利用同源重组技术敲除金黄色葡萄球菌临床分离株sarA基因

目的:利用同源重组技术敲除金黄色葡萄球菌临床分离株sarA基因。方法:构建含有Em抗性基因(ermB)和sarA基因上、下游同源DNA片段的pBT2-ΔsarA质粒,将pBT2-ΔsarA质粒电转入金黄色葡萄球菌RN4220中,再把pBT2-ΔsarA质粒转入金黄色葡萄球菌30临床分离株中,把含重组质粒的金黄色葡萄球菌30临床分离株在42℃条件下振摇培养,筛选金黄色葡萄球菌30菌株的sarA基因缺失可疑突变株(SA30-ΔarlS);对重组到SA30染色体基因组的相应序列进行PCR扩增及DNA测序。结果:成功构建pBT2-ΔsarA质粒,pBT2-ΔsarA质粒被转入金黄色葡萄球菌30后,筛选到可疑突变株,经PCR及DNA测序证实金黄色葡萄球菌30sarA基因被ermB基因置换。结论:利用同源重组技术成功敲除金黄色葡萄球菌30临床分离株sarA基因。

金黄色葡萄球菌临床分离株生物膜形成能力及其相关基因的检测

目的:检测临床分离金黄色葡萄球菌(金葡菌)的生物膜形成能力及其相关基因。方法:用半定量微量平板法检测临床分离的92株金葡菌生物膜形成能力,并通过扫描电镜观察生物膜形态,用PCR法来检测生物膜形成的相关基因ica和sarA。结果:92株临床分离金葡菌菌株均可形成生物膜,PCR结果显示100%的分离株均含有sarA基因,78株(84.78%)含有ica基因。结论:临床分离的金葡菌都具有形成生物膜的能力,生物膜形成的相关基因ica和sarA的携带率较高。

玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63中3个调控基因的检测

玫瑰黄链霉菌(Streptomyces roseoflavus)Men-myco-93-63及其发酵液对多种重要植物病原菌均表现出很强的抑制作用,在植物病害生物防治方面有很大的应用潜力。根据天蓝色链霉菌A3(2)调控基因tcrA、sarA和scrX序列设计引物,扩增Men-myco-93-63基因组DNA,分别获得705bp、1 472bp和473bp的片段,经测序和比对,上述片段与天蓝色链霉菌A3(2)的tcrA、sarA和scrX基因在核苷酸序列和氨基酸序列上同源性均为99%,因此,推测玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63中很可能含有这些调控基因。Men-myco-93-63中这3个调控基因的初步检测为玫瑰黄链霉菌功能基因的获得、菌株的遗传改良和代谢调控途径的研究提供了重要依据。