调机制参与了晚期肺癌以肿瘤为中心抑制免疫网络的形成,它们可作为监视晚期肺癌患者免疫状态的参考指标,也可作为评估肺癌发生、发展的参考依据。

食管癌患者外周血NKG2A NKG2D sMICA的表达

我们采用流式细胞术和酶联免疫吸附法（ELISA）分别测定食管癌患者NKG2A、NKG2D及NKG2D可溶性配体sMICA的表达,为食管癌的免疫治疗提供实验依据。

MMP-9介导结肠癌细胞sMICA蛋白脱落的研究

目的探讨金属基质蛋白酶9(MMP-9)在结肠癌细胞膜型MICA(mMICA)脱落为可溶型MICA(sMICA)过程中的作用。方法 HT-29细胞转染MMP-9siRNA质粒沉默48小时后,检测MMP-9、MICAmRNA表达以及MMP-9、mMICA及sMICA蛋白生成情况。结果 MMP-9siRNA质粒转染HT-29细胞后显著降低MMP-9mRNA,不影响MICAmRNA;细胞膜表面mMICA蛋白显著增加同时sMICA蛋白生成明显减少。结论抑制MMP-9表达,可减少结肠癌细胞mMICA蛋白降解,同时下调sMICA蛋白生成。

肺癌患者血清中可溶性MICA(sMICA)表达及临床意义

目的：探讨肺癌患者血清中可溶性MICA（sMICA）的表达及临床意义。方法：选取30例肺癌患者作为试验组，30例健康志愿者作为对照组，利用ELISA法测定两组患者血清中sMICA分子表达值，对其结果进行分析。结果：试验组与对照组比较，肺癌患者血清sMICA分子测定值高表达，健康组呈低表达，二者比较差异有显著性（P〈0．01）。结论：肺癌患者血清中sMICA分子测定值高表达，MICA的可溶性（sMICA）表达可能是导致肿瘤细胞发生免疫逃逸的原因之一。sMICA血清水平的测定可能成为预测肺癌患者免疫功能状态及肿瘤恶性转移的免疫诊断指标之一。

恶性肿瘤及感染性疾病患者血清sMICA分子的变化及意义

目的研究恶性肿瘤患者以及不同感染性疾病患者血清中sMICA分子的含量及临床意义。方法采用ELISA法检测1041例恶性肿瘤及感染性疾病患者和141例正常对照个体血清sMICA分子含量,分析其相关性及诊断价值。结果与正常对照组相比,肝癌患者的血清sMICA含量明显升高(P<0.05)。某些细菌(肠杆菌、结核杆菌、非发酵革兰阴性菌和革兰阳性球菌)、病毒(HBV和HCV)以及梅毒螺旋体感染患者的血清sMICA含量也明显高于正常对照组(P<0.05)。结论血清中sMICA分子含量对肝癌及部分感染性疾病具有一定的辅助诊断价值。肠杆菌、结核杆菌、非发酵革兰阴性菌、革兰阳性球菌、HBV、HCV及梅毒螺旋体感染可导致血清sMICA分子增高。

乳腺癌血清sMICA含量检测的临床意义

目的检测乳腺癌血清中sMICA水平,研究其单独及联合CA153检测对于乳腺癌诊断的意义。方法 ELISA法检测56例乳腺癌血清、69例乳腺良性病血清及75例健康体检者血清中sMICA水平,分析其与临床病理参数的关系。雅培免疫发光法检测其CA153浓度,并分析其与sMICA对于乳腺癌诊断的优缺点。结果乳腺癌患者血清中sMICA及CA153浓度均显著高于乳腺良性病患者及健康体检者;其中sMICA水平与乳腺癌临床分期呈正相关,淋巴结转移者sMICA浓度显著高于未转移者,与年龄及分级无明显相关性;sMICA、CA153及两者联合检测诊断乳腺癌的敏感度分别为67.86%、71.43%和92.86%。结论 sMICA可为乳腺癌病情评价提供新的参考指标,联合CA153能提高诊断性能,降低临床漏检率。

替吉奥胶囊对晚期宫颈癌患者外周血TPS、sMICA、HIF-1α及Her-2的影响

目的探讨替吉奥胶囊对晚期宫颈癌患者外周血组织多肽特异性抗原(tissue polypeptide antigen,TPS)、可溶性人类MHC-I类分子链相关基因A蛋白(soluble MHC class I chain-related molecules A,sMICA)、缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1α)及人表皮生长因子受体(human epidermal growth factor receptor 2,Her-2)水平的影响。方法选取金华市文荣医院妇产科诊治的晚期宫颈癌患者80例,随机为对照组40例,行临床常规疗法;实验组40例,在对照组常规治疗基础上加用替吉奥胶囊,比较2组患者血清肿瘤标志物、TPS、sMICA、HIF-1α及Her-2水平及临床疗效。结果与对照组比较,实验组宫颈癌相关抗原(tumor antigen,TA-4)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、鳞状细胞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen,SCCA)水平较低(P<0.05);实验组TPS、sMICA、HIF-1α、Her-2水平较低(P<0.05);实验组治疗总有效率较高(P<0.05)。结论替吉奥胶囊对晚期宫颈癌患者治疗据有较好的临床疗效,推测其可能机制为降低TPS、sMICA、HIF-1α、Her-2水平,进而降低血清肿瘤标志物水平。

食管癌患者血清sMICA检测的临床意义

目的评价sMICA的检测对食管癌患者的临床诊断价值,进一步探讨sMICA与食管癌患者病理临床特征关系。方法应用酶联免疫法对60例术前食管癌患者和其中35例术后患者及30例健康人血清sMICA含量进行测定,并进行分析。结果食管癌组患者血清sMICA含量明显高于健康组,两组差异有统计学意义(P<0.01);腺癌组患者血清sMICA明显高于鳞癌组患者,差异有统计学意义(P<0.01);在TNM分期中,II、III、IV期食管癌患者血清sMICA含量依次增高,三期间总体差异有统计学意义(P<0.01),且任意两期间比较有差异;有淋巴结转移的患者血清sMICA含量高于无淋巴结转移的患者,差异有统计学意义(P<0.01);III期患者术前血清sMICA含量高于术后,差异有统计学意义(P<0.01)。结论血清sMICA的检测有助于食管癌的临床辅助诊断,检测sMICA对判断食管癌生物学行为及预后有一定临床意义。

食管癌患者NKG2D^+CD_8^+NKT细胞及sMICA的检测

目的探讨食管癌患者外周血NKG2D+CD8+NKT细胞百分比及血清sMICA含量在免疫逃逸中的作用及临床意义。方法流式细胞仪测定80例患者(其中64例术后患者)及72例健康对照组NKG2D+CD8+NKT细胞百分比;酶联免疫吸附法测定sMICA含量。结果患者NKG2D+CD8+NKT细胞百分比低于对照组(P<0.01);术后低于对照组(P>0.05);术前低于术后(P<0.01);在TNM分期中,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者依次降低(P<0.01)。患者sMICA明显高于对照组(P<0.01);术后高于对照组(P>0.05);术前高于术后(P<0.01);在TNM分期中,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者依次增高(P<0.01)。患者sMICA对NKG2D+CD8+NKT细胞有抑制作用(P<0.01)。结论 NKG2D+CD8+NKT细胞及sMICA参与食管癌的免疫逃逸,两者的测定有助于食管癌的免疫治疗、早期诊断、临床分期及判断手术疗效。

沉默ADAM17抑制肺癌细胞sMICA分泌促进NK细胞的抗肿瘤免疫效应

目的:探讨沉默解聚素-金属蛋白酶17(ADAM17)抑制肺癌细胞可溶性主要组织相容性复合体Ⅰ类相关分子A(sMICA)的分泌对自然杀伤(NK)细胞的抗肿瘤免疫效应的影响。方法:免疫组织化学法检测肺癌组织和癌旁组织中ADAM17的表达,实时定量聚合酶链反应法(qRT-PCR)检测肺癌细胞A549与人正常肺上皮细胞BEAS-2B中ADAM17的mRNA表达。小干扰RNA(siRNA)内源性敲低ADAM17,qRT-PCR检测ADAM17与主要组织相容性复合体Ⅰ类相关分子A(MICA)的mRNA表达,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测ADAM17与MICA的蛋白表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测A549细胞上清液sMICA的表达,流式细胞术检测MICA的表达,乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞对肺癌细胞的杀伤敏感性。结果:ADAM17在肺癌组织及肺癌细胞A549中高表达。siRNA内源性敲低ADAM17,A549细胞上清中sMICA含量降低(P<0.05),A549细胞MICA表达升高(P<0.05),NK细胞对A549细胞的杀伤活性显著增强(P<0.05)。结论:沉默ADAM17促进肺癌细胞MICA的表达,抑制sMICA的脱落,增强NK细胞对肺癌细胞的杀伤敏感性。

肺癌患者外周血中MMP-7mRNA、sMICA、VEGF的表达及其与侵袭转移的关系

目的测定肺癌患者外周血中基质金属蛋白酶-7 m RNA(MMP-7 m RNA)、可溶性主要组织相容性复合体Ⅰ类相关分子A(s MICA)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平,探讨它们与侵袭转移的关系及临床意义。方法采用荧光定量反转录聚合酶链反应检测110例肺癌患者外周血中MMP-7m RNA表达含量,采用酶联免疫吸附实验检测s MICA、VEGF表达水平,并与40例健康者进行比较。结果肺癌患者外周血中MMP-7 m RNA、s MICA、VEGF表达水平较正常对照组显著升高(P<0.05)。MMP-7 m RNA高表达含量与患者临床分期相关(P<0.05),VEGF高表达水平与病理分型、组织分化程度相关(P<0.05)。肺癌患者外周血中s MICA与MMP-7 m RNA、VEGF的表达水平呈正相关,同时MMP-7 m RNA与VEGF的表达水平呈正相关(P<0.05),治疗有效(包括手术和化疗)的肺癌患者外周血中MMP-7 m RNA、s MICA、VEGF表达水平显著降低(P<0.05),而复发转移患者的表达水平显著升高(P<0.05)。结论 MMP-7 m RNA、s MICA和VEGF共同参与了肺癌患者肿瘤转移微环境的构成,与肺癌的发生发展、侵袭转移密切相关。

食管癌、贲门癌患者外周血CD^＋8NKT细胞活化受体NKG2D及其分泌性配体sMICA检测的临床意义

目的探讨外周血CD^＋8NKT细胞活化受体NKG2D及其分泌性配体sMICA检测在食管癌、贲门癌诊断及术后疗效评价中的临床意义。方法对53例患者确诊后（29例手术患者术前14d及术后14d）及30名健康对照组采用流式细胞术对外周血cD^＋8NKT细胞中活化受体NKG2D阳性细胞百分比测定，应用酶联免疫吸附法进行sMICA含量测定，并各自进行差异性分析，同时对两者进行依从性分析。结果患者外周血cD^＋8NKT细胞中NKG2D阳性细胞百分比为（77．632±8．972）％，明显低于对照组的（89．053±6．515）％（t=-6．113，P〈0．05）；TNM分期Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者依次降低（F=99．251，P〈0．01）；有区域淋巴结转移者均低于无区域淋巴结转移者（t=-10．384，P〈0．01）；鳞状细胞癌高于腺癌（t=9．899，P〈0．01）；术前均低于术后（t=-4．319，P〈0．01）。患者血清sMICA的含量为（326．28±85．407）pg／ml，明显高于对照组的（210．00±22．560）Pg／ml（t=7．292，P〈0．01）；Ⅱ、Ⅲ、IV期患者依次增高（F=63．355，P〈0．01）；有区域淋巴结转移者均高于无区域淋巴结转移者（t=7．770，P〈0．01）；鳞状细胞癌低于腺癌（t=-7．593，P〈0．01）；术前均高于术后（t=7．027，P〈0．01）。血清sMICA对外周血CD^＋8NKT细胞活化受体NKG2D有抑制作用（F=142．773，P〈0．05），决定系数R^2=0．7368。结论外周血CD^＋8NKT细胞活化受体NKG2D及其分泌性配体sMICA含量的测定有助于食管癌、贲门癌分期的临床辅助诊断，对判断其生物学行为及预后有重要临床意义，并可作为患者手术治疗效果指标。

食管贲门癌患者血清sMICA检测的临床意义

目的评价可溶性人类MHC-1类分子链相关基因A蛋白（sMICA）检测对食管贲门癌患者的临床诊断价值。方法应用酶联免疫法对50例术前食管贲门癌患者和其中27例术后患者及20名健康人血清sMICA含量进行测定，并对血清sMICA含量的差异进行分析。结果食管癌患者血清sMICA含量为（322．42±9．09）pg／ml，明显高于健康人的（176．00±11．69）pg／ml，差异有统计学意义（P〈0．01）；在TNM分期中，sMICA含量Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期依次增高（P〈0．05）；有淋巴结转移患者的sMICA含量均高于无淋巴结转移的患者（P〈0．01）；在组织病理分型中，腺癌患者血清sMICA含量高于鳞状细胞癌患者（P〈0．01）；Ⅲ期患者术前血清sMICA含量均高于术后，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论血清sMICA的检测有助于食管贲门癌的临床辅助诊断，对判断食管贲门癌生物学行为及预后有一定临床意义，sMICA可能成为新的肿瘤标志物指标之一。

106例大肠癌病人HLA、MICA基因频率分布及sMICA表达水平与癌发生的相关性研究

目的初步探讨人类白细胞抗原(HLA)和主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关蛋白A(MICA)基因遗传免疫因素及其可溶性MICA(sMICA)表达水平与广东地区大肠癌的相关性。方法采用直接测序法对106例确诊为大肠癌的患者和118名健康献血者进行HLA及MICA基因高分辨分型。应用PyPopWin32统计HLA及MICA各等位基因频率,应用SPSS16.0和Helixtree分析软件进行HLA-MICA基因与肿瘤的免疫遗传关联分析。应用生物素/亲和素ELISA酶联免疫(BA-ELISA)法进行血清中sMICA浓度检测,应用特征曲线(ROC)对sMICA结果进行分析与评价。结果病例组血清中sMICA平均水平为(0.92±0.75)ng/ml,对照组血清中平均水平为(0.29±0.33)ng/ml;病例组sMICA的浓度水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.0001)。ROC曲线下面积为0.816,sMICA的临床诊断界点为0.302ng/ml。HLA-A*02:01为大肠癌风险等位基因;未发现与MICA关联的风险等位基因;HLA-B与MICA位点连锁不平衡的存在具有大肠癌免疫遗传相关风险单倍型的可能。结论对大肠癌病人及具有相同遗传背景的人群在术前可找出高危基因人群,并对其进行可溶性MICA筛选,以达到大肠癌极早期诊断的目标。

生鲜乳中还原乳的近红外光谱法鉴别

探讨了利用近红外光谱技术快速、准确地进行生鲜乳中是否含有还原乳鉴别的可行性,并对还原乳检测过程中多元散射校正(MSC)的适用性进行了讨论。文章利用SIMCA判别分析方法,建立了掺入还原乳之生鲜乳的定性判别模型,结果表明:当掺入比例为10%时,正确率达到96.7%,当达到20%以上时,该方法的正确判别率可以达到100%;另外,利用偏最小二乘法(PLS)还建立了还原乳掺入量的定量检测模型(r=0.971,RMSEP=7.76%,RPD=5.13),双尾T检验表明,定量模型预测值与样品真实值间无显著性差异。上述2种方法充分说明了近红外技术可以实现生鲜乳中是否含有还原乳的快速鉴别。

枸杞产地的红外指纹图谱与聚类分析法研究

本文首次采用傅里叶变换红外 (FTIR)光谱法并结合SMICA聚类分析法对不同产地 :宁夏玉西、宁夏中宁及内蒙古托克托旗的枸杞进行了聚类分析。结果表明 ,聚类分析技术对来自不同产地的枸杞可进行鉴别 ,该法快速、准确 ,为客观评价中药材的来源提供了一种新的方法。

可溶性MICA对外周血淋巴细胞受体NKG2D、CD69表达的影响

为了分析可溶性MHCⅠ类相关分子A(sM ICA)对淋巴细胞活化性受体NKG 2D及早期活化标志性受体CD 69表达的影响,从U 937细胞中经RT-PCR扩增出sM ICA的cDNA片段,经酶切后插入原核表达载体pQE 3.1,并命名为pQEM ICA。IPTG大量诱导表达后溶解包涵体,所得6个H is重组蛋白经N i+树脂纯化、稀释复性,最后与外周血单个核细胞作用。结果发现sM ICA蛋白可抑制NKG 2D的表达,并通过NKG 2D的下调而抑制CD 69的表达。该研究不仅为探讨sM ICA分子对淋巴细胞特别是NK细胞生物学特性影的研究响奠定基础,也为探讨M ICA介导的肿瘤免疫逃逸机制提供工具。

MICA基因5外显子与湖南地区汉族人群肝癌的相关性研究

目的研究MICA基因多态性与肝癌的关系。方法采用PCR-STR微卫星基因分型技术检测141例肝癌病人和141例正常对照MICA基因5外显子多态性,分析其相关性。结果对第5外显子区域多态性进行检测发现5种等位基因,频率分别为:MICA-A4(11.7%),MICA-A5(34.0%),MICA-A5.1(35.1%),MICA-A6(8.2%),MICA-A9(11.0%),仅MICA-A5.1有明显差异。结论肝癌与MICA-A5.1显著性相关,而和MICA其他基因没有相关性,MICA-A5.1纯合子病人血清中的sMICA含量最高,MICA-A5.1杂合子病人血清中sMICA含量次之,非MICA-A5.1基因肝癌病人血清中sMICA含量最低,血清中sMICA含量与基因存在显著性相关。

结直肠癌腹腔镜手术对患者免疫球蛋白水平及可溶性NKG2D配体表达的影响

目的:探讨结直肠癌腹腔镜手术对患者血清免疫球蛋白水平、可溶性自然杀伤细胞活化性受体(NKG2D)配体表达的影响。方法:选取2013年8月至2015年8月在四川省成都市第一人民医院行根治手术治疗的结直肠癌110例患者为研究对象,采用随机数字表法将其分为观察组和对照组,每组55例。对照组接受传统开腹手术治疗,观察组接受腹腔镜根治手术治疗。分析比较两组患者的临床治疗效果(手术情况、术后恢复情况)、血清免疫球蛋白水平、可溶性NKG2D配体表达及围术期并发症等指标。结果:观察组患者VAS评分、术中出血量、下床活动时间、术后排气时间、住院时间均明显低于对照组患者,差异具有统计学意义(均P<0.05);术后3d,两组患者血清IgA、IgG、IgM均明显降低(均P<0.05),但观察组血清IgA、IgG、IgM水平明显高于对照组(P<0.05),且与治疗前相比,观察组术后7d免疫功能指标基本恢复;与术前相比较,术后7d,观察组可溶性人类MHC-I类分子链相关基因(sMICA)B水平无明显变化,但sMICA较术前显著下降,且明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组不良反应发生率(10.9%)明显低于对照组(23.6%),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:针对结直肠癌患者采用腹腔镜根治术治疗效果显著,出血少、手术创伤小、恢复快,可有效保护机体免疫功能,降低sMICA表达,降低患者术后并发症发生率,提高治愈率,在临床上值得推广应用。