大肠杆菌密度感应缺陷株中sahH基因克隆与表达的研究

目的利用克隆和表达sahH基因,恢复大肠杆菌密度感应缺陷株的甲基循环通路。方法通过扩增铜绿假单胞菌sahH基因,克隆到pGEX4T-1载体上,继而转入大肠杆菌密度感应缺陷株。诱导培养后,经考马斯亮蓝染色及蛋白印迹鉴定SahH-GST融合蛋白的表达。结果成功扩增并克隆了sahH基因,在大肠杆菌密度感应缺陷株中表达出约75 ku大小的蛋白,其大小与SahH-GST蛋白相符。结论大肠杆菌密度感应缺陷株内可以表达外源基因sahH,恢复了甲基循环的该菌株可进一步应用于密度感应与代谢循环调节作用的实验。

sahH基因在变异链球菌LuxS缺陷株内表达对胞外多糖合成的影响

目的·研究sahH基因在变异链球菌LuxS缺陷株内的表达对其胞外多糖合成的影响。方法·以构建的LuxS缺陷株转有sahH基因的sahH+LuxS-SmUA159、LuxS缺陷株转有空质粒的PIB169+LuxS-SmUA159(背景对照)及变异链球菌SmUA159野生株为研究模型。实时荧光定量PCR观察胞外多糖合成相关基因的转录水平,蒽酮法观察生物膜胞外多糖合成情况。结果·与SmUA159和PIB169+LuxS-SmUA159菌株相比,sahH基因转入株sahH+LuxS-SmUA159的4种被检测基因(gtfA、gtfB、gtfC、gtfD)中,gtfA和gtfD转录水平有显著差异(均P<0.05),而gtfB和gtfC无明显差异。SmUA159、PIB169+LuxS-SmUA159和sahH+LuxS-SmUA159胞外多糖合成量无明显差异。结论·sahH基因转入可影响变异链球菌胞外多糖合成相关基因的表达,但不影响细菌总体胞外多糖合成量。