Anti-Tumor and Anti-Diabetic Effects of Sarsasapogenin

In this paper,the pharmacological effects and molecular mechanisms of sarsasapogenin,such as anti-oxidant,anti-inflammatory and anti-diabetic effects,are reviewed in order to provide a theoretical basis for the subsequent development and clinical application of sarsasapogenin.

Identification of Gardenoside and Sarsasapogenin from Qingwen Baidu Granules by TLC

[ Objective ] We aimed to establish the identification method of gardenoside and sarsasapogenin in Qingwen baidu granules. [ Method] With ethyl ace- tate-acetone-formic acid-water （10：7：2：0.5） as the developer and 10% sulfuric acid ethanol solution as the chromogenic reagent, the samples were heated at 100 ~C until the spots were clearly visible, and the existence of gardenoside was checked under natural light. With toluene-acetone（9：l ） as the developer and 5% vanillin sulfuric acid solution as the chromogenic reagent, the samples were heated at 105 ~C until the spots were clearly visible, and the existence of sarsasapogenin was checked under natural light. [Result] Qingwen baidu granules had the same spots with gardenoside and sarsasapogenin at the same Rfvalue under natural light. [ Conclusion] A TLC method detecting gardenoside and sarsasapogenin in Qingwen baidu granules was established, which had good specificity and repeatability, suitable for rapid detection of gardenoside and sarsasapogenin.

基于细胞代谢组学技术的知母皂苷元作用于肝癌细胞HepG2机制研究

目的通过细胞代谢组学实验探究知母皂苷元作用于肝癌HepG2的抗肿瘤机制。方法采用液质联用和核磁技术研究知母皂苷元作用于肝癌细胞HepG2后的代谢机制,应用正交偏最小二乘判别分析方法筛选潜在生物标志物,应用MetaboAnalyst和KEGG PATHWAY数据库查找相关的代谢途径。结果共鉴定筛选出谷氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、柠檬酸盐和2-酮戊二酸等51种生物标志物,寻找到丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢通路;苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成代谢通路;酮体的合成与降解的代谢途径等5条主要代谢通路。结论知母皂苷元作用于HepG2细胞后,可以引起肝癌HepG2细胞内代谢物较为广泛的变化。其中代谢标志物主要涉及氨基酸代谢和能量代谢,最终抑制了肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡。

RP-HPLC-ELSD法测定知母药材及含知母制剂中菝葜皂苷元的含量

目的 阐明 EL SD对于检测菝葜皂苷元等不含发色团的化合物是一种优越的检测器 ,为知母药材及含知母制剂提供了一种可靠的质检手段。方法 采用 RP- HPL C- EL SD法测定知母药材及含知母制剂中菝葜皂苷元的含量。结果 分离完全的色谱峰 ,有良好的线性关系 ,r=0 .9990 ,对药材及制剂测定的回收率分别为 10 0 .5 %、91.38%。结论 该方法先进、可靠、简便 。

知母皂苷元对成骨细胞活性和破骨细胞分化及功能的影响

目的:考察知母皂苷元(SAR)对体外培养成骨细胞活性和破骨细胞分化及功能的影响。方法:培养小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1,分别采用MTT法、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测及茜素红染色法观察SAR对MC3T3-E1细胞增殖、ALP活性及矿化结节形成的影响;分别采用皮质骨来源破骨细胞分离及骨髓间充质干细胞诱导破骨细胞形成两种方法培养破骨细胞,利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)阳性细胞计数及骨吸收陷窝计数来观察不同浓度SAR对成熟破骨细胞活性及破骨细胞诱导分化的影响。结果:与对照组相比,各质量浓度SAR(0.01,0.1,1μg/mL)对MC3T3-E1细胞均具有明显的促增殖作用(P<0.05,P<0.01);处于快速增殖的MC3T3-E1细胞给药处理后各组间ALP活性未见明显差异,但对于增殖晚期MC3T3-E1细胞,不同浓度SAR均可使ALP活性增高,其中1μg/mL组效应最强,与对照组相比差异非常显著(P<0.01);连续给药处理细胞15 d,SAR各组矿化结节形成数量与对照组相比均有增多趋势。此外,各浓度SAR对成熟破骨细胞数量及骨吸收能力均无明显影响,但均能抑制骨髓细胞分化形成破骨细胞。结论:SAR能促进体外培养的成骨细胞的增殖与分化成熟;SAR对分化成熟的破骨细胞无明显影响,但可抑制骨髓细胞向破骨细胞的分化,从而减少破骨细胞的产生。

知母皂苷元对谷氨酸引起的皮层神经元损伤的保护作用研究

目的观察知母皂苷元(Sarsasapogenin,SAR)对谷氨酸引起的皮层神经元损伤的保护作用。方法大鼠乳鼠大脑皮层神经元,培养7 d后用于实验。倒置相差显微镜观察神经元树突生长发育情况;用MTT法测定细胞活力;Ho-echst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;Western印迹法检测神经元SYP、caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达水平。结果形态学观察结果显示谷氨酸可明显抑制神经元树突的生长发育,表现为神经元树突总长度明显降低、一级树突数目明显减少、最大分支级数明显减少及胞体面积缩小。SAR(10、30、100μmol.L-1)可明显抑制谷氨酸对神经元树突生长发育的抑制作用,并呈明显浓度依赖。MTT和Ho-echst33258核染色结果显示谷氨酸可降低神经元细胞活力及增加神经元细胞凋亡百分比。SAR(10、30、100μmol.L-1)能明显对抗谷氨酸引起的神经元细胞活力降低及细胞凋亡百分比增加。Western印迹结果显示谷氨酸可明显降低SYP蛋白表达水平及增加活性caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达水平。SAR(10、30、100μmol.L-1)可明显对抗谷氨酸引起SYP蛋白表达降低及活性caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达增加。结论知母皂苷元能够明显对抗谷氨酸引起的皮层神经元损伤作用。

知母皂苷元对高糖引起的体外培养大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的探讨知母皂苷元(sarsasapogenin,Sar)对高糖引起的海马神经元损伤是否有保护作用。方法选用出生0～24 h Sprague-Dawley(SD)大鼠乳鼠,取海马,进行海马神经元体外培养,培养7 d用于实验。实验分为正常对照组、高糖组、高糖+Sar(10、30、100μmol.L-1)组;对照组:加入等量含0.1%DMSO培养基;高糖处理组:分别加入葡萄糖(30、50、100 mmol.L-1)作用48 h;高糖+Sar(10、30、100μmol.L-1)组:先加入不同浓度Sar(10、30、100μmol.L-1)作用1 h,然后加入葡萄糖(50 mmol.L-1)作用48 h;应用MTT方法观察细胞活力,免疫荧光和Western免疫印迹方法观察神经元突触素表达的改变。应用Hoechst 33258核染色检测神经元凋亡。应用Western免疫印迹方法观察caspase-3和多聚ADP核糖聚合酶(PARP)蛋白表达改变。结果加入葡萄糖(30、50、100 mmol.L-1)作用48 h可使培养神经元细胞活力明显降低,神经元突触素蛋白表达明显降低。另外高糖也可引起神经元凋亡细胞百分比和活性caspase-3、PARP蛋白表达水平也较对照组明显提高。在加入高糖前加入不同浓度Sar(10、30、100μmol.L-1)可明显对抗高糖引起的这些变化。培养海马神经元突触素蛋白表达较高糖组(50 mmol.L-1)明显增加,神经元凋亡细胞百分比和活性caspase-3、PARP蛋白表达水平也较高糖组明显降低。结论 Sar对高糖引起的海马神经元损伤具有明显的保护作用。

中药知母有效组分——知母皂甙元“滋阴”作用的研究

本工作以^(123)I-心得静结合分析法及环核苷酸RIA法观察了知母中提取得到的知母皂甙元对甲亢模型(模拟“阴虚”)βAR-cAMP系统的作和,结果表现,知母皂甙元明显降低甲亢小鼠脑β受体的RT值,显著降低甲亢小鼠β受体-cAMP系统的反应性,重现了知母水煎剂的下调作用。体外竞争抑制实验表明,知母皂甙元和知母皂甙元半琥珀酸都不能抑制^(125)I-心得静与β受体的结合。

响应曲面法优化超声波提取玉竹总皂苷的工艺研究

本研究在单因素实验的基础上,以菝葜皂苷元为对照品,通过响应曲面法对影响玉竹总皂苷得率的不同因素进行优化,以期研究超声波提取玉竹总皂苷的工艺条件。超声波提取的最佳工艺条件为:超声功率354 W,超声时间31 min,料液比1∶27(g∶mL)。实验结果所得玉竹总皂苷得率为4.72%,与预测值高度拟合。该法为进一步开发利用玉竹资源以及新药研发提供科学稳定的依据。

HPLC-ELSD内标法测定知母药材中菝葜皂苷元含量

目的:建立 HPLC—ELSD 内标法,测定知母药材中菝葜皂苷元含量。方法:采用胆同醇为内标,Kromasil C_(18)柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇为流动相,流速1 mL·min^(-1)。柱温为30℃。蒸发光散射检测器漂移管温度为50℃,蒸发温度为70℃,以氮气为雾化气,压力为1.03×10~5Pa。结果:菝葜皂苷元进样浓度存0.02～0.50 mg·mL^(-1)内,进样量的常用对数与对照品峰和内标峰面积比值的常用对数成良好线性关系(r=0.9995);平均回收率(n=5)为96.3%,RSD 为2.1%。结论:建立的内标方法准确、快速,是控制知母药材质量较理想的方法。对我国北方主要知母产地药材中菝葜皂苷元含量测定和比较表明不同产地野生知母质量差异较大。

菝葜皂苷元对人结肠癌细胞LoVo凋亡的影响

目的探讨菝葜皂苷元对人结肠癌细胞LoVo凋亡的影响。方法采用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测LoVo细胞的凋亡率;采用流式细胞仪检测细胞周期进程;采用流式细胞仪JC-1染色法检测线粒体膜电位(ΔΨm)水平。结果菝葜皂苷元作用细胞48h后可以诱导细胞凋亡,菝葜皂苷元可阻滞细胞于G2/M期,菝葜皂苷元诱导细胞凋亡时伴随着线粒体膜电位的降低。结论菝葜皂苷元能诱导细胞凋亡,其诱导凋亡的途径可能与线粒体通路有关。

天冬类药材中洋菝契皂苷元的含量测定

天冬类药材中皂苷类成分种类较多,我们选择其共有的皂苷元洋菝契皂苷元为质量评价指标成分,利用薄层扫描法对天冬类中药材中洋菝契皂苷元的含量进行了分析测定。结果表明,来源于7种天冬属植物块根的12件商品药材样品中均含有以洋菝契皂苷元为甙元的甾体皂苷,皂苷元含量与天冬药材的植物来源无明显的相关性,且皂苷元的含量与商品等级成反比。

芦笋根中菝葜皂甙元的气相色谱测定

芦笋根粉末经提取、分离得到菝葜皂甙元。利用ＧＣ－ＭＳ、ＩＲ、并与气相色谱保留值比较进行定性分析，气相色谱外标法定量测定，同时考察了气相色谱定量测定的回收率和水解时间对测定值的影响。实验结果表明，风干芦笋根中菝葜皂甙元的含量在１％以上。

知母中萨尔萨皂甙元的气相色谱定量测定

目的:测定知母根茎中萨尔萨皂甙元的含量。方法:采用毛细管气相色谱法,以胆固醇为内标,样品在柱温为270℃的HP1色谱柱上,以氮气作载气进行分析。结果和结论:在0.245～2.94μg·μl-1线性良好,平均回收率为95.52%±1.77%。

知母皂苷元对维A酸致小鼠骨质疏松的防治作用

目的:研究知母皂苷元(SAR)对维A酸致小鼠骨质疏松症的防治作用,并探讨其主要作用机理。方法:维A酸(105 mg.kg-1)致小鼠骨质疏松模型,SAR(10、30、90 mg.kg-1)灌胃给药,实验过程监测体重,2周后以比色法测定血清钙、磷含量和碱性磷酸酶(s-ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(s-TRAP)活性,竞争放射免疫法测定血清中骨钙素(s-BGP)、雌二醇(s-E2)含量,处死动物后取脾、胸腺、子宫称重,取股骨进行骨组织形态学观察,测定并比较骨计量学和骨钙、骨磷、骨镁及骨羟脯氨酸含量。结果:维A酸可造成小鼠骨丢失为主的骨质疏松,SAR可对抗维A酸所致的小鼠骨横径、骨矿物质及骨胶原的减少,升高s-E2及s-BGP值,降低s-ALP及s-TRAP水平。结论:知母皂苷元对维A酸所致小鼠骨质疏松具有一定的防治作用,其机制可能与其减缓雌激素水平降低,抑制骨高转换有关。

知母中菝葜皂苷元前处理方法探讨

目的:对《中国药典》2005版一部中知母药材的菝葜皂苷元含量测定的前处理条件进行改进。方法:采用L9(33)正交设计表,对超声时间、提取溶剂乙醇的比例以及超声次数等因素进行优化。为确保色谱方法的沿用性,还做了加样回收率考察。结果:最终确立了70%乙醇超声20 min提取2次作为最优的提取条件,再进行水解得到皂苷元进行含量测定。结论:与药典方法比较,改进后的方法测定的含量结果有了较大提高,能够反映出样品中真实的菝葜皂苷元含量。

知母皂甙元对“甲高”小鼠脑βAR的下调作用

知母对某些“阴虚”模型细胞水平βAR及MchoR有双向调节作用,本文从知母中提取得到知母皂甙元(拨契皂甙元),实验表明它与知母水煎剂相似,能明显降低“甲高”小鼠脑β受体R_T值,但对亲和力(K_D)无影响,还能显著地改善“甲高”小鼠引起的体重下降。

高效液相-蒸发光散射检测器法测定知母中菝葜皂苷元含量

目的：采用高效液相-蒸发光散射检测器（HPIC-EISD）法测定知母中菝葜皂苷元的含量。方法：ODS-C8柱，流动相为甲醇-水，梯度洗脱。因菝葜皂苷元为一甾体皂苷元，无紫外特征吸收，选择了通用型检测器-蒸发光散射检测器（ELSD）。结果：菝葜皂苷元在0.12～4.0μg范围内具良好的线性关系，r=0．9998，平均回收率为98．3％。结论：本方法有较高的灵敏度和回收率，可用于知母中菝葜皂苷元的含量测定。

正交法优选光知母水处理工艺

目的:探讨光知母的最佳水处理工艺。方法:以菝葜皂苷元、芒果苷含量为指标选择润制时间、烘制温度、切制规格3个因素,用L9(3)4正交设计表,采用方差分析的数学分析方法,对光知母进行水处理工艺的优选。结果与结论:干燥温度、切制规格对菝葜皂苷元、芒果苷含量无明显影响,水处理时间具有显著性差异。光知母水处理最佳工艺为:润制时间15 h,干燥温度60℃,切制规格3 mm。

柱前衍生高效液相色谱法测定知母中菝葜皂苷元的含量

目的 建立用苯甲酰氯与菝葜皂苷元进行柱前衍生化反应，以HPLC-UV法测定知母药材中菝葜皂苷元的含量。方法 采用Agilent C18柱（150mm×4．6mm，5pm），流动相为甲醇-水（体积比99：1），检测波长为230nm，流速为1．1mL·min^-1，柱温为33℃。结果 菝葜皂苷元质量浓度在0．20～4．00g·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9996），平均回收率为98．3％（n=9），RSD为2．1％。结论 本法可用于菝葜皂苷元的定量分析。