五味子丙素通过SIRT1/PGC-1α/NRF1通路减轻脂多糖诱导的大鼠心肌细胞氧化应激损伤机制的研究

目的探讨五味子丙素通过沉默信息调节因子2相关酶1(silencing information regulator 2 related enzyme 1,SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活物1α(peroxisome proliferator activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)/核呼吸因子1(nuclear respiratory factor 1,NRF1)通路对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的大鼠心肌细胞氧化应激损伤的影响机制。方法通过LPS诱导建立大鼠心肌细胞损伤模型。将正常培养的大鼠心肌细胞H9c2分组为:对照组、LPS组、LPS+低剂量五味子丙素组、LPS+中剂量五味子丙素组、LPS+高剂量五味子丙素组、LPS+高剂量五味子丙素+SIRT1/PGC-1α/NRF1通路抑制剂尼克酰胺(niacinamide,NA)组。MTT法检测细胞存活率;试剂盒检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、丙二醛(malondialdehyle,MDA)、超氧化物歧化酶(superaxide dismutase,SOD)、还原性谷胱甘肽(glutathione,GSH)、氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、磷酸肌酸激酶(creatine pho sphate kinase,CPK)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;流式细胞仪检测凋亡率;western blot检测SIRT1、PGC-1α、NRF1蛋白表达水平。结果与模型组比较,低、中、高剂量五味子丙素能够依次提高LPS诱导的H9c2细胞存活率、SOD和GSH活性及SIRT1、PGC-1α、NRF1蛋白表达水平,同时依次降低凋亡率、AST、CPK、LDH、MDA和ROS水平(P<0.05)。SIRT1/PGC-1α/NRF1通路抑制剂NA可逆转五味子丙素对LPS诱导H9c2细胞氧化应激损伤的保护作用(P<0.05)。结论五味子丙素可能通过激活SIRT1/PGC-1α/NRF1通路减轻LPS诱导的H9c2细胞氧化应激损伤。

HPLC法同时测定不同产地五味子生品及醋炙品中5个主要活性成分的含量

目的:建立HPLC法同时测定不同产地五味子生品及醋炙品中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素和五味子丙素5个主要活性成分的含量。方法:采用Diamond C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱,流速:1.0 ml·min-1,检测波长:217 nm,柱温:30℃。结果:5种被测木脂素成分分离度良好;各成分质量与峰面积在测定范围内均呈良好的线性关系(r≥0.9994),重复性良好;平均回收率分别为98.2%,99.1%,101.8%,99.2%,101.2%,RSD分别为1.17%,0.80%,1.65%,1.49%,0.87%(n=6)。结论:该方法分离效率高,重复性好,经方法学验证,可用于五味子药材的质量控制。

五味子甲素·乙素及丙素对HaCat细胞氧化损伤的保护作用研究

[目的]探讨五味子甲素、乙素及丙素对人皮肤细胞衰老作用的影响,为开发北五味子抗皮肤衰老产品奠定基础。[方法]通过H2O2造成HaCat细胞氧化损伤衰老模型,采用噻唑蓝(MTT)法测定HaCat细胞增殖情况。[结果]浓度50μmol/L的H2O2对细胞无明显抑制作用,浓度100和200μmol/L组有明显抑制作用。H2O2组细胞的存活率为(71.667±0.862)%。浓度100和200μmol/L五味子甲素组细胞的存活率分别为(76.400±0.656)%和(82.367±0.666)%;浓度100和200μmol/L五味子乙素组细胞的存活率分别为(86.300±0.721)%和(88.900±0.985)%;浓度100和200μmol/L五味子丙素组细胞的存活率分别为(86.767±0.551)%和(88.067±0.873)%。[结论]五味子甲素、乙素及丙素对H2O2造成细胞的氧化损伤均具有一定的保护作用,以五味子乙素和丙素的效果较好。

Asymmetric Synthesis of (S)-Dimethyl-4,4′-dimethoxy-5,6,5′,6′-dimethenedioxybiphenyl-2,2′-dicarboxylate

(S)-Dimethyl-4, 4′-dimethoxy-5, 6, 5′, 6′-dimethenedioxy-biphenyl-2, 2′-dicarbonylatewas synthesized in reasonable yield through a series of reactions, including chiral oxazoline-mediated asymmetric Ullmann coupling, from methyl 2-bromo-5-methoxy-3, 4-methenedioxy-benzoate.

双环醇、联苯双酯、五味子丙素的UHPLC-ESI-Q-TOF-MS分析及其应用

目的:分析双环醇、联苯双酯和五味子丙素的质谱裂解规律,鉴定双环醇原料药中的杂质。方法:采用超高效液相色谱-电喷雾-四极杆-飞行时间质谱法,以电喷雾电离源为离子源,在正离子模式下,利用飞行时间质谱对双环醇、联苯双酯和五味子丙素的准分子离子及其特征碎片离子信息进行分析,根据碎片质量变化推测可能的裂解途径,分析总结其质谱裂解规律;双环醇原料药样品首先通过液相色谱分离,寻找其中的杂质峰,然后利用质谱对杂质峰进行分析,结合裂解规律辅助鉴定杂质的结构。结果:3种化合物在正离子模式下均产生[M+H]+的准分子离子,经碰撞诱导解离后发生C—O键、C—C键的简单断裂以及氧环的开环断裂,并伴随以CH2O为主,CO2、CO、CHO为辅的中性碎片丢失,解离均集中在中高质量区。3种化合物只有支链结构和/或氧环结构发生C—C、C—O键的简单断裂,而联苯母核结构未曾改变。其中,双环醇由于含有苄位羟基结构,故在酸性流动相条件下,会以[M+H-H2O]+的形式稳定存在;五味子丙素因其含有八元环结构,故碰撞电压下率先出现开环,继而再出现中性碎片丢失。双环醇原料药中杂质的二级质谱与联苯双酯的二级碎片表现出的质谱裂解行为基本一致。结论:本研究归纳了3种五味子衍生物的质谱裂解规律。双环醇原料药中出现的杂质可能为联苯双酯。

RRLC法同时测定天王补心丸中6种木脂素类成分的含量

目的:建立快速高分辩液相色谱(RRLC)同时测定天王补心丸中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素6种主要木脂素成分的方法。方法:采用TSK gel ODS-140HTP(50 mm×2.1 mm,2.3μm)色谱柱;流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速0.3 m L·min-1;柱温30℃;检测波长250 nm,进样量10μL。结果:6种被测木脂素成分分离度良好;各成分质量与峰面积在测定范围内均呈良好的线性关系(r>0.9990),重复性良好;平均回收率分别为100.1%、99.3%、97.8%、99.1%、98.8%、97.5%,RSD分别为1.1%、1.8%、2.3%、2.5%、1.6%、2.1%。结论:此方法简便、准确、重复性好,经方法学验证可用于检测天王补心丸的质量。

五味子素A、B和五味子丙素的密度泛函研究

采用密度泛函B3LYP方法在6-31G基组水平上对五味子素A、B及五味子丙素3种五味子提取物进行了优化计算,并从平衡几何构型、前线分子轨道、净电荷分布等方面对计算结果做了比较.计算结果表明分子中的二氧五环对分子的药物活性具有较大影响.随着分子中二氧五环数目的增加,分子中联苯环扭转角减小,前线轨道能级和能级差都减小,联苯环上正电荷增加,由此可判断3种分子活性顺序应为五味子丙素>五味子素B>五味子素A.

五味子藤茎的化学成分研究

目的:研究五味子(Schisandra chinensis(Turcz.)Baill)藤茎化学成分。方法:利用硅胶柱色谱、ODS反相柱色谱结合HPLC技术,对五味子藤茎95%乙醇提取物进行分离纯化,并通过NMR和MS等波谱学方法鉴定结构。结果:分离鉴定了8个化合物,分别为arisanschinin M(1)、Schisandroside A(2)、Schisandroside B(3)、Schisandroside D(4)、五味子丙素(5)、五味子乙素(6)、戈米辛N(7)、南五味子酸(8)。结论:化合物1为首次从该种植物中分离得到。

乙肝颗粒剂4种提取方法提取液的成分比较

目的 :选择乙肝颗粒剂方药的提取工艺。方法 :以黄芪甲苷、虎杖苷、柴胡皂苷C、五味子乙素及干浸膏为指标 ,采用半仿生提取法 (简称SBE法 )、半仿生提取醇沉法 (简称SBAE法 )、水提取法 (简称WE法 )和水提醇沉法 (简称WAE法 )进行比较研究。结果 :5个指标综合评价Y值为 :SBE法 >SBAE法 >WE法 >WAE法。结论 :乙肝颗粒剂以采用SBE法提取为佳。

五味子丙素缓解高脂饮食喂养ApoE-/-小鼠的动脉粥样硬化与炎症

目的探究五味子丙素(五味子醇C,schisandrin C,Sch C)对高脂饮食喂养ApoE-/-小鼠的动脉粥样硬化和炎症的影响。方法将ApoE-/-小鼠分为高脂饮食喂养组(HFD)、高脂饮食喂养+五味子丙素组(HFD+Sch C),高脂饮食和药物同时给予,12周后,处死小鼠,收集动脉组织。采用RT-qPCR法检测IL-6、TNF-α、ICAM-1和β-actin的mRNA表达;油红O染色检测主动脉根部油脂变化;生化试剂盒检测血液中的血脂水平。Western blot法检测动脉的IκB-α磷酸化与表达。结果与HFD组比较,五味子丙素治疗组动脉粥样硬化斑块面积减少(P <0. 05),但五味子丙素不影响血脂水平;与HFD组比较,五味子丙素治疗组动脉中TNF-α、IL-6和ICAM-1的mRNA表达水平和IκB-α磷酸化均显著降低(P <0. 05)。结论五味子丙素能有效缓解高脂饮食喂养诱导的小鼠动脉粥样硬化,并伴随缓解动脉炎症反应。

五味子乙素对BaP致HTR8-SVneo细胞损伤的保护作用及机制

目的:研究五味子乙素(Schisandrin B,Sch B)预防苯并芘(Ba P)致人绒毛膜外滋养层细胞(HTR8-SVneo)损伤的作用机制。方法:通过新型四唑化合物(MTS)法观察和测定,最终选取0.5,1,2μmol/L Sch B分别作用HTR8-SVneo细胞24 h后再给予20μmol/L Bap染毒处理24 h,MTS检测各组细胞生长情况;JC-1荧光染色法观察各组线粒体膜电位荧光强度变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞内促凋亡蛋白(Bax)、细胞色素C(cytochromec,cyt-c)蛋白浓度;蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组的凋亡蛋白(Caspase-9)。结果:1Ba P染毒组OD值为1.187±0.015,0.5,1,2μmol/L Sch B预保护24 h后的OD值分别为1.483±0.022、1.489±0.048和1.531±0.240,差异有统计学意义(P<0.05)。2Ba P染毒组线粒体荧光强度弱,0.5,1,2μmol/L Sch B预保护24 h后的荧光强度较强,差异有统计学意义(P<0.05)。3Ba P染毒组Bax、cyt-c蛋白浓度升高,0.5,1,2μmol/L Sch B预保护24 h后细胞内Bax、cyt-c蛋白浓度降低,差异有统计学意义(P<0.05)。4Ba P染毒组细胞内caspase-9蛋白表达升高,0.5,1,2μmol/L Sch B预保护24 h后细胞内caspase-9蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Sch B可以预防Ba P致HTR8-SVneo细胞损伤,其作用机制可能与抗线粒体途径有关。

五味子丙素抑制脂多糖诱导心肌细胞的炎症反应与细胞焦亡的作用及机制研究

目的:探究五味子丙素(SchC)对脂多糖(LPS)诱导心肌细胞HL-1炎症反应与细胞焦亡的影响。方法:培养小鼠心肌细胞HL-1,将其分为空白对照组、模型组(LPS)、LPS+SchC组。SchC预处理1 h后,分别以LPS刺激24 h或48 h,ELISA法提取细胞培养液上清液,检测细胞因子IL-1β、HMGB1和TNF-α的分泌,MTT法收集细胞检测细胞活力,Western Blot检测cleaved-Caspase1、GSDMD-N和NLRP3的表达;将HL-1细胞分为空白对照组、模型组(LPS)、LPS+siGSDMD(GSDMD siRNA)组、LPS+siGSDMD+SchC组,给药预处理1 h后,LPS刺激24 h,收集细胞培养液上清液,ELISA法检测IL-1β的分泌,MTT法检测细胞活力。结果:与LPS组比较,LPS+SchC组细胞活力得到改善(P<0.05),IL-1β、HMGB1和TNF-α的分泌均显著降低(P<0.05);Western Blot结果表明,与LPS组比较,LPS+SchC组的cleaved-Caspase1、GSDMD-N段和NLRP3蛋白水平显著降低(P<0.05);ELISA和MTT结果表明,与LPS组比较,LPS+siGSDMD组IL-1β的分泌显著降低(P<0.05)且细胞活力显著得到改善(P<0.01),然而LPS+siGSDMD组与LPS+siGSDMD+SchC组的IL-1β分泌水平和细胞活力并无显著性差异。结论:五味子丙素能有效缓解LPS诱导HL-1的炎症反应和细胞焦亡。

五味子丙素体外抗胃癌细胞系AGS的活性

目的:探讨中药五味子中五味子丙素的体外抗胃癌活性。方法:在胃癌细胞AGS中,采用MTT法和集落形成实验测定五味子丙素对细胞的生长抑制活性,采用流式细胞仪测定其诱导细胞凋亡的活性,采用Western blot法测定其对凋亡蛋白表达的影响。并用MTT法测定其对不良反应较大的传统胃癌一线化疗药物5-FU的增敏活性。结果:五味子丙素对胃癌细胞AGS生长抑制的IC50为(35.73±0.28)μmol/L,并能浓度剂量依赖性地抑制细胞集落形成,诱导细胞凋亡,上调凋亡蛋白Cleaved-PARP,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.05)。结论:五味子丙素对胃癌细胞具有较好的抑制生长和诱导凋亡的活性。

五味子功用考证

五味子历代功效和临床应用侧重不同。汉代已常用于收敛肺气,治肺失宣降咳喘等。魏晋南北朝应用范围扩大,提出可"补虚劳,生肌"。唐代还用于益气生津、补肾助阳。宋代同前主要治疗肺系疾病,但以五味子为主的新方大量涌现,敛肺止咳之功仍被重用。金元时期收敛之功不仅局限于收敛肺气,特色是止泻。明代提出北五味子功擅滋补,南五味子适用于风寒咳嗽;并详细论述了生熟之别及性味与功效关系。清代五味子功效发展达到新阶段,还用于安神。药理研究明确主要成分为五味子素、去氧五味子素、γ-五味子素、五味子醇、挥发油、甾醇、维生素C和E、鞣质等,在糖尿病尤其是2型糖尿病的治疗上有一定的疗效。

HPLC法同时测定五味子饮片中6个木脂素类成分的含量

目的:建立HPLC法同时测定五味子中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和五味子丙素6个木脂素类成分含量。方法:采用依利特C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-水(B),梯度洗脱(0～17min,50%A;17～25 min,50%A→55%A;25～30 min,55%A→75%A;30～35 min,75%A;35～40 min,75%A→65%A;40～45min,65%A→50%A),流速1.0 mL.min-1,检测波长217 nm,柱温30℃。结果:6个被测木脂素类成分分离度良好;各成分质量浓度与峰面积在测定范围内均呈良好的线性关系(r>0.9995);平均加样回收率(n=9)分别为99.8%,100.7%,101.6%,100.3%,100.5%,100.4%。结论:本研究所建立的HPLC方法稳定可靠,简便可行,可用于五味子中木脂素类成分的同时定量分析,为五味子药材及其炮制品的质量评价和质量控制奠定了基础。

RP-HPLC法测定保肝丸中五味子甲、乙、丙素及熊果酸

目的 建立RP-HPLC法测定保肝丸中五味子甲、乙、丙素及熊果酸的量,对保肝丸的制剂质量提供保障。方法 采用ZORBAX SB-C_（18）（150 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液（67：33）,体积流量1.0mL/min;紫外检测波长为210 nm;柱温30℃;进样量10μL。结果 五味子甲、乙、丙素及熊果酸的最低检测质量浓度分别为0.016、0.019、0.020、0.025 mg/L,线性范围分别为3.906-250.000、5.323-340.000、3.225-205.000、5.323-340.000 mg/L。供试样品中五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素及熊果酸的平均回收率分别为100.79%、101.09%、101.26%、101.16%;精密度RSD分别为1.76%、1.69%、1.80%、1.86%;重复性试验RSD分别为1.77%、1.66%、1.49%、1.56%;稳定性试验分别为1.61%、1.39%、1.60%、1.56%。保肝丸（0.560 mg）含五味子甲、乙、丙素及熊果酸平均量分别为0.444、1.066、0.3125、1.068μg/丸。结论 该方法简便、灵敏度高、重复性好、回收率高,是检测五味子甲、乙、丙素及熊果酸质量浓度的可信方法。

基于HPLC指纹图谱和多成分同时测定的护肝剂质量评价研究

目的建立护肝剂的HPLC指纹图谱,并对马钱素、芍药苷、野黄芩苷、黄芩苷、黄芩素、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素和熊果酸9种成分同时测定,为护肝剂的质量控制提供科学依据。方法采用安捷伦Zorbax SB-C18柱(150mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;紫外检测波长236、280、210 nm;进样量5μL;建立10批护肝剂HPLC指纹图谱共有模式,并采用化学计量学方法分析,同时对其9种有效成分进行定量测定。结果建立了护肝剂的HPLC指纹图谱,标识出39个共有峰,相似度均在0.9以上。系统聚类和主成分分析将样本大致分为4类。多成分定量分析条件通过方法学考察,平均加样回收率在95.13%～104.78%;10批护肝剂中含马钱素、芍药苷、野黄芩苷、黄芩苷、黄芩素、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素和熊果酸的平均质量浓度分别在216.3～223.0、126.1～137.1、144.7～149.0、1623.1～1992.7、481.9～520.0、14.9～18.7、33.8～37.0、2.9～3.7、39.7～43.6 mg/L。结论 HPLC指纹图谱结合多成分同时测定的方法,快速、简便、重复性好,可作为护肝剂的质量控制方法。

五味子咀嚼片的HPLC-DAD指纹图谱研究

目的建立五味子咀嚼片的HPLC-DAD指纹图谱,对10个不同批次的五味子咀嚼片进行质量评价。方法使用Luna C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,乙腈-0.05%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,柱温35℃,检测波长220 nm,进样量20μL。结果通过测定10批五味子咀嚼片的HPLC-DAD图谱,建立了指纹图谱的共有模式,HPLC-DAD指纹图谱共有峰39个,相似度为0.914-0.999;确认了五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子乙素、五味子丙素、丹参素钠、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮IIA、原儿茶醛、木犀草苷、蒙花苷。结论方法准确、可靠、重现性好,为评价五味子咀嚼片的质量提供了科学依据。

五味子丙素立体异构体ECD谱的理论研究

采用密度泛函理论(DFT)方法和极化连续介质模型(PCM),在B3LYP/6-311++G**水平上对五味子丙素的一个立体异构体的基态几何构型进行了优化;以优化得到的稳定构型为基础,采用含时密度泛函理论(TD-DFT)方法,在相同基组水平进行了电子圆二色谱(ECD)研究,根据计算获得的电子跃迁吸收波长(λ)和电子旋转强度(R)拟合得到了理论ECD谱。理论研究发现:甲醇溶液中,2个苯环之间扭曲形成的二面角∠C(2)-C(1)-C(8)-C(7)约为64°;计算获得的理论ECD谱吸收峰略红移,各谱带形状与实验谱吻合较好。通过对相关跃迁性质的分析发现,理论ECD谱的吸收峰1主要由自于HOMO-2→LUMO和HOMO-2→LUMO+1的电子跃迁贡献;吸收峰2的吸收主要由HOMO→LUMO的电子跃迁贡献。这些结论对深入理解五味子丙素异构体的电子结构和手征光学性质具有一定的科学意义。

UPLC-MS/MS法同时测定扶正化瘀胶囊中12种成分

目的建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定扶正化瘀胶囊(FHC)中12种成分(丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、五味子醇甲、五味子醇乙、隐丹参酮、五味子甲素、丹参酮ⅡA、五味子乙素、五味子丙素)的定量方法。方法选用Acquity UPLCHSS T3色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量为0.3 mL/min,柱温45℃。质谱条件:ESI源,采用多反应检测模式(MRM),以保留时间及定性离子对之间的相对丰度定性,以定量离子对峰面积进行定量。结果 12种成分在进样质量浓度范围内呈现良好的线性关系(r>0.999 0),该方法回收率在97.1%～107%,RSD<2.0%(n=5)。结论该方法快速、简便、重复性好,可用于同时测定FHC中多种成分。