嵌合蛋白sTNFRⅡ-IgG Fc纯化与生物学活性研究

目的 建立嵌合蛋白sTNFR IgGFc的纯化工艺 ,并对该蛋白的理化和生物活性进行研究。方法 嵌合蛋白sTNFRⅡ IgGFc经变性、复性后 ,用金属螯合层析进行纯化 ,纯化的蛋白进行配基结合实验和拮抗TNF活性检测。结果 该嵌合蛋白的纯度大于 95 % ,在体外能够二聚化 ,保留了sTNFRⅡ对hTNFα的结合特性 ,同单体sTNFRⅡ相比 ,对hTNFα的拮抗活性明显提高。

早产患者血清TNF-α和sTNFRⅡ水平的变化及意义

目的:探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)、肿瘤坏死因子受体Ⅱ(TNFRⅡ)与早产发病的关系。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测46例早产患者(根据胎盘病检有无绒毛膜羊膜炎分为早产感染组21例和早产非感染组25例)及同期足月正常产20例母血清TNF-α、sTNFRⅡ的水平。结果:早产感染组孕妇血清中TNF-α、sTNFRⅡ水平明显高于早产非感染组和正常足月产组,差异均有显著性(P<0.05)。结论:TNF-α、sTNFRⅡ水平升高对感染性早产有提示作用,有望成为早期预测、诊断早产和宫内感染并判断其预后的指标。

重组人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(sTNFRⅡ)的纯化

目的 从大肠杆菌破碎液中纯化可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ,获得能够中和TNF活性的受体蛋白。方法 菌体破碎液经热沉淀处理后,用金属鳌合层析柱纯化重组蛋白。并对蛋白的理化特性和生物学活性进行分析。结果 纯化的重组蛋白纯度大于95％,并且能中和TNF的生物学活性,抑制其对细胞的杀伤作用。结论该工艺能简便有效地纯化出TNF受体蛋白,为进一步深入研究奠定了基础。

内毒素血症新生大鼠血清TNF-α和sTNFRⅡ的测定及意义

目的 :动态观察内毒素血症新生大鼠血清肿瘤坏死因子 ( TNF- α)及可溶性TNF- α受体 ( s TNFR- )的变化及地塞米松对其的影响。方法 :健康 7日龄新生大鼠 1 80只随机分为三组 ,每组 60只。对照组 :腹腔注入与其他两组等量的 0 .9%氯化钠液 0 .1 ml;内毒素 ( LPS)组 :腹腔注射 LPS5 mg/kg;治疗组 :于注入内毒素后立即注入地塞米松 ( Dex)1 0 mg/kg。于 0、1、2、4、6及 2 4 h随机选取 1 0只断头取血 ,用双抗体夹心 EL ISA法测定血清TNF-α及 s TNFR- ,同时观察 2 4 h动物病死率。结果 :1与正常对照组相比 ,B组 TNF-α于 1 h达到峰值 ( P<0 .0 1 ) ,浓度为 0时的 32倍 ,于 6h恢复正常 ;STNF- 于 1 h也显著增高 ( P<0 .0 5 ) ,持续至 4h后逐渐下降 ,2 4 h恢复正常。 2 C组 TNF-α于 1 h明显增高 ( P<0 .0 1 ) ,但仅为 0时的 5倍 ,4h恢复正常 ,升高程度明显低于 B组 ( P<0 .0 1 ) ;STNFR- 变化趋势与 B组相似 ,升高程度也明显低于 B组 ( P<0 .0 5 )。 3新生大鼠 2 4 h病死率 B组为5 0 % ,C组 2 0 % ,两组间差异显著 ( P<0 .0 5 )。结论 :TNF-α及 TNFR参与了新生大鼠内毒素血症的病理生理过程 ,Dex通过抑制 TNF-α和 TNFR的产生而减少炎症反应 ,降低病死率 。

冠心病患者TNF-α及sTNFRⅡ的血清水平变化

为了解冠心病（CHD）患者血清α－肿瘤坏死因子（TNF－α）和可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ（sTNFRⅡ）的变化及临床意义，应用双抗体夹心ELISA法检测了30例CHD患者的TNF－α和sTNFRⅡ，并与30例正常人对照组比较，结果显示：CHD血患者血清sTNFRⅡ和THF－α水平均明显高于正常对照组（P<0．001）。但CHD各型间TNF－α和sTNFRⅡ的水平无明显差异（P>0．05）。结果提示：TNF－α和sTNFRⅡ参与了CHD的发病和病理变化过程。

sTNFRⅡ和VIP融合蛋白的基因克隆表达、纯化及活性检测

可溶性肿瘤坏死因子受体II(sTNFRII)和血管活性肠肽(VIP)对类风湿性关节炎(RA)均有治疗作用,但两者的作用机制不同。制备两者融合蛋白,可能具有更好的防治类风湿关节炎的作用。用含有VIP基因序列的上游引物和sTNFRII的下游引物,用PCR扩增出由连接序列将VIP和sTNFRII基因连接的片段,再亚克隆到原核表达载体pET32a,在大肠杆菌DH5α内诱导表达。表达的产物经离子交换、疏水层析纯化,并用体外中和试验检测其抑制TNF细胞毒及肝细胞膜特异性脂蛋白(Lsp)诱导的细胞毒生物活性。结果显示构建的pET32aVIPsTNFRII表达载体在大肠杆菌DH5α内以包涵体形式表达,疏水层析结合离子交换层析纯化后,融合蛋白具有较好的抑制炎症分子诱导的炎症反应生物活性,为将来应用打下基础。

血清sTREM-1、sTNFR-Ⅱ联合CF-6对新生儿早发型败血症的诊断和预后评估价值研究

目的:探讨血清可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)、可溶性肿瘤坏死因子受体-Ⅱ(sTNFR-Ⅱ)联合偶联因子-6(CF-6)对新生儿早发型败血症(EOS)的诊断和预后评估价值。方法:选取2021年1月~2023年1月上海市儿童医院收治的170例EOS患儿纳入EOS组,根据预后结局分为预后不良组和预后良好组,另选取我院同期100名无感染症状的健康新生儿纳入对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清sTREM-1、sTNFR-Ⅱ、CF-6水平。通过多因素Logistic回归模型分析新生儿EOS预后不良的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清sTREM-1、sTNFR-Ⅱ、CF-6水平对新生儿EOS的诊断价值和预后不良评估价值。结果:与对照组比较,EOS组血清sTREM-1、sTNFR-Ⅱ、CF-6水平升高(P<0.05)。170例EOS患儿预后不良发生率为29.41%(50/170)。多因素Logistic回归模型分析显示,出生体重≥2.5 kg、血小板计数增加为新生儿EOS预后不良的独立保护因素,胎膜早破和sTREM-1、sTNFR-Ⅱ、CF-6升高为独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清sTREM-1、sTNFR-Ⅱ联合CF-6诊断新生儿EOS的曲线下面积(AUC)为0.943,大于sTREM-1、sTNFR-Ⅱ、CF-6单独诊断的0.802、0.821、0.816;血清sTREM-1、sTNFR-Ⅱ联合CF-6评估新生儿EOS预后的AUC为0.928,大于sTREM-1、sTNFR-Ⅱ、CF-6单独评估的0.774、0.785、0.779。结论:EOS患儿血清sTREM-1、sTNFR-Ⅱ、CF-6水平升高,且与预后不良密切相关,血清sTREM-1、sTNFR-Ⅱ联合CF-6对新生儿EOS的诊断价值和预后不良评估价值较高。

血清STNFR-Ⅱ、KIM-1、β2-MG水平与妊娠期高血压疾病患者早期肾损伤的相关性分析

目的分析血清STNFR-Ⅱ、KIM-1、β2-MG水平与妊娠期高血压疾病患者早期肾损伤的相关性。方法选取我院2021年2月至2023年11月收治的100例妊娠期高血压疾病患者纳入研究组,另选取同期我院100例健康妊娠期女性纳入参照组。比较研究组和参照组以及研究组中合并与未合并早期肾损伤患者的血清STNFR-Ⅱ、KIM-1、β2-MG水平,并分析血清STNFR-Ⅱ、KIM-1、β2-MG水平与妊娠期高血压患者发生早期肾损伤的相关性。结果研究组血清STNFR-Ⅱ、KIM-1、β2-MG水平高于参照组(P<0.05)。研究组中合并早期肾损伤患者的血清STNFR-Ⅱ、KIM-1、β2-MG水平高于未合并早期肾损伤患者(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,血清STNFR-Ⅱ、KIM-1、β2-MG水平与妊娠期高血压疾病患者早期肾损伤呈明显正相关(r=0.621、0.583、0.604,P=0.000、0.000、0.000)。结论血清STNFR-Ⅱ、KIM-1、β2-MG水平与妊娠期高血压疾病患者发生早期肾损伤关系密切,临床可通过检测妊娠期高血压疾病患者血清STNFR-Ⅱ、KIM-1、β2-MG水平评估其是否发生早期肾损伤。

七氟醚联合瑞芬太尼用于产科全身麻醉对炎性细胞因子的影响

目的:不同全身麻醉方案应用于剖宫产手术,通过监测产妇血浆中炎性细胞因子浓度来评估应激反应的变化。方法:60例产妇随机分为七氟醚组(S组)与异丙酚组(P组),每组30例。记录产妇各时点的血流动力学数值、血中炎性细胞因子浓度、术中情况及新生儿情况。结果:P组麻醉诱导后、胎儿娩出时平均动脉压、心率与麻醉诱导前比较,差异有统计学意义(P<0.05),与S组同时点比较,差异有统计学意义(P<0.05)。P组术毕时及术后24 h的IL-6、TNF-α浓度比较,差异有统计学意义(P<0.05);与S组同时点比较,差异有统计学意义(P<0.05);P组术毕及术后24 h的s TNFRⅡ浓度比较,差异有统计学意义(P<0.05);与S组同时点比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 :七氟醚联合瑞芬太尼的剖宫产全身麻醉方案,安全有效,能抑制应激反应,有效预防术中显性记忆的发生。

风湿热患者可溶性肿瘤坏死因子受体的水平变化

目的 :研究肿瘤坏死因子系统在急性风湿热中的作用 ,寻找判断风湿活动期的实验指标。 方法 :用酶联免疫吸附试验检测了 17例风湿热活动期患者 (简称活动期组 )、17例风湿性心脏病风湿静止期 (简称静止期组 )及 15例健康对照组血清可溶性肿瘤坏死因子受体 ( s TNFR )浓度。 结果 :活动期组血清 s TNFR 浓度 ( 5 .92± 4 .4 0 ng/ ml)明显高于静止期组 ( 2 .18± 1.2 8ng/ ml)及健康对照组( 2 .83± 1.18ng/ ml) ( P均 <0 .0 1) ;静止期组与健康对照组比较 ,差异无显著性 ( P>0 .0 5 )。 结论 :血清 s TNFR 在风湿热活动期增高 ,静止期下降 ,可作为判断风湿热患者风湿活动期的一项参考指标。

人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ与人IgG∶Fc的融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

采用ＰＣＲ方法引入编码氨基酸残基序列为ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ的接头，将ｓＴＮＦＲ１ｃＤＮＡ与人ＩｇＧ：ＦｃｃＤＮＡ片段连接，构成融合基因ｆｕｓｉｏｎ１。将ｆｕｓｉｏｎ１克隆在ｐＢＳⅡＳＫ＋载体上。测定序列后，转入ｐＲＳＥＴＢ表达载体，在大肠杆菌中表达，得到分子量为４５ｋＤａ的蛋白，超声破碎后电泳证明表达的蛋白为包涵体，经免疫蛋白印迹证实为我们构建的融合蛋白。

Effect of Acupuncture-moxibustion on TNF-α,sTNFR-Ⅰ and sTNFR-Ⅱ of Rats with Crohn's Disease

Objective： To observe the effect of acupuncture-moxibustion on TNF-α, sTNFR-Ⅰ and sTNFR-Ⅱ in rats with Crohn＇s disease （CD）. Method： The models of CD rats induced by TNBS were randomized into model group, herbal cake-partitioned moxibustion group and electroacupuncture group as well as a normal control group. The histopathological changes of colon mucus membrane were observed with HE staining and the contents of TNF-α, sTNFR-Ⅰ and sTNFR-Ⅱ were detected with ELISA method. Results： When compared with the normal group, the TNF-α level in CD rats was substantially elevated and the sTNFR-Ⅰ and sTNFR-Ⅱ showed no marked changes. After herbal cake-partitioned moxibustion and electroacupuncture treatment, the TNF-α level in CD rats was substantially reduced and sTNFR-Ⅰ and sTNFR-Ⅱ showed no marked changes. The inflammatory lesions and abnormal structures of CD rats were significantly improved after herbal cake-partitioned moxibustion and electric stimulation. Conclusion： Herbal cake-partitioned moxibustion and electroacupuncture can both remarkably reduce the TNF-α level in blood serum, and this might be one of the action mechanisms in the treatment of CD.