DNA DIFFERENTIAL STAINING AND ITS CLINICAL APPLICATION

DNA differential stain is a simple method distinguishing cells of proliferative from quiescent stage. Double stranded DNA in quiescent cells is easily denatured by weak acid into single strand. As double stranded nucleic acid combined with methyl green and single stranded nucleic acid with pyronin, we make use of methyl green pyronin staining method to the cells treated with weak acid to distinguish proliferating from quiescent cells. This paper reports the observation of leukemia cells in the bone marrow smears of 100 cases of untreated acute leukemia by DNA differential staining method. The percentage of Go cells was lowest in ALL and highest in APL.

核桃青皮天然色素用于真丝织物染色实验设计

该实验设计主要以专业实验教学体系为中心,以培养学生专业实验技能为核心,通过不断创新实验内容和方法,结合实践性任务、小组合作和个性化学习等多种形式,以促进学生的自主学习,提高学生的学习成果为目的,使专业实验设计更贴近社会发展方向和教学新理念新要求。以核桃青皮天然色素真丝织物染色实验为例,以天然植物色素和真丝织物为原料,旨在培养学生掌握真丝织物漂白预处理、媒染染色工艺以及相关染色性能测试和评价等基本实验技能。实验设计中,突出了思政教育环节,贯穿“安全、健康、环保”理念,以核桃青皮废弃物利用为切入点,培养学生可持续发展创新理念和思维,更好地理解和应用天然染料相关的学科知识。通过收集学生的实验报告,实验全程观察学生实验准备、参与度、实验操作等现场情况,结合课后评价,分析学生的学习情况和潜在问题,再针对性地提供支持,并改进实验设计。

小反刍兽疫LAMP反应结果可视化检测方法比较研究

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种可应用于各种病原体检测、基因分型等领域的等温扩增技术。该技术所需设备简单且易于操作,因此具有较大的发展潜力。根据目前已经存在的判定LAMP结果的可视化方法,以可能对野生小反刍动物造成威胁的小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)cDNA为检测对象,选择合适的引物组,比较评估均可在日光或紫外光下区分阴阳性结果的SYBR Green I、SYBR Safe Stain和羟基萘酚蓝(hydroxy naphthol blue,HNB)3种指示剂方法的适用性与灵敏度。结果表明:3种方法的灵敏度都很高,均与琼脂糖凝胶电泳相当。其中,SYBR Green I结果区分度高、不受体系成分影响且无须额外设备,但成本较高;SYBR Safe Stain具有良好的结果区分度,成本相对较低,但需要额外的紫外照射设备;HNB成本最低,但颜色区分度较低,且易受多种因素影响。建议在选择LAMP指示剂时,综合考虑成本、使用便利性、结果准确性及实验条件,通过充分的体系优化和验证,确保LAMP检测的准确性和可靠性。研究结果突显了不同方法的特征和适用场景,为研究人员根据不同场所与条件选择高效、便捷的LAMP反应结果可视化方法提供参考。

心肌纤维化特殊染色方法比较与优化

目的 对目前已有心肌纤维化染色方法进行优化,弥补目前心肌纤维常用染色方法在定量分析中存在的胶原纤维漏读及误读等问题,为心肌纤维化半定量及诊断提供参考。方法 利用实验室前期构建的心肌组织特异性cTnT~(R141W)基因突变致扩张型心肌病转基因小鼠模型,制备心脏组织石蜡切片,分别进行马松三色(Masson’s trichrome, Masson)染色法、天狼星红(picric sirius red, PSR)染色法、天狼星红-品红(van Gieson, VG)染色法、天狼星红-固绿(sirius red/fast green staining, SR/FG)染色法染色,利用Image J 2.1.0软件对胶原纤维面积进行定量比较,并从染液浓度、染色时间、酸性溶液预染3个方面对SR/FG染色法进行优化,对后续的胶原纤维定量分析进行应用验证。结果 4种特染方法均可实现胶原纤维的分布观察,其中,优化后的SR/FG染色法,即0.1%天狼星红-苦味酸酸性溶液预染5 min,随后于0.1%天狼星红-苦味酸与0.04%固绿的混合液中染色1 h,在软件识别中具有更低的漏读率和遗失率。结论 本文优化后的SR/FG染色法较其他传统胶原纤维特染方法,胶原纤维与心肌组织着色鲜亮、颜色对比明显、稳定性佳、方便快捷,更适用于后续胶原纤维占比定量分析应用。

吲哚菁绿荧光染色在肝胆胰恶性肿瘤转移中的应用研究进展

肝胆胰肿瘤是消化系统的高发疾病,其恶性程度较高,临床预后较差。这一不良预后状况的主要原因为手术治疗中较难做到根治性切除和足够范围的淋巴结清扫,从而导致肿瘤容易复发、转移。吲哚菁绿荧光染色以往多被应用于肝功能和肝有效血量的检测,近年来逐渐被推广应用于肝胆胰恶性肿瘤术中转移灶的监测与诊疗,以达到更好的手术根治效果。本文结合相关文献,就吲哚菁绿荧光染色在肝胆胰恶性肿瘤转移中的应用研究进展进行综述。

陇南核桃青皮天然染料对棉织物的染色性能研究

以陇南核桃青皮为染料,探讨核桃青皮染液对棉织物的染色性能.通过正交试验发现核桃青皮染液的最佳提取工艺,通过单因素试验发现核桃青皮在棉织物上的最佳染色工艺条件,并对比分析直接染色和后媒染色的棉织物的色牢度.得出结论,(1)核桃青皮染液的最佳提取工艺条件:提取温度80℃,料液比1∶60,提取时间120 min.(2)陇南核桃青皮在棉织物上染色的最佳工艺条件:核桃青皮染液pH值在5.0~6.0之间,质量浓度60 g·L^(-1),浸染时间90 min,染色温度80℃.在此工艺条件下,棉织物着色更深,颜色更为明亮鲜艳.(3)在后媒浸染中明矾和蓝矾对核桃青皮染色棉织物的固色效果最好,色牢度最佳.

胸腔镜下复杂肺段切除术吲哚菁绿荧光反染法与改良膨胀萎陷法的对比研究

目的比较吲哚菁绿(indocyanine green,ICG)荧光反染法与改良膨胀萎陷法在胸腔镜复杂肺段切除术中段间平面显露的效果。方法回顾性分析2020年1月~2021年8月我院108例胸腔镜下复杂肺段切除术的临床资料,其中43例采用ICG反向染色法(荧光染色组),65例采用改良膨胀萎陷法(改良膨胀萎陷组),比较2组术中和术后情况。结果与改良膨胀萎陷组相比,ICG荧光染色组段间平面形成时间[(9.1±1.4)s vs.(1724.3±309.1)s,t=44.736,P=0.000]、手术时间[(147.5±32.2)min vs.(174.2±57.7)min,t=3.077,P=0.003]、术后胸管留置时间[2(1,2)d vs.3(2,3)d,Z=-3.829,P=0.000]和术后住院时间[6.0(4.0,7.0)d vs.7.0(5.5,10.0)d,Z=-2.644,P=0.008]明显缩短。2组术中出血量、淋巴结采样数目、并发症发生率差异无统计学意义(均P>0.05)。结论对于胸腔镜下复杂肺段切除术的段间平面显露,相比改良膨胀萎陷法,ICG荧光染色法是安全、高效的。

菊花不同时期各组织器官石蜡切片制作条件的优化

[目的]根据菊花不同时期各组织器官特性,设计试验对石蜡切片制作条件进行优化,旨在筛选针对特定组织的节省时间和成本且效果最佳的石蜡切片制作条件。[方法]取不同时期菊花根、茎、叶、花等样品,采用常规石蜡切片制作方法并结合试验过程中总结的固绿快速染色法,设计不同的渗蜡时间、切片厚度及染色方法,对各组织器官进行石蜡切片制作,经显微拍照后筛选出各组织最适石蜡切片的制作条件。[结果]经筛选发现,在渗蜡时间方面,渗蜡充分幼根需5 d,老根6 d,幼茎6 d,老茎7 d,叶片4 d,花芽5 d,舌状花4 d。在切片厚度方面,最适切片厚度幼根为16μm,老根20μm,幼茎12μm,老茎12μm,叶片25μm,花芽10μm,舌状花16μm。在染色方法的选择方面,幼根经番红-固绿双重染色后效果最佳,老根则首选番红-固绿双重染色法或番红单染法;幼茎和老茎同样首选番红-固绿双重染色法或番红单染法;叶片、花芽及舌状花以操作最为简单的固绿快速染色法为首选。[结论]试验针对菊花不同时期各组织器官所筛选的最优石蜡切片制作条件,能够最大限度地节省时间和成本,并能达到试验观察所需的最优效果。

液体稠度定量联合果绿染色在气管切开吞咽障碍患者的应用

目的探讨液体稠度定量联合果绿染色在气管切开吞咽障碍患者的应用效果。方法选取脑卒中后气管切开伴吞咽障碍患者90例,按照入院时间顺序分为对照组40例和干预组50例。对照组给予洼田饮水试验评估吞咽功能并进行相应进食指导;干预组采用液体稠度定量联合果绿染色进行吞咽功能评估筛查,并通过改变食物性状及液体稠度进行安全进食干预。比较两组进食并发症发生情况及胃管、气管切开套管留置时间。结果干预组吞咽障碍检出例数多于对照组;干预后干预组呛咳、发音异常发生率显著低于对照组(均P <0. 01),胃管、气管切开套管留置时间显著短于对照组(均P <0. 01)。结论液体稠度定量联合果绿染色能够较准确评估气管切开患者吞咽功能,定量改变食物性状及液体稠度进食干预能保证患者摄食安全。

2种在组织切片上鉴别兔脑炎原虫的新方法

[目的]探索在病理组织切片上鉴别兔脑炎原虫的新方法。[方法]用改良的革兰氏染色法和甲基绿派诺宁染色法对病兔脑组织的病变进行染色与鉴别。[结果]普通染色法虽然可清晰观察到脑组织的病理变化,但却不易检出虫体。采用改良的革兰氏染色法,不仅病理结构比较明显,而且可清晰看到染成蓝色的脑炎原虫。用甲基绿派诺宁染色,位于上皮样细胞内的脑炎原虫被染成紫红色。[结论]改良的革兰氏染色法和甲基绿派诺宁染色法对病理组织中的兔脑炎原虫具有良好的染色作用,有助于对兔脑炎原虫病的快速确诊。

吲哚菁绿运用于白色白内障超声乳化术中的临床研究

目的:探讨5g/L吲哚菁绿溶液前囊膜染色在白色白内障超声乳化术中连续环形撕囊的临床应用效果。方法:白色白内障患者98例98眼,随机分为两组,观察组50例50眼,对照组48例48眼。对照组不做前囊膜染色。观察组采用黏弹剂下5g/L吲哚菁绿溶液前囊膜染色,前囊膜染色针抽取5g/L吲哚菁绿溶液0.1mL,自辅助切口注入到前囊膜中央表面,留置30s,平衡盐液置换出多余染料。两组均应用撕囊镊连续环形撕囊。结果:观察组前囊膜呈现均匀的淡绿色,能见度显著提高,有48眼撕囊成功,成功率96%;对照组有29眼撕囊成功,成功率60%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。观察组术后裂隙灯显微镜下检查前房未见染料颗粒残存及虹膜炎及眼压升高等并发症。前房炎症反应、角膜透明度与对照组比较,差异无统计学意义。结论:吲哚菁绿前囊膜染色使前囊清晰可辨,可提高对白色白内障患者术中撕囊的成功率,从而减少术中并发症的发生,使超声乳化白内障手术初学者较快掌握连续环形撕囊术,改善初学者的学习曲线。

带绦虫妊娠节片标本制作方法的研究

目的 制作结构清晰、易于观察、颜色鲜亮的带绦虫妊娠节片标本。方法 采用孔雀绿染色法。结果 经孔雀绿染色的妊娠节片 ,子宫及其侧枝均呈绿色 ,其它组织为无色透明。结论 该方法弥补了以往传统染色法的缺陷 ,使子宫与周围组织清晰可辨 。

植物石蜡切片一步双重整体染色

本文报道植物标本制片工艺中的一种新的快速整体染色法。供试的材料经不同梯度脱水剂(乙醇—正丁醇)处理7～9h后,直接用正丁醇配制的番红—固绿混合染色液于40～42℃下恒温浸染24h左右,然后通过乙醇—正乙醇脱水3～4h。浸蜡过程相应作些改进。结果表明,所用的染料能一次性地同时进行双重染色,各组织着色均匀一致,红绿鲜明,分色效果好。该制片法,除染色时间外,自材料的洗涤到浸蜡完成,只需25～30h,提高了制片的效率,并能节省大量的药剂。

洋葱内表皮细胞中DNA和RNA染色方法的改进

目的改进洋葱内表皮细胞中DNA和RNA的染色方法。方法使用固定液固定后,以不同浓度的甲基绿派洛宁混合染色液对洋葱内表皮细胞进行染色处理,与传统方法对比,观察染色效果。结果用甲醇冰醋酸固定液固定后,洋葱内表皮细胞不会发生质壁分离,更容易染色;甲基绿与派洛宁的浓度比为3∶2和1∶1时能在细胞中更加分明地将细胞核染成蓝绿色,将细胞质和核仁染成红色。结论用甲醇冰醋酸固定液固定,甲基绿与派洛宁的浓度比为3∶2至1∶1时能得到较好的实验效果。

外源性肿瘤坏死因子-α对腰椎间盘退变影响的实验研究

目的:探讨外源性肿瘤坏死因子-α(TNT-α)对兔椎间盘蛋白多聚糖的影响和髓核组织形态结构的变化。方法:选取40只雌性日本大白兔,体重2.5￣3kg。腹前外侧入路暴露L2/3、L3/4、L4/5和L5/6四个椎间隙共160个椎间盘,随机分别注入生理盐水、TNF-α5ng、TNF-α10ng、TNF-α20ng,分别于第2、3、5、7、10周取相应椎间盘作藏红O-快绿染色病理切片,进行形态学观察和蛋白多聚糖含量测定,注射生理盐水间盘为对照组,注射TNT-α间盘为实验组。结果:①对照组髓核蛋白多聚糖没有明显变化,实验组蛋白多聚糖下降明显(下降33.7%￣67.6%,P<0.001),并且下降程度与TNF-α注射剂量呈正相关(P<0.01)。②藏红O-快绿染色显示,随着TNF-α浓度加大,髓核中细胞数量减少,正常网状(或岛屿状)组织结构破坏越严重,空泡状结构减少,细胞核的形态由椭圆形变为多种形态,10周后部分已经转变为软骨样细胞。结论:TNF-α能够引起腰椎间盘退变,并且和退变有时效和量效关系。

ICG荧光染色在HCC伴肝硬化腹腔镜解剖性切除术中的应用

目的探讨吲哚箐绿(ICG)荧光染色在肝细胞癌(HCC)伴肝硬化腹腔镜解剖性切除术中的应用价值。方法选取拟实施腹腔镜下解剖性肝切除手术的患者96例,采用随机前瞻性单盲试验将患者分为观察组和对照组各48例;观察组采用ICG荧光染色下腹腔镜解剖性切除术,对照组采用常规腹腔镜下肝解剖切除术;对比两组患者的手术时间、切口长度、手术出血量、肝门阻断时间、术后肛门排气时间、引流管留置时间、手术前后的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、手术后并发症。结果观察组的手术时间、术中出血量、肝门阻断时间均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);术后24 h,观察组的血清ALT、AST水平低于对照组(P<0.05);术后,观察组的并发症率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用ICG荧光染色下腹腔镜解剖性切除术较常规腹腔镜下肝解剖切除有利于减少手术操作的难度、对术后肝功能的影响更小。

干眼患者角膜结膜染色特点及相关因素分析

目的 观察干眼患者角膜结膜染色特点,并分析其与主观症状和其他客观检查的关联性.方法 对105例干眼患者依据眼表疾病指数（ocular surface disease index,OSDI）问卷进行评分,并分为轻度症状组（0～20分）,中度症状组（20～45分）和重度症状组（45～100分）.所有患者行角膜荧光素钠染色、结膜丽丝胺绿染色、泪膜破裂时间（tear break up time,BUT）、SchirmerⅠ等相关干眼检查.采用Oxford评分法进行染色评分,分析染色结果及相关因素.结果 3组患者角膜和结膜染色评分差异均有统计学意义（P＜0.01）,左右眼无差异（P＞0.05）.角膜和结膜染色评分与OSDI正相关（r=0.497,P＜0.01;r=0.434,P＜0.01）,与BUT无关（P＞0.05）.角膜评分与SchirmerⅠ无关（r=-0.112,P=0.107）,结膜评分与Schirmer Ⅰ负相关（r=-0.166,P＜0.05）.Sj（o）gren综合征患者眼表各区域均有染色,以中下方角膜和下方结膜多见,睑板腺功能障碍（meibomian gland dysfunction,MGD）患者以下方角膜染色多见.结论 干眼角膜结膜染色与患者主观症状密切相关,对干眼的诊断有重要意义.

甲状腺滤泡上皮细胞DNA含量与死亡时间的相关性

目的探讨甲状腺滤泡上皮细胞平均DNA含量变化与死亡时间(PMI)的相关性。方法采用甲基绿-派洛宁(MG-P)染色法结合图像分析技术,测定尸体甲状腺滤泡上皮细胞平均DNA含量变化值,并对其数据进行统计学分析。结果甲状腺滤泡上皮细胞平均DNA含量随死后经过时间的延长而加速降解。平均DNA含量各指标(平均灰度、目标面积、目标面积比)与PMI之间的决定系数R2分别为0.960、0.987、0.988和0.990(P<0.001)。结论尸体甲状腺滤泡上皮细胞平均DNA含量与PMI之间具有明显相关性,甲基绿-派洛宁(MG-P)染色法结合图像分析技术测定在研究甲状腺滤泡上皮细胞DNA含量变化方面具有一定优势。

苏鲁两省杨木红变、绿变和黄变的变色病害研究

为开展苏鲁两省杨木红变、绿变和黄变的变色病害研究,于2006～2011年分别对其6个县市木加工厂的杨木鲜变色进行了调查,并在实验室内对杨木的红变菌进行了接种变色实验。结果表明,杨木自然存放30天后,都会发生红变色、绿变色和黄变色,但是,红变色比绿变色和黄变色更常见,特别是其化学红变发生率可达10%以上。杨原木的红变色率占3.2%～6.6%,绿变色率占1.1%～3.3%,黄变色率占0%～2.2%。杨木单板的红变色率占4.0%～8.5%,绿变色率占0%～3.3%,黄变色率占0%～3.2%。由镰刀菌引起的新疆杨树溃疡病,其病斑下木质的红变色和黄变色的发生率分别为54.6%和11.3%,而在NL351杨树溃疡病病斑下木质的红变色和黄变色发生率分别为7.5%和3.3%。引起杨木红变色的砖红镰刀菌和接骨木镰刀菌的分离得率达45.5%。新疆杨树和NL351杨树溃疡病病斑的红变色木质部的镰刀菌分离得率为38.4%和31.5%。实验表明,接骨木镰刀菌是引起杨木变色的红变菌。本项研究首次提出了杨木鲜变色的概念。

2种核酸染色方法的比较

目的:比较前染和后染等2种核酸染色方法对凝胶中DNA的染色效果,及其对染料染色灵敏度的影响,并验证新型核酸染色剂SYBRGreenⅠ能否代替传统染料溴化乙锭(EB)用于常规电泳中DNA的染色。方法:分别用SYBRGreenⅠ与EB采用2种不同的方法对凝胶中的DNA进行染色。结果:前染和后染的染色效果无显著差别,2种染料都能显示出10ng以下的DNA条带。结论:前染和后染方法的染色效果相当,染料SYBRGreenⅠ和EB均可用于这2种染色方法;新型染料SYBRGreenⅠ可代替强致癌性染料EB,用于常规凝胶中DNA的染色。