Changes of macromolecular organizations in nonjunctional sarcolemmas after cross-innervation──a study offast-and slow-twitch muscle fibres in rats

The purpose of the present study was to analyse the changes of macromolecular organizations in nonjunctional sarcolemmas of different types of skeletal muscle fibres after cross-innervation. In normal rats the mean density of square arrays (6 nm particles organized in orthogonal arrays) was 9.02/μm2 for the nonjunctional sarcolemmas of fast-twitch extensor digitorum longus (control EDL,CE) nuscle fibres and 0.34/μm2 for the nonjunctional sarcolemmas of slow-twitch soleus (control SOL, CS) muscle fibres. After cross-innervation between the fast-twitch EDL and slow-twitch SOL muscle fibres by slow and fast muscle merves respectively for three months, the mean density was 0.45/μm2 for the nonjunetional sarcolemmas of the operated-EDL (OE) and 8.3/μm2 for the nonjunctional sarcolemmas of the operated SOL (OS). This indicates that the cross-innervation causes a reciprocal transformation of the number and distribution of such macromolecular organizations in the electrically excitable nonjunctional sarcolemmas.

牛磺酸对家兔心肌肌膜和磷脂脂质体脂质过氧化的影响

在家兔心肌肌膜和人工生物膜脂质体上,牛磺酸显著抑制氧自由基发生系统(FeCl_3和抗坏血酸)所引起的脂质过氧化物丙二醛的增加,其抑制作用呈剂量依赖和时间依赖关系。本结果证实牛磺酸具有抗氧化作用,在膜水平上直接起到自由基清除剂作用。

低氧调控大鼠运动性肌损伤的特征MicroRNA表达

目的:筛选低氧调控大鼠运动性肌损伤(EIMD)的特征MicroRNA(miRNA),预测分析特征miRNA调控膜损伤的靶点。方法:56只健康雄性SD大鼠平均分为安静对照组(C),运动后常氧休息24小时组(N24)、48小时组(N48)、72小时组(N72)以及运动后低氧暴露24小时组(H24)、48小时组(H48)、72小时组(H72),采取一次间歇性离心运动复制EIMD模型。采用伊文氏蓝(EBD)染色法鉴定EIMD膜损伤特征,基因芯片进行低氧和常氧之间差异性miRNA筛选,RT-q PCR验证芯片结果后获得特征miRNA表达谱,比对各组的特征miRNA和膜损伤相关特征蛋白以及信号通路核心分子的m RNA表达,预测和分析特征miRNA的可能靶基因及调控途径。结果:筛选并验证得出5条低氧调控大鼠EIMD的特征miRNA:miR-694、miR-1904、miR-881*、miR-211-5p、miR-465-5p。通过特征miRNA、膜损伤相关蛋白和相关通路核心分子进行综合对比以及生物信息学分析得出,miR-694的靶标可能性较大的是dystrophin、JNK和AKT以及mTOR;miR-211-5p的靶标可能性较大的是mTOR。结论:低氧可以影响EIMD大鼠腓肠肌miRNA表达谱发生明显改变。miR-694和miR-211-5p有可能与低氧调控EIMD膜损伤的miRNA调控机制密切相关。

人参皂甙对犬心肌Na^+、K^+-ATP酶活力的影响

人参茎叶总皂甙(GNS)和人参根总皂甙(GRS)10、20和40mg/kg,显著抑制犬心肌细胞膜Na^+,K^+-ATP酶的活力;人参茎叶二醇组皂甙(PDS)和三醇组皂甙(PTS)5、10和20mg/kg,也显著抑制Na^+,K^+-ATP酶的活力。离体实验表明:GNS、GRS、PDS和PTS在0.01、0.10和1.00g/L,对犬心肌细胞膜Na^+,K^+-ATP酶的活力均具有抑制作用。提示人参的正性肌力作用可能与其对心肌Na^+,K^+-ATP酶的抑制有关。

银杏叶提取物对运动大鼠肌膜Na^+,K^+-ATP酶活性的影响

目的为研究银杏叶提取物(EGb761)对大鼠大强度跑台运动及其肌膜Na+,K+-ATP酶活性的影响。方法采用大强度上坡跑大鼠运动模型,测定运动力竭时间、Na+,K+-ATP酶、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性、谷胱甘肽含量、总抗氧化能力、丙二醛(MDA)水平。结果EGb761可以提高大鼠大强度运动至力竭的时间,并使单次定量运动后即刻白肌肌膜总抗氧化能力(TAOC)和谷胱甘肽含量(GSH)升高、MDA水平下降。结论EGb761可能通过直接和间接途径清除大强度常规训练时产生的自由基,保护肌膜Na+,K+-ATP酶,提高训练效果,延长运动时间;明显提高单次定量运动后即刻GSH,TAOC,降低肌膜MDA水平。

青春期前隐匿性阴茎肉膜组织病理学分析及临床意义

目的:评估青春期前隐匿性阴茎肉膜组织病理学特点及其临床意义。方法:10例青春期前隐匿性阴茎患儿作治疗组,予以改良Devine术治疗。10例正常青春期前儿童作对照组,予以包皮环切术治疗。分别于术前行阴茎长度测量;通过术中解剖学观察,以及用Masson三色染色法检测阴茎肉膜组织纤维化程度。结果:治疗组患儿术前阴茎长度为(1.49±0.17)cm,较对照组[(4.26±0.23)cm]明显短(P<0.01)。术中发现阴茎的隐匿程度与其阴茎肉膜纤维条索状组织远端附着部位有关,其远端附着点越靠近冠状沟,阴茎的隐匿程度越严重。Masson三色染色示治疗组阴茎肉膜组织胶原纤维阳性面积比为(65.6±6.9)%,明显高于对照组的(37.1±4.7)%(P<0.01)。结论:隐匿性阴茎的肉膜组织明显呈纤维化改变,其手术关键是彻底切除纤维化的阴茎肉膜组织。

低浓度毒毛旋花子苷原对离体豚鼠衰竭心脏的影响

目的 研究低浓度毒毛旋花子苷原 (strophanthidin ,Str)对离体衰竭心脏心功能及心肌细胞膜Na+,K+ ATP酶活性的影响。方法 Langendorff离体心脏灌流装置制备戊巴比妥钠心衰模型 ,八道生理记录仪测定不同浓度Str对心功能的影响 ,无机磷法测定各组心肌细胞膜Na+,K+ ATP酶活性。结果 Str 1× 10 -9～ 1× 10 -7mol·L-1均能不同程度地持续增加衰竭心脏的心率、左室收缩压及左室收缩的最大速率 ,但 1× 10 -7mol·L-1对Na+,K+ ATP酶活性无明显抑制 ,1× 10 -10 ～ 1× 10 -8mol·L-1则可升高Na+,K+ ATP酶的活性 (P <0 0 5或P <0 0 1)。 1× 10 -6 ～ 1× 10 -4 mol·L-1可使心功能指标先升高、后降低 ,且伴有心脏收缩不规则和心律失常 ,也可剂量依赖性地抑制Na+,K+ ATP酶活性 (P <0 0 1)。结论 高浓度Str的正性肌力及伴有的心脏毒性作用是通过抑制Na+,K+ ATP酶实现的 ;而低浓度的正性肌力作用则和Na+,K+

低氧调控EIMD后肌细胞膜损伤MAPK机制的探索与验证

目的:探索运动性肌损伤(EIMD)后低氧调控肌细胞膜损伤的MAPK机制,并进行验证。方法:健康雄性SD大鼠随机分为对照组、常氧24 h、48 h、72 h组和低氧24 h、48 h、72 h组。大鼠以EIMD运动模型进行间歇性下坡跑离心运动,腹腔注射伊文氏蓝荧光染色剂(EBD),取腓肠肌样本,用激光共聚焦显微镜观察EBD切片和阳性细胞率(PRC)评价膜损伤。用RT-qPCR和Westernblot测定MAPK的ERK1/2、JUN、p38和BMK1的mRNA表达、蛋白含量和磷酸化水平。再开展抑制剂实验以确认低氧调控膜损伤MAPK机制中的关键信号通路。结果:EIMD后,低氧与常氧各组均出现明显膜损伤,低氧各组阳性细胞率显著高于常氧各组和对照组(P<0.01)。低氧组ERK1、p38和BMK1通路的mRNA表达、蛋白含量和磷酸化水平显著高于常氧对应组(P<0.05),JNK信号通路蛋白含量和磷酸化水平无显著变化(P>0.05)。抑制剂实验结果表明,ERK1/2和p38抑制剂组的蛋白含量和磷酸化水平无显著变化(P>0.05)。BMK1抑制剂组24 h、48 h的磷酸化水平、阳性细胞率显著低于安慰剂对应组(P<0.001),且与对照组无显著差异(P>0.05)。结论:1)EIMD后低氧明显加剧膜损伤并造成损伤峰值前移。2)低氧调控膜损伤主要通过BMK1通路实现,抑制BMK1磷酸化能阻止低氧对膜损伤的加剧作用。BMK1/ERK5通路是低氧调控EIMD后膜损伤MAPK机制的关键途径。

肌膜Na^+,K^+-ATP酶与骨胳肌运动能力

利用文献资料法 ,分析了Na+ 、K+ 平衡能力与骨骼肌疲劳的关系 ,认为肌膜上的Na+ -K+ -ATP酶是维持肌纤维结构和功能的重要蛋白质 ,Na +、一些激素、递质通过复杂的信号转导机制对Na+ ,K+ -ATP酶活性进行调节。周期性训练刺激可以增加肌纤维细胞膜上酶的数量和活性 ,产生良性适应。研究表明疲劳时Na+ ,K+ -ATP活性下降 ,Na+ 、K+ 调节能力不足 ,胞内K+ 持续丢失 ,胞外Na+ 内流 ,静息电位绝对值随运动时间延长明显下降 ,肌肉做功能力下降。有资料表明 ,运动中自由基产生增加 ,以多种方式攻击Na+ ,K+ -ATP酶和脂质双分子层 ,是疲劳时酶活性下降的重要原因。

低氧调控EIMD后calpain活性与肌细胞膜损伤机制的探索研究

目的:观察低氧对运动性肌损伤(exercise-induced muscle damage,EIMD)后肌细胞膜损伤、钙激活中性蛋白酶(calpain)和肌细胞膜骨架蛋白(dystrophin、utrophin和dysferlin)的影响,探索低氧调控EIMD后肌细胞膜损伤的可能机制。方法:110只雄性SD健康大鼠分两批进行实验。研究Ⅰ:70只大鼠随机均分为安静对照组、常氧24 h、48 h和72 h组以及低氧24 h、48 h和72 h组,每组10只。大鼠在-16°跑台上以26.8 m/min速度持续运动5 min,运动10次,组间休息1 min。低氧和常氧各组大鼠运动后注射伊文氏蓝荧光染色剂观察膜损伤情况,用RT-q PCR和Western blot测定腓肠肌calpain和膜骨架蛋白的mRNA表达和蛋白含量。研究Ⅱ:40只大鼠随机均分为空白对照组、安慰剂24 h、48 h组和calpain抑制剂24 h、48 h组,每组8只。测定calpain抑制剂对其蛋白含量的影响,观察膜损伤情况,并验证calpain在EIMD后低氧损伤肌细胞膜中所起的作用。结果:大鼠EIMD后,1)低氧各组膜的通透性增加、完整性被破坏,阳性细胞率(positive ratio of cell,PRC)与对照组和常氧对应组相比有显著差异(P<0.01);2)低氧72 h组calpain1、calpain2的mRNA表达显著高于常氧72 h组(P<0.05),低氧各组calpain1、calpain2和calpain3的蛋白含量与常氧对应组相比无显著差异(P>0.05);3)低氧24 h组dystrophin、utrophin的m RNA表达显著低于常氧24 h组(P<0.01),但两组的蛋白含量无显著差异(P>0.05)。低氧各组dys-ferlin的mRNA表达和蛋白含量与常氧各组相比无显著差异(P> 0.05)。4)抑制calpain1、calpain2活性后,低氧24 h组calpain蛋白含量显著降低(P<0.05),低氧各组阳性细胞率显著低于安慰剂各组(P<0.01),但仍显著高于对照组(P<0.05)。结论:1) calpain1、calpain2被激活与低氧加剧大鼠EIMD后的肌细胞膜损伤有关,但calpain并非通过降解膜骨架蛋白dystrophin、utrophin和dysferlin的途径而导致膜损伤。2)抑制calpain1、calpain2活性能有效减轻但不能避免低氧加剧EIMD后的膜损伤,其中还可能存在其它的调节机制。

Ⅵ型胶原肌膜选择性缺失型Ullrich型先天性肌营养不良临床及免疫病理特点

目的探讨Ⅵ型胶原肌膜选择性缺失型Ullrich型先天性肌营养不良(Ullrich congenital muscular dystrophy,UCMD)的临床和免疫病理特点。方法收集2例Ⅵ型胶原肌膜选择性缺失型UCMD患者的临床资料,进行肌肉活体组织检查,标本行Ⅵ型胶原免疫荧光染色和Ⅵ型胶原/Ⅳ型胶原双重免疫荧光染色,对病理结果进行分析。结果新生儿肌张力低下、近端关节挛缩和远端关节弹性过度是Ⅵ型胶原肌膜选择性缺失型UCMD的临床特点。抗Ⅵ型胶原免疫荧光染色提示2例患者均为Ⅵ型胶原表达部分缺失。Ⅵ型胶原/Ⅳ型胶原双重免疫荧光染色可见肌膜Ⅵ型胶原表达选择性缺失。结论Ⅵ型胶原肌膜选择性缺失型UCMD以近端关节挛缩和远端关节弹性过度为临床特征,临床严重度和Ⅵ型胶原完全缺失者没有显著差异。双重免疫荧光染色提示Ⅵ型胶原在肌膜上表达选择性缺失是其免疫病理特点。

溶血磷脂酸对大鼠心肌细胞膜Na^+-Ca^(2+)交换的影响

本研究采用蔗糖梯度离心法制各大鼠心肌细胞膜，观察溶血磷脂酸（ ＬＰＡ）对心肌细胞膜 Ｎａ~＋－Ｃａ^(２＋)交换的影 响。结果发现ＬＰＡ（１～２０ｎｍｏｌ／Ｌ）呈剂量依赖性和时间依赖性刺激Ｎａ~＋一Ｃａ^（２＋）交换活性增加。Ｇｐｐ（ＮＨ）ｐ呈剂量依赖 性替代ＬＰＡ刺激的Ｎａ~＋－Ｃａ^(２＋)交换活性；ＰＴＸ可抑制ＬＰＡ对Ｎａ~＋－Ｃａ^(２＋)交换的激活；Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ，Ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ，Ｐｒａｚｏｓｉｎ，Ａｔｒｏｐｉｎｅ，Ｌｏｓａｒｔａｎ，ＢＱ１２３和磷脂酰胆碱对ＬＰＡ诱导的Ｎａ~＋－Ｃａ~２＋交换活性无影响，而磷脂酰丝氨酸可增加对照和ＬＰＡ 两组的 Ｎａ~＋－Ｃａ^(２＋)交换活性。这些结果表明 ＬＰＡ可通过 ＰＴＸ敏感的 Ｇ蛋白刺激大鼠心肌细胞膜 Ｎａ~＋－Ｃａ^(２＋)交换活性。

苄普地尔消退L－甲状腺素诱发的大鼠心肌肥厚及其质膜Ca^（2＋），Mg~（2＋

研究了苄普地尔对Ｌ－甲状腺素（１ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１×７ｄ）诱发的大鼠心肌肥厚和心肌质膜Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活力增高的影响，经苄普地尔１０或２０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１ｐｏ治疗３ｄ后，心肌肥厚及其升高的Ｃａ２＋，Ｍｇ２＿－ＡＴＰ酶活力和Ｖｍａｘ均降至正常，但甲状腺素引起的该酶对ＡＴＰ的亲和力降低未被苄普地尔改变。苄普地尔组左心室蛋白质含量较未治疗组亦显著减少，但未恢复至正常。结论：苄普地尔消退Ｌ－甲状腺素诱发的大鼠心肌肥厚，心肌Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶活力增高和蛋白质生物合成的增加。

缺血性损伤对大鼠心肌生物膜的影响及益心康胶囊的保护作用

观察了异丙肾上腺素 (ISO)对大鼠心肌生物膜的损伤作用 ,评价了益心康胶囊对心肌生物膜

DMD、BMD患者骨骼肌、皮肤立毛肌肌营养不良蛋白同时欠损

目的研究、对比肌营养不良蛋白(dystrophin)在杜兴型肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)和贝克型肌营养不良(Becker muscular dystrophy,BMD)患者活检骨骼肌、皮肤立毛肌中的表达。方法用肌营养不良蛋白三个不同区域的单克隆抗体(Dystrophin-N、-C、-R)对11例DMD患者,5例BMD患者和3例其他神经肌病患者同时行活检骨骼肌、皮肤免疫组织化学染色分析。结果与对照例相比,11例DMD患者抗Dystro-phin-N、-C、-R单克隆抗体免疫组织化学染色显示:骨骼肌肌纤维膜Dystrophin-N、-C、-R呈完全欠损;皮肤立毛肌Dystrophin-N、-R完全欠损,Dystrophin-C轻微表达。5例BMD患者抗Dystrophin-N、-C、-R单克隆抗体免疫组织化学染色显示:肌营养不良蛋白在骨骼肌肌纤维膜和皮肤均呈不完全欠损。结论DMD和BMD患者肌营养不良蛋白在骨骼肌肌纤维膜、皮肤立毛肌呈完全/不完全欠损,与骨骼肌活检相同,皮肤活检也是分子病理学诊断DMD、BMD简便、易行、可靠的方法。

利多卡因、异丙酚对缺血再灌注心肌细胞膜Na^+-K^+-ATP酶、肌浆网Ca^(2+)-ATP酶活性的影响

目的观察利多卡因、异丙酚对缺血再灌注心肌细胞膜Na+ _K+ _ATP酶、肌浆网Ca2 +_ATP酶活性的影响。方法SD大鼠48只 ,随机均分为6组。假手术组 ;生理盐水组 ;利多卡因5mg·kg-1 组 ;利多卡因10mg·kg-1 组 ;异丙酚300μg·kg-1·min-1 组 ;异丙酚1000μg·kg-1·min-1 组。于缺血前5min ,生理盐水及利多卡因经股静脉注射给药(30s内注射完) ;异丙酚持续输注至缺血开始时为止。结扎冠脉左前降支 ,造成左室前壁相应心肌组织缺血15min ,然后松开结扎线再灌注10min ,应用分光光度法测定心肌细胞膜Na+_K+ _ATP酶、肌浆网Ca2 + _ATP酶活性。结果利多卡因可明显地促进肌浆网Ca2 + _ATP酶活性的恢复(P<0.05) ,大剂量时还促进心肌细胞膜Na+ _K+ _ATP酶活性的恢复(P<0.05)。异丙酚可显著地促进心肌细胞膜Na+ _K+ _ATP酶活性的恢复(P<0.05 ,P<0.001),大剂量时促进肌浆网Ca2 + _ATP酶活性的恢复(P<0.05)。结论利多卡因、异丙酚可促进再灌注期间心肌细胞膜Na+ _K+ _ATP和肌浆网Ca2 + _ATP酶活性的恢复 ,从而抑制钙超载而减轻心肌缺血再灌注损伤。

硒对大鼠心肌细胞膜Na^+,K^+—ATP酶及5'—核苷酸酶活性的影响

本文用克山病病区低硒粮、病区粮加Na_2SeO_3及常备饲料分别喂养Sprague—Dawley纯种大鼠1～3个月,动态观察了大鼠心肌细胞膜Na^+,K^+—ATP酶(Na^+,K^+—ATPase)及5'一核苷酸酶(5'—ND)活性变化。结果发现低硒组大鼠心肌细胞膜Na^+,K^+—ATPase和5'—ND活性从实验的第1到第3个月均明显低于补硒组和常备饲料组大鼠;低硒组大鼠肝脏和血浆硒含量及红细胞和肝脏的GSH—px活性也明显降低。补硒可使上述各项指标接近常备饲料组大鼠水平,表明硒对心肌细胞膜有稳定和保护作用。

云南甘草总皂甙对氧自由基诱导羊心肌细胞膜Na~＋，K~＋－ATP酶活性降低的保护作用

云南甘草总皂甙对正常羊心肌细胞膜Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性无影响；但对氧自由基诱导羊心肌细胞膜Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性的降低有明显保护作用，随浓度增高，酶的活性逐渐升高。与对照组比较，总皂甙浓度为０．２ｍｇ·Ｌ－１时，酶的活性恢复２７．９％，浓度为０．８ｍｇ·Ｌ－１，酶的活性恢复４６．６％。

大鼠心肌整体缺血及离体再灌注致生物膜的损伤作用

目的和方法 :利用整体大鼠异丙肾上腺素损伤 (ISO)和离体大鼠全心停灌 再灌 (I R)两种模型 ,观察了心肌缺血和缺血 再灌注对心肌生物膜—线粒体膜及肌纤维膜损伤的影响。结果 :ISO(5mg kg ,皮下注射 )和I R(2 0min 2 0min)可导致大鼠心脏生物膜产生严重损伤 ,表现为心肌线粒体脂质过氧化产物明显增加 ,线粒体磷脂酶A2 (PLA2 )激活 ,从而导致线粒体膜磷脂 (PL)含量减少 ,磷脂分解产物游离脂肪酸 (FFA)增加 ,膜脂流动性 (LFU)降低 ,线粒体Ca2 + ATPase及肌纤维膜Na+,K+ ATPase活性降低 ,线粒体呼吸功能降低、呼吸链氧化磷酸化解偶联 ,高能磷酸化合物生成减少。结论 :整体ISO和离体I R可导致大鼠心肌线粒体。

再灌注致大鼠心肌生物膜损伤及益心康胶囊的保护作用

目的 :观察再灌注对心肌生物膜的损伤 ,评价中药复方—益心康胶囊 (H30 3)对生物膜保护作用。方法 :利用离体大鼠全心停灌 /再灌 (I/R)模型 ,预先灌注H30 3(0 .2 ,0 .1mg/mL ,灌注 10min) ,观察对MDA、磷脂酶A2 、磷脂、游离脂肪酸、膜脂流动性、ATPase及线粒体呼吸功能的影响。结果 :I/R可导致离体大鼠心脏生物膜产生严重损伤。H30 3可通过减轻大鼠心肌组织脂质过氧化程度、抑制PLA2 活性、升高线粒体磷脂含量、降低FFA水平、改善膜脂流动性、保护线粒体Ca2 + ATPase及肌纤维膜的Na+ ,K+ ATPase活性及改善线粒体呼吸功能等作用而发挥抗损作用。结论 :H30