三裂鼠尾草素对人γδT细胞杀伤结肠癌SW-620细胞的影响

目的探讨三裂鼠尾草素对人γδT细胞杀伤结肠癌SW-620细胞的影响。方法分离健康人外周血单个核细胞,异戊烯焦磷酸法体外扩增γδT细胞,不同浓度三裂鼠尾草素诱导人γδT细胞72 h,CCK8法检测γδT细胞增殖率,乳酸脱氢酶释放法检测诱导后γδT细胞对SW-620细胞的杀伤活性,流式细胞术检测诱导后γδT细胞穿孔素（PFP）、颗粒酶B（Gra B）、CD107a的表达,Western blot检测诱导后γδT细胞p-ERK1/2的表达情况。结果经培养10 d,γδT细胞比例由4.32%增加至83.63%。三裂鼠尾草素浓度为0.047 7-195 pmol/L时γδT细胞增殖率显著升高（P〈0.05）,浓度为0.191-195 pmol/L时γδT细胞对SW-620细胞的杀伤活性显著增加（P〈0.05）。经三裂鼠尾草素诱导72 h,γδT细胞PFP、Gra B、CD107a的表达显著升高（P〈0.05）。三裂鼠尾草素浓度为0.763-195 pmol/L时γδT细胞p-ERK1/2的表达显著增加（P〈0.05）。结论在一定浓度范围内三裂鼠尾草素能够促进人γδT细胞增殖,增强其对结肠癌细胞SW-620的杀伤活性,其机制可能与PFP、Gra B的表达上调和p-ERK1/2信号通路活化有关。

三裂鼠尾草素在CIK细胞增殖及其胃癌细胞杀伤中的作用

目的分析三裂鼠尾草素在CIK细胞增殖中的作用,探讨其在CIK细胞对胃癌细胞SGC-7901杀伤活性的影响及作用机制。方法分离健康人体外周血单个核细胞,体外多种刺激因子共同诱导为CIK细胞;予不同浓度三裂鼠尾草素分别加入CIK细胞,于24、48、72 h后CCK8法检测CIK细胞增殖率;流式细胞术检测CIK细胞颗粒酶B（Granzyme B,Gra B）、穿孔素（Perforin,PFP）、CD107a的表达;Western blotting检测CIK细胞β-catetin、P-ERK1/2和P-AKT的表达;乳酸脱氢酶释放法检测三裂鼠尾草素对CIK细胞杀胃癌细胞株的活性。结果三裂鼠尾草素诱导48 h后,CIK细胞3.2~102.4 pmol/L浓度组增殖明显（P〈0.05）;25.6 pmol/L浓度组Gra B、PFP、CD107a和β-catetin、P-ERK1/2和P-AKT的表达显著高于对照组（P〈0.05）;且对SGC-7901的杀伤活性较对照组增强（P〈0.05）。结论三裂鼠尾草素在一定浓度范围内能够促进CIK细胞增殖,并增强其对胃癌细胞SGC-7901的杀伤活性,其机制可能与活化β-catetin、P-ERK1/2、P-AKT和上调PFP、Gra B、CD107a的表达有关。

基于网络药理学和分子对接探讨心可舒片治疗高血压的作用机制

目的 基于网络药理学方法和分子对接技术探究心可舒片治疗高血压的作用机制。方法 利用TCMSP、HERB、ETCM数据库和Swiss Target Prediction平台检索心可舒片的活性成分及作用靶点;通过OMIM、Gene Cards、TTD和DrugBank数据库获取高血压的相关靶点。筛选出药物与疾病的交集靶点,通过Cytoscape 3.7.2软件和STRING数据库分别构建“中药–活性成分–靶点–疾病”及蛋白相互作用(PPI)网络并筛选出关键活性成分和核心靶点。运用DAVID数据库进行基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,利用AutoDockTools软件进行分子对接验证。结果 共获得心可舒片活性成分147个,药物与疾病的交集靶点262个。心可舒片治疗高血压的关键活性成分为丹参醇A、香紫苏醇、三裂鼠尾草素等;核心靶点为原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src(SRC)、肿瘤坏死因子(TNF)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)等。GO富集分析涉及238个生物学过程,41个细胞组分,81个分子功能。KEGG富集分析涉及131条信号通路,包括钙信号通路、神经活性配体-受体相互作用、糖尿病并发症晚期糖基化终产物(AGE)及其受体(RAGE)信号通路等。分子对接显示关键活性成分与核心靶点之间有良好的结合活性。结论 心可舒片可通过多成分、多靶点、多途径发挥对高血压的治疗作用,为临床应用提供依据。

基于UHPLC-Q-TOF-MS技术和网络药理学的金莲花抗炎药效物质基础及作用机制研究

目的基于超高效液相色谱–四级杆–飞行时间串联质谱(UHPLC-Q-TOF-MS)法、网络药理学和分子对接验证探讨金莲花抗炎的药效物质及机制。方法根据质谱信息结合对照品、文献和数据库指认金莲花中化学成分信息;借助Swiss ADME平台及查询文献来筛选金莲花潜在活性成分;通过Swiss Target Prediction数据库预测金莲花活性成分的作用靶点;采用OMIM、GeneCards、DrugBank、DisGeNET数据库获取炎症的相关靶点;利用Venn图取药物活性成分靶点与疾病靶点交集后,用STRING数据库构建蛋白质相互作用网络(PPI);用Metascape数据库对核心靶点进行基因本体论(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析;借助Cytoscape软件构建“活性成分–炎症靶点–富集通路”网络;采用分子对接技术进行初步验证。结果从金莲花中共鉴别出38个化合物,包括黄酮类23个,有机酸类10个,香豆素类1个,单糖2个以及苯乙素类2个;网络药理学研究表明,金莲花可能通过鼠尾草素、蓟黄素、香叶木素、阿魏酸、槲皮素和芹菜素等成分,作用于肿瘤坏死因子(TNF)、蛋白激酶B1(Akt1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、表皮生长因子受体(EGFR)、酪氨酸蛋白激酶(SRC)等核心靶点,来调节癌症中的途径(pathways in cancer)、血脂与动脉粥样硬化(lipid and atherosclerosis)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/Akt、TNF、白细胞介素-17(IL-17)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、晚期糖基化终末产物-糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)、缺氧诱导因子-1(HIF-1)等信号通路,从而发挥抗炎作用;分子对接验证结果表明,金莲花抗炎药效成分与疾病靶点蛋白具有较强的结合活性。结论揭示了金莲花通过多成分、多靶点、多通路联合发挥抗炎作用的机制,为后续临床应用提供科学合理的理论基础。