单抗MGb1的噬菌体呈现型ScFv片段的制备

目的 制备胃癌单抗MGb1的噬菌体呈现型单链可变区片段 (ScFv) ,为获得用于胃癌体内诊疗研究的靶向载体分子奠定基础。方法 从杂交瘤细胞分离mRNA ,扩增抗体重、轻链可变区(VH和VL)cDNA ,经linkerDNA连接形成ScFvDNA。将ScFvDNA与pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7感染后 ,获得重组噬菌体抗体ScFv。经亲和筛选和ELISA检测获得呈现MGb1ScFv的噬菌体单克隆。结果 VH、VL和ScFvDNA分别约为 340bp、32 0bp和 75 0bp。经筛选得到 17个呈现MGb1ScFv的噬菌体单克隆 ,其中结合抗原能力强的克隆有 4个。结论 获得了单抗MGb1的噬菌体呈现ScFv ,为拓展抗体的应用范围创造了条件。

细胞内单域抗体的研究及应用进展

来自骆驼或鲨鱼的单域抗体(Single domain antibodies,sd Ab)仅包含抗体的重链可变区,而从人抗体中筛选到的人sd Ab中包含重链(Heavy chain,VH)或轻链(Light chain,VL)的可变区。与完整抗体和sc Fv(Single chain antibody fragment)相比,sd Ab是体外和体内都稳定的非聚合分子。与sc Fv片段不同,sd Ab是细胞质/细胞核蛋白质的新型抑制剂,并可以在细胞质中正确折叠。sd Ab能特异性抑制翻译后修饰,如磷酸化位点,构象异构体或蛋白质的相互作用区域,这些区域不适合使用基因敲除及RNAi技术进行研究。作为细胞质/细胞核蛋白质的抑制剂,使用sd Ab的研究数量持续增加,同时使用无需免疫动物的合成单域抗体文库中,研究者筛选出一些有成药应用前景的药物分子。目前,研究涉及的抗原靶点包括病毒蛋白、癌相关蛋白、毒素、神经系统相关蛋白、植物和果蝇蛋白等,可以针对几乎所有的细胞质/细胞核中的抗原表位,进行功能性sd Ab的筛选。逃逸蛋白结构和细胞穿透肽的高效转染的研究,拓宽了sd Ab的应用领域。新一代细胞特异性纳米颗粒,将携带细胞质/细胞核sd Ab作为蛋白抑制剂,开拓病毒感染及癌症新的治疗领域。