Ⅱa类乳酸菌细菌素Sakacin P基因克隆和低温表达研究

Sakacin P是来自乳酸菌(Lactobacillus sakei)的细菌素,是潜在的抗微生物细菌素,其对食源性病原体例如单核增生李斯特氏菌具有较强的活性。在乳酸菌中,编码sakacin P的结构基因(spp A)通过严格的调节机制控制,使得分泌的sakacin P的量有限。通过拼接重叠延伸PCR(SOE-PCR)合成了sppA基因,并将其克隆到大肠杆菌中。用异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,重组sakacin P成功表达。收集的细胞进行超声处理,并通过使用无细胞上清液的抑制法鉴定其活性。结果表明,20℃低温诱导合成了更具活性的sakacin P,具有更强的抗微生物活性。

清酒乳杆菌素LSJ618的抑菌方式

以藤黄微球菌和鸡白痢沙门氏菌为指示菌,通过测定清酒乳杆菌素Sakacin LSJ618对两种菌的抑菌率及生长的影响,葡萄糖能量化对其抑菌作用的影响以及作用前后菌液电导率和紫外吸收物质的变化,初步阐明了Sakacin LSJ618的抑菌方式.研究表明,Sakacin LSJ618对两种菌都有较好的抑制作用,且增加细菌素浓度可增加其抑菌能力,另外葡萄糖能量化的藤黄微球菌对细菌素的敏感性增加,而鸡白痢沙门氏菌则无;经处理后的菌液电导率值及紫外吸收物质变化值均有升高,表明Sakacin LSJ618可破坏敏感菌细胞膜完整性,增大细胞膜透性,导致细胞内带电粒子以及核酸、蛋白类物质外泄,进而引起细胞死亡.

米酒乳杆菌素C2生物稳定性的研究

从发酵酸菜中筛选到一株产新型广谱细菌素的米酒乳杆菌C2,为了促进这种新型广谱米酒乳杆菌素C2在食品中的应用,本文对其生物稳定性进行了研究。采用琼脂扩散法,以金黄色葡萄球菌为指示菌,研究了温度、pH、无机盐、有机溶剂和表面活性剂对米酒乳杆菌素C2生物稳定性的影响。结果表明:米酒乳杆菌素C2具有较强的热稳定性,在121℃处理15min后抑菌活性仅降低了19.1%。在pH3.0～8.0,米酒乳杆菌素C2的抑菌活性很稳定,抑菌活性损失小于20%。当无机盐浓度低时,抑菌活性损失较小,而当无机盐浓度较高时,抑菌活性损失较大,最大可达46%。有机溶剂、表面活性剂对米酒乳杆菌素C2的抑菌活性的影响不显著。

米酒乳杆菌素分离纯化条件研究

目的:对米酒乳杆菌产生的广谱细菌素进行分离纯化技术研究。方法和结果:采用活性炭脱色、冷乙醇沉淀、Sephadex G50葡聚糖凝胶层析和高效液相色谱技术对米酒乳杆菌产生的细菌素进行分离纯化。结果表明,发酵浓缩液脱色的最佳工艺条件为活性炭加量3.5%、温度40℃、脱色时间20h,脱色率达64.5%。冷乙醇沉淀的最佳乙醇终浓度为80%,葡聚糖凝胶层析的洗脱液流速为0.5ml/min,上样量3ml,高效液相色谱纯化的流动相为90%的甲醇水溶液,在此条件下可得到电泳纯的细菌素。结论:确定了米酒乳杆菌素的分离纯化条件,为细菌素的理化性质和抑菌机理的研究提供依据。