我国不同地区东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch)毒在三种类型电泳中的比较研究

用SDS—不连续聚丙烯酰胺凝胶板电泳、pH4.5—不连续聚丙烯酰胺凝胶板电泳和聚丙烯酰胺凝胶圆盘等电聚焦电泳,分离我国不同地区东亚钳蝎毒。其图谱表明:不同产地的东亚钳蝎毒蛋白的种类及含量存在一定的差异,地区相近,差异较小,反之亦然。

东亚钳蝎蝎毒蛋白的分离纯化

本文用离子交换层析、凝胶过滤等分离纯化技术从东亚钳蝎蝎毒中首次得到１个分子量为２６６２５的蝎毒蛋白，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳显示为一条带，激光扫描纯度为９４％。结果说明，蝎毒成分非常复杂，其广泛的药理学性质可能与此有关。

重组CD_(13)单链抗体和蝎毒素多肽AGAP融合蛋白真核表达及对NB4细胞的靶向杀伤作用

目的:本研究应用基因工程技术方法,构建含重组编码CD13单链抗体和蝎毒素镇痛抗肿瘤缬精甘肽(analgesic antitumoral peptide,AGAP)融合蛋白基因的表达载体,并研究CD13-AGAP融合蛋白对CD13阳性白血病细胞NB4影响。方法:克隆东亚钳蝎活性肽AGAP的基因,插入真核表达载体pSecTag2/CD13/RFP,得到pSecTag2/CD13/AGAP重组真核表达载体。酶切及测序鉴定后,脂质体介导重组质粒转染293T细胞,通过RT-PCR和免疫印迹方法检测融合基因和蛋白的表达。纯化融合蛋白,作用NB4细胞,CCK8检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞周期。结果:酶切及测序结果证实pSecTag2/CD13/AGAP重组真核表达载体构建成功,转染293T细胞后,RT-PCR和免疫印迹方法结果证实重组质粒得到有效表达,并纯化真核表达融合蛋白CD13-AGAP对血液肿瘤CD13阳性白血病细胞NB4有一定的生长抑制作用,并且使细胞周期G1期阻滞,S期减少。结论:成功构建了融合蛋白真核表达载体pSecTag2/CD13/AGAP,并在293T细胞中成功表达,进一步证实融合蛋白对CD13阳性白血病细胞NB4有杀伤作用。

陕北产东亚钳蝎毒液和体液的体外抑菌活性

以大肠杆菌、枯草杆菌及金黄色葡萄球菌3种细菌为指示菌,采用抑菌圈法通过体外抑菌观察,探讨了陕北产蝎毒液的体外抑菌效应,并与蝎体液诱导物和喹诺酮类抗菌药进行了比较。结果显示,蝎毒液对革兰氏阴性指示菌大肠杆菌的抑制效果不明显,对革兰氏阳性指示菌枯草杆菌和金黄色葡萄球菌有明显的抑制,最大抑菌圈分别可达1.05±0.18 cm和0.87±0.09 cm,而经大肠杆菌诱导后的蝎体液对3种菌都有明显的抑制效果。这些结果表明,蝎毒液具有一定的选择性抗菌效应,大肠杆菌诱导后的蝎体液也有抗菌效应,但选择性较弱。

蝎毒对心脑血管药理作用的研究

本文介绍了课题研究的主要内容,手擒电击法采蝎毒速度快,产量高,小鼠iv和ip蝎毒的LD_(50)分别为1.72±0.16mg/kg和2.74±0.06mg/kg,家兔iv0.21mg/kg蝎毒凝血时间明显延长(p<0.05),但对血液流变学指标无明显影响(p>0.05);3×10^(-4)mg/ml蝎毒对离体家兔右心房有正性肌力作用(p<0.01),可收缩离体犬主动脉、肾动脉和椎动脉条(p<0.01),并引起动脉条的自发性收缩,iv0.06mg/kg蝎毒使麻醉犬和猫的血压升高(p<0.01),蝎毒的升压作用和缩血管作用能被妥拉苏林阻断,iv0.18mg/ks以上剂量蝎毒,动物血压呈先降后升的双相变化;家兔iv0.5～0.75mg/kg蝎毒,由心电图可见心率减慢(p<0.01),出现部分房室传导阻滞和心室内传导阻滞,此作用能为阿托品减弱,经STI测定蝎毒能延长LVET,使PEP/LVET比值减少;家兔脑室内注射蝎毒6×10^(-3)mg/kg时,血压呈先降后升双相变化(p<0.05),心率减慢(p<0.01)其结果与iv蝎毒一致,且剂量显著减少。

东亚钳蝎毒对动物血压作用的研究

研究了山东泗水东亚钳蝎毒对麻醉猫和犬血压的影响。实验结果表明iv0.06mg/kg蝎毒明显升高猫和犬的血压(P<0.05或P<0.01),妥拉苏林能拮抗蝎毒的升压作用。iv0.18mg/kg蝎毒血压呈先降后升双相变化。

东亚钳蝎毒灌肠治疗大肠癌前后肿瘤组织中DNA参数的变化

了解大肠癌组织经东亚钳蝎毒灌肠前后，其ＤＮＡ参数的变化。方法对２０例大肠癌患者用东亚钳蝎毒灌肠治疗后，用ＣＭＩＡＳ真彩色医学图像分析系统测定肿瘤细胞核ＤＮＡ参数。结果１．ＤＮＡ指数均值（ＤＩ）治疗前为１．９２±０．１９，治疗后为１．５８±０．２４（Ｐ＜０．０１）。２．ＤＮＡ倍体在治疗后，≥５倍体者明显减少，二倍体明显增多（Ｐ＜０．０５）。３．细胞核面积的均值，核周长的均值和细胞浆面积均值在治疗后明显减少（Ｐ＜０．０５）。同期随机选１０例直肠癌患者用氟尿嘧啶灌肠，治疗前后各参数值虽有变化，但无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论东亚钳蝎毒对大肠癌有抑杀作用，且优于氟尿嘧啶。

不同地域东亚钳蝎蝎毒的双向电泳鉴定

目的利用蛋白质组学中双向电泳技术,定性鉴定、分析不同地域东亚钳蝎蝎毒活性的差别,探索不同产地蝎毒的蛋白质组成及功能差异。方法将不同产地的冷冻干燥蝎毒粉经溶解、除盐、浓缩后测定蝎毒蛋白质含量,进行定量的蝎毒鉴定。采用pH梯度等电聚焦和SDS-PAGE凝胶电泳技术分离蝎毒蛋白质。银染后通过凝胶成像系统获得双向电泳凝胶图谱,用PD Quest图像分析软件比较分析,确定差异的特征蛋白点,从而定性鉴定不同产地蝎毒。结果获得3个样品的蛋白质指纹图谱。分别检测出80,69和77个点,特征差异蛋白点依次为56,46和55个。结论不同产地的东亚钳蝎蝎毒通过双向电泳分离蛋白后,表现出明显不同的蛋白点分布。

从朦胧走向清晰——我国东亚钳蝎及其有效成分研究进展中的启示

本文叙述了我国东亚钳蝎及其有效成分的研究进展。

东亚钳蝎毒素的镇痛作用与吗啡镇痛作用的比较

用辐射热甩尾反射测定大鼠痛阈的方法，观察并比较了东亚钳蝎毒素和吗啡的镇痛作用。结果表明：向侧脑室内注射２μＬ或肌肉注射０．０５μＬ、０．０１％蝎毒液的镇痛作用分别比相同给药途径、同浓度、同剂量吗啡的镇痛作用强，二者差异非常显著，Ｐ＜０．０ｌ。侧脑室内注射０．０３％蝎毒液２μＬ的镇痛作用比同浓度、同剂量吗啡的镇痛作用梢强，但无显著差异，Ｐ＞０．０５。蝎毒经肌肉注射后在较短的时间内即可使大鼠痛阈明显升高。证明蝎毒可通过血脑屏障进入中枢神经系统，产生镇痛作用。

蝎毒对家兔心电图的影响

观察了山东泗水产东亚钳蝎对清醒家兔心电图的作用。结果表明静脉注射蝎毒溶液(0.75mg/kg)引起R—R间期显著延长(p<0.01),心率减慢,而对P—R间期和QRS波时程无明显影响。大剂量静注蝎毒出现窦房结活动抑制,房室传导阻滞,室性心律和心室内传导阻滞等心律失常。

东亚钳蝎毒灌肠治疗大肠癌前后肿瘤组织中DNA参数的变化

为研究东亚钳蝎毒灌肠治疗大肠癌前后肿瘤组织中DNA参数的变化,采用CMIAS真彩色医学图像分析系统对20例大肠癌患者用东亚钳蝎毒灌肠治疗后肿瘤细胞核DNA参数测定,结果发现:①DNA指数均值(DI):治疗前DI值1.92±0.19。治疗后DI值1.58+0.24,治疗后同治疗前比较DI值明显缩小(P<0.01)。②DNA倍体类型的分布:治疗后与治疗前比较,≥5倍体明显减少,二倍体明显增多(P<0.05)。③细胞核形态参数:治疗后与治疗前比较,细胞核面积的均值,核周长的均值和细胞浆面积均值明显减少,有显著性差异(P<0.05)。同期随机选10例直肠癌患者用氟脲嘧啶灌肠,治疗前后各参数值虽有变化,但无统计学意义(P>0.05)。说明东亚钳蝎毒对大肠癌有抑杀作用,且优于氟脲嘧啶。