弓形虫Ⅰ/Ⅱ型ROP16蛋白对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y凋亡和周期及增殖的影响

为了探讨刚地弓形虫Ⅰ(RH)、Ⅱ(Me49)型ROP16蛋白对SH-SY5Y细胞凋亡、周期及增殖的影响,本研究通过表达Ⅰ、Ⅱ型ROP16蛋白(HBLV-ROP16Ⅰ、HBLV-ROP16Ⅱ)和空载(HBLV-NC)的慢病毒感染SH-SY5Y细胞以获得稳转株,实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western-blot验证SH-SY5Y细胞内ROP16过表达情况,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,CCK-8法检测细胞增殖情况,RT-PCR和Western-blot分别对凋亡相关因子(Bax、p53、Bcl-2、Caspase-9)及细胞周期相关因子(p21、CDK6)的mRNA和蛋白表达水平进行检测。结果显示,相比于空白组(Control)和空载体组(HBLV-NC),过表达组(HBLV-ROP16Ⅰ、HBLV-ROP16Ⅱ)细胞的ROP的16 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),说明稳转株构建成功;过表达组细胞的凋亡比率、G1期细胞比率均显著升高(P<0.05),而细胞增殖率显著降低(P<0.05),凋亡相关因子(Bax、p53、Caspase-9)及p21的mRNA及蛋白均高表达(P<0.05),而抗凋亡因子Bcl-2和促细胞周期G1/S转化因子CDK6的mRNA及蛋白均低表达(P<0.05)。相比于空白组,空载体组均无明显变化(P>0.05)。上述结果表明弓形虫Ⅰ、Ⅱ型ROP16蛋白可诱导SH-SY5Y细胞凋亡、细胞周期阻滞在G1期及抑制SH-SY5Y细胞增殖。