早产患者血清TNF-α和sTNFRⅡ水平的变化及意义

目的:探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)、肿瘤坏死因子受体Ⅱ(TNFRⅡ)与早产发病的关系。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测46例早产患者(根据胎盘病检有无绒毛膜羊膜炎分为早产感染组21例和早产非感染组25例)及同期足月正常产20例母血清TNF-α、sTNFRⅡ的水平。结果:早产感染组孕妇血清中TNF-α、sTNFRⅡ水平明显高于早产非感染组和正常足月产组,差异均有显著性(P<0.05)。结论:TNF-α、sTNFRⅡ水平升高对感染性早产有提示作用,有望成为早期预测、诊断早产和宫内感染并判断其预后的指标。

重组人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(sTNFRⅡ)的纯化

目的 从大肠杆菌破碎液中纯化可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ,获得能够中和TNF活性的受体蛋白。方法 菌体破碎液经热沉淀处理后,用金属鳌合层析柱纯化重组蛋白。并对蛋白的理化特性和生物学活性进行分析。结果 纯化的重组蛋白纯度大于95％,并且能中和TNF的生物学活性,抑制其对细胞的杀伤作用。结论该工艺能简便有效地纯化出TNF受体蛋白,为进一步深入研究奠定了基础。

内毒素血症新生大鼠血清TNF-α和sTNFRⅡ的测定及意义

目的 :动态观察内毒素血症新生大鼠血清肿瘤坏死因子 ( TNF- α)及可溶性TNF- α受体 ( s TNFR- )的变化及地塞米松对其的影响。方法 :健康 7日龄新生大鼠 1 80只随机分为三组 ,每组 60只。对照组 :腹腔注入与其他两组等量的 0 .9%氯化钠液 0 .1 ml;内毒素 ( LPS)组 :腹腔注射 LPS5 mg/kg;治疗组 :于注入内毒素后立即注入地塞米松 ( Dex)1 0 mg/kg。于 0、1、2、4、6及 2 4 h随机选取 1 0只断头取血 ,用双抗体夹心 EL ISA法测定血清TNF-α及 s TNFR- ,同时观察 2 4 h动物病死率。结果 :1与正常对照组相比 ,B组 TNF-α于 1 h达到峰值 ( P<0 .0 1 ) ,浓度为 0时的 32倍 ,于 6h恢复正常 ;STNF- 于 1 h也显著增高 ( P<0 .0 5 ) ,持续至 4h后逐渐下降 ,2 4 h恢复正常。 2 C组 TNF-α于 1 h明显增高 ( P<0 .0 1 ) ,但仅为 0时的 5倍 ,4h恢复正常 ,升高程度明显低于 B组 ( P<0 .0 1 ) ;STNFR- 变化趋势与 B组相似 ,升高程度也明显低于 B组 ( P<0 .0 5 )。 3新生大鼠 2 4 h病死率 B组为5 0 % ,C组 2 0 % ,两组间差异显著 ( P<0 .0 5 )。结论 :TNF-α及 TNFR参与了新生大鼠内毒素血症的病理生理过程 ,Dex通过抑制 TNF-α和 TNFR的产生而减少炎症反应 ,降低病死率 。

冠心病患者TNF-α及sTNFRⅡ的血清水平变化

为了解冠心病（CHD）患者血清α－肿瘤坏死因子（TNF－α）和可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ（sTNFRⅡ）的变化及临床意义，应用双抗体夹心ELISA法检测了30例CHD患者的TNF－α和sTNFRⅡ，并与30例正常人对照组比较，结果显示：CHD血患者血清sTNFRⅡ和THF－α水平均明显高于正常对照组（P<0．001）。但CHD各型间TNF－α和sTNFRⅡ的水平无明显差异（P>0．05）。结果提示：TNF－α和sTNFRⅡ参与了CHD的发病和病理变化过程。

嵌合蛋白sTNFRⅡ-IgG Fc纯化与生物学活性研究

目的 建立嵌合蛋白sTNFR IgGFc的纯化工艺 ,并对该蛋白的理化和生物活性进行研究。方法 嵌合蛋白sTNFRⅡ IgGFc经变性、复性后 ,用金属螯合层析进行纯化 ,纯化的蛋白进行配基结合实验和拮抗TNF活性检测。结果 该嵌合蛋白的纯度大于 95 % ,在体外能够二聚化 ,保留了sTNFRⅡ对hTNFα的结合特性 ,同单体sTNFRⅡ相比 ,对hTNFα的拮抗活性明显提高。

sTNFRⅡ和VIP融合蛋白的基因克隆表达、纯化及活性检测

可溶性肿瘤坏死因子受体II(sTNFRII)和血管活性肠肽(VIP)对类风湿性关节炎(RA)均有治疗作用,但两者的作用机制不同。制备两者融合蛋白,可能具有更好的防治类风湿关节炎的作用。用含有VIP基因序列的上游引物和sTNFRII的下游引物,用PCR扩增出由连接序列将VIP和sTNFRII基因连接的片段,再亚克隆到原核表达载体pET32a,在大肠杆菌DH5α内诱导表达。表达的产物经离子交换、疏水层析纯化,并用体外中和试验检测其抑制TNF细胞毒及肝细胞膜特异性脂蛋白(Lsp)诱导的细胞毒生物活性。结果显示构建的pET32aVIPsTNFRII表达载体在大肠杆菌DH5α内以包涵体形式表达,疏水层析结合离子交换层析纯化后,融合蛋白具有较好的抑制炎症分子诱导的炎症反应生物活性,为将来应用打下基础。

风湿热患者可溶性肿瘤坏死因子受体的水平变化

目的 :研究肿瘤坏死因子系统在急性风湿热中的作用 ,寻找判断风湿活动期的实验指标。 方法 :用酶联免疫吸附试验检测了 17例风湿热活动期患者 (简称活动期组 )、17例风湿性心脏病风湿静止期 (简称静止期组 )及 15例健康对照组血清可溶性肿瘤坏死因子受体 ( s TNFR )浓度。 结果 :活动期组血清 s TNFR 浓度 ( 5 .92± 4 .4 0 ng/ ml)明显高于静止期组 ( 2 .18± 1.2 8ng/ ml)及健康对照组( 2 .83± 1.18ng/ ml) ( P均 <0 .0 1) ;静止期组与健康对照组比较 ,差异无显著性 ( P>0 .0 5 )。 结论 :血清 s TNFR 在风湿热活动期增高 ,静止期下降 ,可作为判断风湿热患者风湿活动期的一项参考指标。